霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin表达的影响及机制

目的探讨霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil,MMF)对糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin蛋白表达的影响及机制。方法建立链脲佐菌素诱导的单侧肾切除大鼠糖尿病模型,将模型大鼠随机分成糖尿病组(DM组)与MMF给药组(DM+MMF组,10mg·kg-1.d-1灌胃给药),另设对照组(C组)。8wk末检测血糖、24h尿白蛋白排泄率(AER)变化,通过免疫组化方法检测肾组织ED-1表达,Westernblot方法检测肾组织Nephrin、Podocin、白细胞介素-1(IL-1)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达。结果DM组大鼠尿AER明显高于C组(P<0.01),DM+MMF组大鼠尿AER明显低于DM组(P<0.05)。DM组大鼠肾小球ED-1阳性细胞数明显高于C组(P<0.01),DM+MMF组肾小球巨噬细胞浸润明显低于DM组(P<0.05)。DM组肾组织Nephrin与Podocin表达较C组分别下降80.2%与65.1%,MMF可明显恢复肾组织Nephrin与Podocin表达(P<0.01)。DM组肾组织IL-1与TNF-α表达较C组分别增加2.8倍与3.8倍,MMF可明显降低肾组织IL-1与TNF-α表达(P<0.01)。结论MMF可能通过恢复糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin蛋白表达减少尿白蛋白排泄。     

鬼针草总黄酮治疗血吸虫病肝纤维化的实验研究

目的:观察鬼针草总黄酮(total flavones of Bi-dens pilosa L,TFB)对血吸虫病肝纤维化的治疗作用。方法:将小鼠随机分为6组:正常对照组,模型组,治疗组(TFB57.5、115、230mg/kg)和秋水仙碱0.15mg/kg阳性药对照组(n=10)。除正常对照组外,其余各组每只小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴诱导肝纤维化模型,并于感染6周后灌胃(i.g.)相应的受试药物,正常组和模型组小鼠灌胃等容量生理盐水,持续治疗8周。实验结束后,取小鼠血,测血清中ALT、AST、总蛋白(TP)及白蛋白(ALB)含量;取小鼠肝脾称重,计算肝、脾指数,并观察小鼠肝脏形态;同时取部分肝组织进行虫卵计数;另取固定部位肝组织作病理组织学检查。结果:TFB57.5mg/kg显著降低血吸虫病肝纤维化小鼠的肝、脾指数;TFB115、230mg/kg显著降低小鼠血清中ALT、AST、ALB含量;明显改善肝脏大体形态。病理组织学检测结果显示TFB115、230mg/kg明显改善血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织结构,减轻肝纤维化程度,降低血吸虫肝纤维化小鼠病理评分。结论:TFB对血吸虫病肝纤维化有明显治疗作用。     

重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断研究进展

目前,用于血吸虫病免疫诊断的最常用的抗原是成虫抗原和虫卵抗原,由于这两种粗抗原的成分复杂,且与其他寄生虫感染血清存在着较严重的交叉反应,血吸虫病诊断的特异性不高,生产的试剂不宜标准化。近年来,随着分子生物学的迅猛发展,很多生物学技术已经用于寄生虫学(病)研究。运用分子克隆等技术可以获得大量纯化的     

多重聚合酶链反应用于人血小板抗原-2、-4、-5系统基因分型的研究

目的 建立用于检测人血小板抗原（HPA）,2、-4、-5系统基因型的多重聚合酶链反应（PCR）。方法 在一个反应体系中同时扩增HPA-2、-4、-5系统特异性目的基因片段。用琼脂糖凝胶电泳确定HPA-2、-4、-5系统基因型;再用多重PCR对75名健康的单采血小板者进行HPA-2、-4、-5系统基因分型,分型结果与PCR-序列特异性引物（PCR—SSP）获得的结果进行比较。结果 HPA-2、-4、-5系统分型的结果为：70名为2a／2a型,5名为2a／2b型;73名为4a／4a型,2名为4a／4b型;66名为5a／5a型,9名为5a／5b型。未发现2b／2b、4b／4b及5b／5b纯合子个体。多重PCR结果与PCR-SSP方法获得的结果一致。结论 多重PCR具有操作简便、快速、准确等特点,可以用于血小板血型抗原基因分型。     

血吸虫感染抗性人血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

目的分析血吸虫感染抗性人血清中起免疫保护作用抗体针对的日本血吸虫蛋白抗原谱,为日本血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原分子。方法采集血吸虫流行病区感染抗性人血清,免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆核苷酸进行序列分析,并利用软件对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果共筛选出29个持续阳性克隆,对其进行测序,获得25个基因,包括5种已知基因(其中日本血吸虫肌球蛋白12个、丝氨酸蛋白酶抑制剂2个、细胞色素b1个、延伸因子1-α1个和线粒体编码区1个)和5个未知基因,软件分析显示不同抗原分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能编码潜在的日本血吸虫病疫苗分子,其中日本血吸虫肌球蛋白为主要抗感染蛋白分子。     

日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的克隆与表达

目的获得日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达蛋白。方法根据GenBank中日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂的序列设计引物,以cDNA为模板聚合酶链反应(PCR)扩增该基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白。结果成功克隆了具有完整开放阅读框的日本血吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂重组质粒,获得相对分子质量约44×103的目的蛋白。结论成功地克隆表达了丝氨酸蛋白酶抑制剂,为进一步研究该蛋白的特性、功能及免疫保护作用奠定了基础。     

日本血吸虫感染小鼠肝脏组织纤维化染色方法的比较

目的 比较Van-Gieson氏染色和Masson氏三色染色法用于日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化染色的效果.方法 建立日本血吸虫感染小鼠肝脏组织纤维化模型,取肝脏标本,常规切片,进行Van-Gieson氏染色和Masson氏三色染色,应用图像分析软件统计虫卵肉芽肿纤维化面积.结果 染色时间为3 ～7 min时,2种方法显示肉芽肿纤维化面积差异无统计学意义(P＞0.05);染色时间为10 min时,由于非特异性因素使得Masson氏染色法着色面积明显大于Van-Gieson氏染色法,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Van-Gieson氏染色法比Masson氏三色操作过程相对简单,易于掌握,染色结果稳定、可靠,可以作为评价日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化程度的较好染色方法.     

免疫酶染色试验在班氏丝虫病诊断中的应用

应用马来丝虫成虫冰冻切片抗原作IEST。233例班氏丝虫患者IgG和IgM阳性率分别为94.0％和82.4％,其中微丝蚴血症者223例,IgG和IgM阳性率分别为94.2％和83.9％;该两种抗体总阳性符合率为96.0％。165名献血员IgG和IgM假阳性率分别为6.1％和1.2％。基本消灭丝虫病地区6～15与1～5岁年龄组的抗体水平无显著性差异,且当地未检出微丝蚴血症者,显示丝虫病传播基本阻断;而丝虫病流行区6～15岁年龄组抗体水平接近高峰,表明当地丝虫病仍在传播。提示以6～15岁年龄组人群特异性抗体水平变化与其他年龄组互相比较,可用于丝虫病流行病学监测。