PEG沉淀结合碱裂解法提取DNA可消除肝素对PCR检测结果的影响

乙型肝炎病毒(HBV)感染的判断主要依赖于血清特异性抗原抗体和HBV DNA定量的检测。其中外周血中HBV DNA定量是病毒复制最直接和可靠的标志,对乙肝治疗效果的评价和预后也有重要的参考价值。临床上常采取全血或血浆作为检测标本,由于抗凝血液标本中可能存在着抑制PCR的因子,因此     

浅析糖尿病并发症患者血清镁测定及临床意义

目的探讨血清镁离子(magnesium,Mg2 )水平在糖尿病中的临床意义。方法利用日立7170全自动生化分析仪对69例糖尿病患者(其中无并发症组23例和有并发症组46例)与对照组85例健康者的血清镁离子水平进行测定比较。结果69例糖尿病患者组的血清镁离子水平均不同程度低于正常对照组,尤其以有并发症组镁离子水平更低。结论镁离子缺乏是引起糖尿病代谢紊乱的原因之一,提示糖尿病患者在监测血糖的同时,应加强对血清镁离子水平的监测,以便于指导临床用药和判断预后。     

肝素抗凝血对实时荧光定量PCR技术测定HBV DNA结果的影响

乙型肝炎病毒(HBV)感染的判断主要依赖于血清特异性抗原抗体和HBV DNA定量的检测,其中外周血中HBVDNA定量足病毒复制最直接和可靠的标志,对乙肝治疗效果的评价和预后也有重要的参考价值。临床上常采取全血或血浆用于检测标本,由于血液标本中可能存在着抑制PCR的因子,因此在进行PCR前需纯化血液标本中的核酸,建立一种简便易行的血液标本制备方法是有意义的。通常认为用于PCR的全血标本通常首选乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝,不能使用肝素抗凝[1],认为肝素是Taq酶的强抑制剂,而且在其后的核酸提取步骤中很难去除[2],一些试剂厂家…     

乙肝病毒突变位点的寡核苷酸与肽核酸阵列杂交检测

目的：比较利用寡核苷酸阵列和肽核酸阵列检测乙肝病毒突变位点。方法：针对乙肝病毒常见的1762A-T与1764G-A联合突变、1858C-T、 1896G-A 3个突变位点,设计寡脱氧核苷酸和肽核酸检测探针,探针经固定后分别与不对称PCR荧光标记的靶DNA杂交,扫描分析荧光信号强度,DNA序列分析3位点的变异情况。结果：对于寡核苷酸芯片,1762与1764联合位点、1858以及1896位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为1.44、1/1.24、1.05。对于肽核酸芯片,相应位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为2.8、1/3.02、1.71。DNA序列分析结果表明该样本中1858位点为突变位点,1896以及1762与1764联合位点不存在突变。结论：与寡脱氧核苷酸探针相比,肽核酸与靶DNA杂交结合能力和识别单碱基错配能力均高于相应的寡脱氧核苷酸,二者杂交结果与测序结果一致。     

乙型肝炎病毒基因型、拉米夫定耐药突变的RFLP检测及临床相关性分析

目的对乙型肝炎（简称乙肝）肝病毒进行基因分型,检测患者服用拉米夫定后血清中乙肝病毒突变情况,并进行临床相关性分析。方法设计乙肝病毒突变及基因分型特异性引物和酶切位点,系用限制性片断长度多态性（RFLP）分析法检测突变类型并对乙肝病毒进行基因分型。结果在115份被检测的血清标本中,75份（65%）标本为野生型,18份（15.7%）标本为YIDD突变,10份（8.7%）标本为YVDD突变;在混合型突变中,YIDD+YVDD 存在于6份（5.2%）标本中,YMDD+YIDD存在于4份（3.5%）标本中,2份（1.7%）标本为YMDD+YVDD混合突变型;未检测到YSDD突变型。在180位点的突变检测中,98份（85%）标本为野生型,5份(4.3%)标本为rtL180M,L180M+M204I存在于8份(6.96%)标本中,另4份(3.5%)标本为L180M+M204V混合突变型。在115份标本中,102份标本为C基因型,13份标本为B基因型,未发现其他基因型。通过χ²检验,乙肝病毒YMDD突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间没有相关性(P＞0.05),而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性（P＜0.05）,用药时间越长,发生突变的几率越大。乙肝患者服用拉米夫定后,180位点的突变和204位点突变具有相关性（P＜0.05）。结论采用RFLP分析法可以有效地检测乙肝病毒YMDD突变并对乙肝病毒进行基因分型。     

初诊慢肝患者血清中乙肝病毒DNA载量与血清标志物的关系

目的探讨初诊慢性乙型肝炎血清标志物与HBV DNA的关系。对象与方法采用酶联免疫方法和荧光定量聚合酶链反应分别对512例不同乙肝病人及202例HBeAg阴性、257例HBeAg阳性慢肝病人进行血清标志物、HBV DNA定量检测并分析结果。结果慢肝组有315例(68.9%)病毒颗粒浓度高于107,肝硬化组7例(13.2%)病毒颗粒浓度高于107;HBeAg阳性慢肝组245例(95.3%)患者病毒颗粒含量高浓度,HBeAg阴性慢肝组68例(33.7%)患者病毒颗粒含量在105-7copy/mL区段。结果慢肝组与肝硬化组相比,高浓度病毒以慢肝组中最明显,病情发展至肝硬化期病毒含量多数不高;慢肝病人中不同乙肝血清标志物模式其病毒含量分布特点不同,与HBeAg阳性慢肝组相比HBeAg阴性组体内病毒复制水平低(p<0.01),传染性较前者弱。最常见前C区突变,导致HBeAg阴性CHB病情加重和病毒复制增加。