提高门诊检验服务质量的做法

门诊是医院的重要组成部分,是面向社会的窗口。门诊检验科人流量大,医务人员工作繁忙。更好地为门诊患者服务是一个值得关注的问题。本文通过对硬件、人员及与患者的沟通等因素进行分析,探讨影响门诊检验科服务质量的原因,就门诊工作流程的改进谈体会。     

LIGHT-HVEM—BTLA共信号分子的研究进展

BTLA是新近发现的一个CD28超家族共抑制分子,它的配体不是B7家族成员而是TNF受体超家族成员HVEM。HVEM同时还存在一个TNF超家族的配体,即T细胞上可诱导表达的与HSV的糖蛋白D竞争结合HVEM的淋巴毒素类似物（LIGHT）。HVEM可以作为一个分子开关,通过结合LIGHT或BTLA7E免疫调节中发挥不同的作用。     

铜绿假单胞菌Ⅵ型分泌系统和群体感应系统参与生物被膜形成

目的 探讨铜绿假单胞菌中Ⅵ型分泌系统（T6SS）和群体感应（QS）系统在铜绿假单胞菌生物被膜形成中的作用。方法 将铜绿假单胞菌生物被膜阳性的模式菌株PAO1制备成生物被膜菌和浮游菌。采用实时荧光定量PCR法检测菌株中T6SS相关溶血素共调节蛋白（Hcp）基因Hcp1、Hcp2和Hcp3,QS系统相关基因LasR,胞外多糖相关多糖合成位点基因A（PslA）和菌膜基因A（PelA）,以及Ⅳ型菌毛基因（PilA）和鞭毛蛋白基因（FliC）的表达水平。采用独立样本t检验比较PAO1生物被膜菌与浮游菌中上述基因表达的差异。结果 PAO1生物被膜菌PslA、PelA、PilA和FliC基因的相对表达量均明显高于浮游菌,分别为浮游菌的714、274、604和42倍（P均<0.05）,提示制备的PAO1生物被膜菌形成了具有鞭毛和菌毛结构的成熟生物被膜。PAO1生物被膜菌Hcp1、Hcp2、Hcp3和LasR基因的相对表达量均明显高于浮游菌,分别为浮游菌的1 045、11 268、6 654和1 226倍（P均<0.05）,提示T6SS和QS系统与PAO1菌生物被膜的形成有关。结论 铜绿假单胞菌中T6SS和QS系统可能参与生物被膜形成,其具体调控机制有待进一步研究。     

C反应蛋白测定两种检测系统间结果的比较

目的 对两种不同检测系统测定C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的结果进行比对和偏倚分析,以评价不同检测系统CRP测定结果的可比性。方法 参照美国临床实验室标准研究所(CLSI)EP9-A2文件要求,收集长海医院急诊患者乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K₂)抗凝血50例,同时使用全自动免疫分析仪(Beckman Immage 800)和免疫荧光分析仪(i-CHROMA^TM Reader)检测待测样本中的CRP浓度,评价两种方法检测结果的相关性。结果 使用血浆标本时,两方法相关性良好,回归方程为Y=1.076 5X-3.031 5,R²=0.986。全血测定的回归方程为Y=0.882 6X-1.180 8,R²=0.931 1。对于红细胞压积(HCT)较低的标本(<30.45%)使用纠正公式:全血CRP(纠正后)=全血CRP结果(纠正前)/(1-HCT)。Y(纠正后)=1.006 8X-3.612 2,R²=0.950 9。结论 两种检测系统血浆CRP的测定结果具有可比性,适合临床应用。遇HCT较低的标本时,通过校正公式校正,可提高全血结果的可比性。     

马齿苋对人肝癌皮下瘤裸鼠尿液代谢的影响

目的:从代谢组学层面观察中药马齿苋在人肝癌皮下瘤裸鼠尿液中的代谢物质变化轮廓和不同时间节点代谢产物的异同。方法:使用人肝癌Huh7细胞建立肝癌裸鼠皮下瘤模型,造模成功后,随机将裸鼠分为模型对照组、马齿苋高剂量组、马齿苋低剂量组,同时选用未造模的裸鼠作为正常对照组。分别于第7、14天通过代谢笼收集4组尿液,用正负两种模式进行液相色谱-质谱联用仪检测,通过对尿液代谢物质的筛选、鉴定,寻找出马齿苋抑制裸鼠肝癌皮下瘤生长可能作用的途径或者通路分析。结果:通过对4组裸鼠不同时间点尿液代谢产物的物质分析发现,第7天鉴别出4组尿液之间的代谢产物有17种,第14天4组尿液之间的代谢产物有43种,其中有11种差异物质在第7天和第14天均有,为吡啶甲酸、顺式粘酸、对羟基苯乙酸、己基甘氨酸、3-磷酸甘油、3-羟基十四烷二酸、吡哆胺、3-羟基吡啶甲酸、酪醇、二氢胸腺嘧啶、黄尿酸(P<0.05)。结论:随着服药时间的延长,马齿苋对肝癌皮下瘤裸鼠尿液的代谢干预发挥的作用越大,代谢物质种类增加,而有些物质的干预从开始服用的时候就可能发挥作用;马齿苋对肝癌皮下瘤裸鼠代谢的干预主要表现在其能够调节肝癌裸鼠体内糖酵解及酪氨酸、己基甘氨酸等肿瘤相关氨基酸的代谢,抗氧化应激,调节嘧啶等,从而发挥其抑制肝癌的作用。     

ICOS共刺激途径中MAPK家族信号分子对活动期SLE患者T细胞增殖及细胞因子分泌的作用

目的研究可诱导共刺激分子（ICOS）共刺激途径中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族信号分子对活动期系统性红斑狼疮（SLE）患者T细胞增殖及细胞因子分泌的作用。方法体外分离纯化活动期SLE患者和正常人外周总T细胞、CD4^＋和CD8^＋T细胞，予以抗CD3／抗ICOS刺激，通过Western blot检测信号分子的活化水平，ELISA检测培养上清细胞因子表达，^3H—TdR法测定细胞的增殖水平。结果活动期SLE病人CD4^＋或CD8^＋T细胞经ICOS共刺激后，胞外信号调节激酶（ERK）的活化水平明显低于正常人，CD4^＋或总T细胞分泌IL-2明显低于正常人，PD98059抑制ERK活化可致细胞增殖水平下降与IL-2分泌减少，SB-203580抑制p38MAPK活化可致IL-10分泌减少，细胞因子IL-2能明显促进T细胞的增殖水平。结论活动期SLE患者ICOS共刺激T细胞增殖功能降低与其ERK信号活化障碍所致的IL-2分泌减少密切相关，MAPK家族信号分子在ICOS共刺激不同T细胞亚群增殖与细胞因子分泌中具有不同的作用。     

环境温度对Luminex流式荧光免疫分析法测定糖类抗原242结果的影响

目的 分析定标和测定时不同环境温度下Luminex流式荧光免疫分析法测定糖类抗原242（CA242）结果的差异,评价环境温度对测定结果的影响。方法 选择高值和中值2个不同浓度的标本,分别采用Luminex流式荧光免疫分析法在11个温度点（18.3、20.1、21.5、22.2、24.1、25.0、25.4、26.5、27.4、28.5、30.0℃）重复测定CA242 5次,以定标时环境温度（25℃）下的检测结果的平均值为参比值,计算不同环境温度下检测结果的偏倚。随机选择49例涵盖高、中、低值的标本,分别采用Luminex流式荧光免疫分析法在20、25和30℃下对CA242进行测定,比较测定结果并分析其相关性。结果 中值标本和高值标本在18.3℃下测定结果的偏倚分别为-35.6%和-29.4%。49例标本在20℃下的测定结果与25℃下的测定结果差异有统计学意义（P<0.001）,并且二者具有相关性（回归方程：Y=0.676 9X+0.374 7,R²=0.990 5）;在30℃下的测定结果与25℃下的测定结果差异有统计学意义（P<0.001）,并且二者具有相关性（回归方程：Y=0.896 6X+0.227 0,R²=0.999 4）。结论 环境温度过低或过高会对Luminex流式荧光免疫分析法测定CA242产生负性影响,测定时应使环境温度保持相对恒定且控制在定标温度±4℃范围内。     

4株利奈唑胺不敏感粪肠球菌的23S rRNA基因突变分析

目的研究临床分离的4株利奈唑胺不敏感粪肠球菌的耐药机制。方法采用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统对临床分离的4株粪肠球菌进行鉴定和体外药物敏感性试验,利奈唑胺的最低抑菌浓度(MIC)采用E-test法进行复核。采用聚合酶链反应(PCR)扩增其氯霉素-氟甲砜霉素耐药(cfr)基因、23S r RNA V区和基因组23S r RNA 4个拷贝基因,经测序确定突变情况。结果 4株利奈唑胺不敏感粪肠球菌均未扩增出cfr基因,23S r RNA V区扩增片段连接T载体随机挑选6克隆测序,未发现利奈唑胺耐药最常见的G2576U突变。进一步分别扩增23S r RNA 4个拷贝基因并测序,仅1株菌存在1拷贝G2576U突变,4株菌均存在U2826C突变,另外还分别存在G2389A、U2363C和A2881G突变。U2826C位于23S r RNA可变区边缘,进一步扩增同期临床分离的利奈唑胺敏感粪肠球菌,测序结果显示均存在U2826C突变。结论临床分离的4株利奈唑胺不敏感粪肠球菌的23S r RNA存在散发突变,是其耐药的主要分子机制。     

人巨细胞病毒UL144基因克隆表达及其对树突状细胞功能的影响

目的:构建携带人巨细胞病毒(hCMV) UL144基因的重组腺病毒,研究UL144基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)的功能变化。方法:从hCMV-DNA阳性患者外周血提取cDNA,采用PCR技术扩增出UL144基因。采用AdEasy系统构建携带hCMV UL144基因的重组腺病毒载体pAd-UL144,转染HEK293细胞后包装产生重组腺病毒Ad-UL144。通过RT-PCR检测目的基因的表达。将此重组腺病毒转染小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术检测DC表面分子,采用ELISA技术分析DC培养上清中的细胞因子,采用3H-TdR掺入法检测UL144基因修饰的DC激活T细胞增殖的能力。结果:成功将UL144基因片段克隆至载体上,并经HEK293细胞包装出病毒颗粒,经测定病毒滴度为3×1010 pfu/ml。流式细胞术检测显示,UL144基因修饰的DC表面分子CD80、CD86和I-Ad表达水平低于对照组(P<0.01)。ELISA分析表明,UL144基因修饰的DC分泌TNF-α、IL-6和IL-1β的能力减弱(P<0.05)。UL144基因修饰的DC介导的T细胞增殖功能明显低于DC对照组(P<0.01)。结论:UL144基因修饰的DC具有维持相对未成熟状态的能力,并减弱了对抗原特异性T效应细胞的刺激功能。