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目的研究比较不同生产工艺制备的人血白蛋白(HSA)与地西泮的结合功能。方法在0.1mol/L的地西泮储备液中加入PBS缓冲液,并调整地西泮的终浓度分别为5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μmol/L,用可见-紫外分光光度计于波长254nm处测定各样品的吸光度(A)值并绘制标准曲线。取预处理后的各HSA样品(0.615mmol/L),分别加入终浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mmol/L的地西泮储备液,采用超滤离心法测定超滤透析液中游离地西泮浓度,据此参照公式计算在地西泮浓度为0.1mmol/L时HSA与地西泮的结合率,以及各HSA样品与地西泮之间的结合常数。结果标准曲线显示地西泮浓度与A254值呈线性关系。各HSA样品与地西泮结合率的检测结果显示,HSA与地西泮的结合率最高为98.18%,最低为97.47%,不同生产工艺制备的样品间比较,HSA与地西泮的结合功能差异均无统计学意义。各HSA样品结合常数范围在6×104~10×10^4mol^-1之间,国内不同生产工艺制备的各HSA样品的结合常数平均值约为9.00×10^4mol^-1,与国外HSA样品(8.91×10^4mol^-1)比较差异无统计学意义,其中采用Cohn’s改良法(离心)制备的样品结合常数平均值最低(7.78×10^4mol^-1),采用Cohn’s经典法(压滤)制备的样品结合常数平均值最高(9.57×10^4mol^-1),生产工艺对于HSA的结合常数没有明显影响。结论不同生产工艺制备的HSA与地西泮的结合功能基本一致。 相似文献
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