游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法，并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L，线性范围为0．14—120nmol／L，回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测，其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

大肠癌和直肠息肉患者血清结合珠蛋白的含量和分型

1.本文介绍了用聚丙烯酰胺凝胶电泳作为Hp分型和葡聚糖凝胶过滤测定血清Hp含量的方法,具有分辨力好、重复性高和操作简便等优点。 2.对杭州地区161例正常成人进行了Hp分型,以Hp2—2型最高,Hp~1整率0.2857。120例正常成人血清Hp含量的平均值为81.4±19.9mgHb％。     

人C肽时间分辨免疫荧光分析试剂盒的研制

目的研制人C肽(C peptide)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒。方法采用双抗体夹心一步法建立C肽TRFIA试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的可测范围为0.5～22ng/ml,灵敏度为0.045ng/ml,批内、批间的变异系数(CV)分别为4.1%～6.7%和5.4%～6.8%;与胰岛素无交叉反应,与胰岛素原的交叉反应率为9.0%。30份血样用本试剂盒与国外同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.992。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

SARS-CoV GDH株N蛋白全长基因克隆及其可溶性表达

目的构建SARS冠状病毒N蛋白的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达并纯化,鉴定其抗原性。方法以我国SARS冠状病毒GDH株总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增N蛋白的全长基因,TA克隆后测序。构建pET-23d的N基因表达载体,用IPTG诱导目的蛋白表达,利用硫酸铵沉淀、分子筛层析及离子交换层析纯化重组蛋白,免疫印迹鉴定重组蛋白。结果RT-PCR扩增出1269bpSARS冠状病毒N蛋白的基因片段,其序列分析结果与SARS-CoVGD01、BJ01株的同源性为99.92%;该基因在大肠杆菌表达系统中高效表达,占可溶性蛋白的33.57%,表达产物为非融合的可溶性蛋白,Westernblot结果显示重组N蛋白具有良好的抗原性;纯化后重组N蛋白纯度为92.9%。结论成功构建了SARS冠状病毒N蛋白的重组表达质粒,并在大肠杆菌中以非融合蛋白的形式得到高效的可溶性表达,为SRAS的诊断和疫苗的研制奠定了基础。     

应用时间分辨荧光免疫分析技术检测SARS病毒抗原的初步研究

目的 建立定量检测SARS冠状病毒N蛋白的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)。方法 采用经SARS-CoVN蛋白和配对实验筛选的两株抗SARSN蛋白单克隆抗体,以双抗体夹心法为基础建立检测SARS-CoVN抗原的时间分辨荧光免疫分析技术,进行方法学的评价,并与相应ELISA试剂盒进行比较。结果 该法的测量范围为(0.02~150)ng/ml,灵敏度为0.02ng/ml;批内、批间CV分别为(3.3~6.2)%和(5.3~9.6)%,与采用ELISA试剂盒检测灭活SARS-CoVN蛋白情况比较的结果一致。结论 本研究建立的检测SARSN蛋白的时间分辨荧光免疫分析技术灵敏度高,特异性好,具有潜在的临床应用价值。     

带有引导序列的抗-D抗体可变区基因的扩增和序列分析

目的:从引导区扩增获得高度特异性和亲和力的抗-D抗体的可变区基因, 并进行序列分析。方法:提取1株分泌抗-D抗体的人B淋巴细胞株的总RNA, 从引导区设计引物, RT-PCR扩增抗-D抗体的可变区基因, 分别对扩增产物进行分子克隆和测序。结果:用重链引物和轻链引物分别扩增出440bp和410bp的特异带。序列分析表明, 其核苷酸及其所推导的氨基酸(AA)序列符合人Ig可变区基因的序列特征。结论:获得了抗-D抗体可变区基因, 为基因工程抗-D的研制及Rh新生儿溶血病的预防提供物质基础。     

A 族链球菌胶体金免疫层析试纸条的制备及应用

目的建立一种以胶体金为基础的A族链球菌（Strep-A）免疫层析快速检测方法 方法以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析试纸条,并对其特异性、灵敏度以及临床应用进行评价。 结果最低检出浓度为105 CFU/mL;10 min内即可观察结果;与B族链球菌、D族链球菌、金黄色葡萄球菌均无交叉反应;检测229例临床样本,以传统的细菌培养鉴定结果为对照,敏感度为97.30%,特异度为98.06%,kappa值为0.950,一致性检测表明两者无显著性差异。 结论该方法方便、快捷,能有效的辅助诊断A族链球菌感染,胶体金免疫层析试纸的研制为Strep-A进行现场快速诊断与筛查奠定了基础。      

Caspase与凋亡的基因治疗

细胞凋亡是一个重要的生命现象 ,细胞凋亡的几乎所有特征的变化均与细胞内普遍存在的Caspase级联反应 (Cascade)的激活有关。现就Caspase蛋白酶家族的基本生物学特性、激活机制作一介绍 ,特别是阐述与Caspase相关的凋亡调控基因以及利用此类基因进行凋亡基因治疗的研究进展     

一种灵敏的干血斑葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光分析法的建立

目的 建立葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶(G6PD)荧光分析方法,用于新生儿足跟干血斑中G6PD酶活性的定量测定.方法 选择于血斑配制基质,优化底物、复溶物和铜试剂组分,建立G6PD荧光分析法定量检测方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价.结果 自制试剂分析灵敏度为0.05 U/g Hb;分析内和分析间精密度分别为4.12%-8.93%、4.75%～9.86%:试剂的cutoff值为2.23 U/g Hb;1 066份样本用该试剂与PerkinElmer(PE)公司同类试剂平行榆测,两种试剂测值具有显著相关性(P=0.000),相关系数为0.960;以PE公司试剂为对照,本试剂的阳性符合率为99.4%,阴性符合率为98.93%.结论 该试剂灵敏度高、操作简便快捷,具有良好的精密度.临床检测性能良好,可以满足临床应用的需要.     

孕中期甲胎蛋白中位数的建立及临床应用研究

目的:建立孕14～20周甲胎蛋白(AFP)中位数.并使用唐氏综合征阳性病例进行验证分析.方法:使用AFP时间分辨免疫荧光法试剂检测21 278份正常单胎孕妇血清和21例唐氏综合征(DS)阳性孕妇血清.根据末次月经日期确定样本孕周,采用直接法计算AFP各孕周的中位数.以此为基础,计算阳性病例中倍数(MoM),并进行统计学分析.结果:AFP中位数水平与美国PE公司提供的白种人孕妇数据相比差异有显著性(P=0.000);分析DS病例,其母血AFP MoM值均值与正常孕妇相比差异有显著性(P=0.000).结论:本研究建立的中位数可以区分阳性和阴性病例,能有效应用于风险评估.