恒温扩增-防污染核酸试纸条在快速检测结核分枝杆菌中的应用

结核分枝杆菌生长缓慢的特性一直以来限制了临床对患者的诊断及治疗.为了快速准确的鉴定结核分枝杆菌,为临床诊断提供有效依据,基于分子生物学技术的诊断方法越来越多的应用到日常的检测工作中,核酸扩增试验(nucleic acid amplification tests,NAAT)自应用到结核病的早期诊断以来,就显示出其强大的优越性.它比培养的速度快,特异性高,可以在3～6 h得到结果[1].商业化的检测试剂盒更是让早期快速诊断结核病成为可能[2-3].高通量的自动检测装置虽然提高了工作效率,但是高昂的价格和实验室配套设备的要求限制了方法的使用范围.为更好的控制结核病的蔓延,临床迫切需求一种简便、快速、准确的结核病早期诊断方法.     

弓形虫表面抗原P30、P22与霍乱毒素A2／B复合基因真核表达质粒的构建

目的选择弓形虫 RH 株主要表面抗原 P30、P22的有效基因片段和霍乱毒素 A_2/B 亚基共同构建在同一真核表达载体 pcDNA3.1(-)上,并保证其连接方向和开放读码框的正确。方法用PCR 技术分别从弓形虫 RH 株基因组 DNA 和 pUAB024-CTXA_2/B 质粒中扩增编码 P30、P22基因片段和 CTXA_2/B,定向重组入 pUC18克隆载体,然后酶切释放 P30-P22-CTXA_2/B 复合基因片段,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,再经含氨苄青霉素的 LB 培养基筛选、酶切及测序鉴定。结果酶切产物经电泳显示条带清晰,P30、P22和 CTXA_2/B 基因片段的泳动位置分别在786bp、492bp、512bp 的位置,与预计结果一致;测序结果表明插入的基因片段方向及序列均正确。结论成功地构建了真核表达重组质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B,保证了三个基因连接方向,序列及开放读码框的正确,为下一步融合蛋白 P30-P22-CTXA_2/B 在哺乳动物细胞中的表达及动物实验奠定了基础。     

含弓形虫复合抗原基因的真核表达质粒在哺乳动物细胞中的表达

目的研究弓形虫复合抗原真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B在哺乳动物细胞中的表达情况。方法利用脂质体介导的转染技术,将真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B和空载体pcDNA3.1分别转染He-la细胞,400μg/mlG418加压筛选和200μg/mlG418维持筛选,获得稳定转染的Hela细胞。采用SDS-PAGE和West-ern-blot方法对复合基因P30-P22-CTXA2/B的表达产物进行鉴定。结果SDS-PAGE结果显示,重组质粒转染Hela细胞后的表达产物分子质量单位为64ku,Western-blot显示此蛋白条带能被抗P30抗体识别。结论构建的真核表达质粒pcDNA3.1-P30-P22-CTXA2/B能在哺乳动物细胞中成功表达插入基因所编码的融合蛋白,为进一步动物实验提供了实验依据。     

HBV适应性杂交细胞株的建立和初步研究

目的方法诱导HepG₂细胞产生HGPRT基因突变,将筛选出的HGPRT阴性的HepG2细胞与携带HBV的人原代肝细胞进行融合得杂交细胞,用HAT培养基筛选出异核体杂交细胞,再利用有限稀释法进行克隆,通过核型分析方法鉴定所得细胞。对所得杂交细胞及培养上清液进行HBV DNA和HBsAg、HBeAg的检测。实验同时,用未杂交的HepG2和人原代肝细胞作对照。结果经筛选后,有一杂交细胞株(HepCHLine3)克隆成功。HepCHLine3在形态学上与HGPRT^-HepG₂细胞相似,能体外传代培养,染色体核型分析示HepCHLine3杂交细胞染色体众数为99条,证明为融合细胞株,含所有来自HepG₂和人原代肝细胞的基因数。传代培养的HepCHLine3和其培养上清液用巢式PCR分别可检测到HBV DNA,培养上清液内检测到HBsAg和HBeAg。对照组的HepG₂和人原代肝细胞相应结果为阴性。提示该细胞携带并分泌HBV DNA。结论该杂交细胞兼具HepG₂细胞体外传代和人原代肝细胞对HBV易感的特性,是一新型杂交细胞系,为进一步建立新型HBV感染细胞模型奠定了基础。     

医院成本管理的现状与策略

随着我国社会主义市场经济体制不断完善和发展,尤其是医疗补偿制度的改革和医疗保障制度的启动,对医院的经营管理提出了更新更高的要求[1,2].     

上海市某结核病定点医院结核病房空气样本中分枝杆菌的检测

目的 了解上海市某结核病定点医院结核病房空气中的分枝杆菌污染情况及潜在传染性。 方法 采用液体撞击式微生物气溶胶采样器（FA-1型撞击式空气微生物采样器）采集该医院22间结核病房中空气样本134份,均在痰涂片抗酸杆菌阳性（＋~＋＋＋＋）患者床边采集。每间病房均有4张床位,每间病房的空间布局相同,但患者组成情况不完全相同。经氢氧化钠-N-乙酰-L-半胱氨酸(NALC-NaOH)前处理,分别采用罗氏培养、BacT/ALERT 3D全自动快速培养进行分枝杆菌分离培养,并对培养阳性样本采用DNA序列分析的方法进行菌型鉴定。两种分离培养方法对医院空气样本中分枝杆菌分离率的比较采用配对卡方检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 134份结核病房涂阳患者床边采集到的空气样本中有3份分枝杆菌分离培养阳性,经DNA序列分析证实分别为结核分枝杆菌、胞内分枝杆菌和戈登分枝杆菌。BacT/ALERT 3D培养阳性3份,经DNA序列分析证实分别为结核分枝杆菌、胞内分枝杆菌和戈登分枝杆菌,污染2份,阳性检出率为2.3%（3/132）。罗氏培养阳性2份,经DNA序列分析证实分别为胞内分枝杆菌和戈登分枝杆菌,污染1份,阳性检出率为1.5%(2/133)。经配对卡方检验,两种分离培养方法对医院空气样本中分枝杆菌分离率差异无统计学意义（χ²=0.00,P>0.05）。 结论 该医院结核病房痰涂片抗酸杆菌阳性患者床边所采集的空气样本中可分离到分枝杆菌,虽然目前尚无法判断这些菌株是否由于就诊患者传播所致,但是定期监测医院内空气质量是预防与控制医院内感染的一项重要措施。     

浅谈人体寄生虫学教学中的体会

当前,各种自然科学迅速发展,新的理论和技术不断涌现,医学也不例外,各种新的诊断和检查方法也在不断出现,这种情况对于临床和基础理论教学工作都提出了新的要求。因此,对于寄生虫学的教学工作也就有了不同于以往的一些特点,本文就此现象谈几点教学中的体会。1　明确教学目...     

青黛散结合中药外洗治疗肛周湿疹疗效观察

目的：观察青黛散联合复方苦参汤外用治疗肛周湿疹的临床疗效。方法：将诊断明确的108名肛周湿疹患者随机分为两组,观察组58名,对照组50名。观察组采用复方苦参汤坐浴外洗、青黛散外用扑敷肛周。对照组采用派瑞松软膏肛周局部外涂患处,1个月为1个疗程。观察两组疗效。结果：有效率观察组94.82%,对照组74%,两组比较差异有显著性（P〈0.05）。结论：青黛散联合复方苦参汤治疗肛周湿疹具有治愈率高、复发率低、副作用少等优点,是一种有效的治疗方法。     

青黛散联合复方苦参汤治疗肛周湿疹临床观察

目的 观察青黛散联合复方苦参汤外用治疗肛周湿疹的临床疗效.方法 将诊断明确的108名肛周湿疹患者随机分为两组,观察组58名,对照组50名.观察组采用复方苦参汤坐浴外洗、青黛散外用扑敷肛周.对照组采用派瑞松软膏肛周局部外涂患处, 1月为1个疗程.观察两组疗效.结果 有效率观察组94.82% ,对照组74% ,两组比较差异有显著性( P < 0.05).结论 青黛散联合复方苦参汤治疗肛周湿疹具有治愈率高、复发率低、副作用少等优点,是一种有效的治疗方法.