三种商品化光敏剂诱导小鼠免疫原性细胞死亡的效果比较

目的 研究二氢卟吩 e6（Ce6）、中性红（NR）以及虎红钠盐（RB）3种商品化光敏剂的光敏性质、光动力治疗（PDT）效果及诱导免疫原性细胞死亡（ICD）能力，筛选出最高效的ICD诱导剂用于抗肿瘤免疫治疗。方法 溶液实验：利用不同的活性氧（ROS）荧光探针评估溶液中3种光敏剂的光敏能力。细胞实验：探针检测肿瘤细胞内ROS生成能力；CCK-8细胞毒性试验比较3种光敏剂的细胞杀伤效果以及生物相容性；检测细胞表面暴露的钙网蛋白（ecto-CRT），高迁移率族蛋白1（HMGB1）以及培养基上清三磷酸腺苷（ATP）浓度评估3种药物的ICD诱导能力。动物实验：建立BALB/c小鼠4T1皮下肿瘤模型，10 d后分别在瘤内注射Ce6和NR（30 μL，5 mg/mL），2 h后白光光照处理（10 min，400 mW/cm2），监测小鼠体质量及肿瘤组织体积变化。14 d后取材，通过流式细胞技术分析肿瘤组织中CD8+ T细胞及脾脏组织CD8+ T的IFN-γ因子分泌量；通过HE染色和TUNEL组织染色分析肿瘤组织中细胞凋亡情况。结果 在3种光敏剂中，Ce6的ROS产生能力最高，且显示出最强的肿瘤细胞杀伤效果；ecto-CRT、HMGB1荧光成像及胞外ATP含量显示Ce6相对于NR和RB具有更好的ICD诱导能力。动物实验显示，Ce6和NR组小鼠在光动力治疗后肿瘤体积显著变小，其中Ce6肿瘤治疗效果明显好于NR及PBS组。流式结果显示Ce6与NR组瘤内CD8+ T细胞占比分别为12.7%和6.1%，脾脏组织IFN-γ+ CD8+ T细胞占比分别为7.1%和2.8%，两组之间差异有统计学意义（P<0.05）。HE染色和TUNEL染色显示相对于PBS组，两个治疗组肿瘤组织有明显核凋亡情况，且Ce6的治疗效果明显强于NR。结论 3种光敏剂中Ce6的ROS生成效率最高，光动力效果最好，诱导ICD能力最强，并且在肿瘤治疗中能明显提升CD8+ T细胞的数量及功能，能相对高效的启动适应性免疫应答，抑制肿瘤生长。