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1.
目的了解肺炎克雷伯菌的耐药性和质粒介导的AmpC酶基因型。方法采用K-B法进行抗菌药物敏感试验,用酶提取物三维试验检测AmpC酶,用聚合酶链反应(PCR)产物测序确定AmpC酶基因型。结果产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性率41.90%、AmpC酶阳性率0.95%、ESBLs AmpC酶阳性率2.86%;药敏试验结果显示,对青霉素类、头孢菌素类、酶抑制剂复合剂、氨曲南、氟喹诺酮类均有较高耐药,亚胺培南敏感率100.00%;AmpC酶阳性菌株为质粒介导DHA型AmpC酶。结论可见临床分离的肺炎克雷伯菌中已经出现产质粒介导AmpC酶菌株,其耐药基因可在同种或不同种传播。 相似文献
2.
慢性HBV感染患者核苷类药物治疗后相应突变位点检测分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:通过基因测序检测分析拉米夫定(LAM)、阿德福韦(ADV)、恩替卡韦(ETV)、替比夫定(LdT)四种核苷类似物耐药者HBV多聚酶区基因主要耐药突变的分布情况。方法:采用实时荧光定量PCR方法对253例LAM,78例ADV和9例ETV以及6例LdT耐药患者血清HBV多聚酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序。结果:253例LAM耐药患者中有16种突变类型,其中以rtM204I突变最多见,为101例(39.92%)。78例ADV耐药患者中有7种突变类型,其中以rtA181V/T/S突变最多见,为47例(60.25%)。9例ETV耐药患者中有3种突变类型,其中以rtT184A/G/I/S突变最多见,为6例(66.66%)。6例LdT耐药患者中有2种突变类型。结论:四种核苷类似物耐药株的氨基酸突变复杂多样,建议抗病毒治疗失败后参考基因型耐药检测结果更换药物。 相似文献
3.
目的研究慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)对大肠癌细胞RON基因的干扰效率,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株。方法应用实时聚合酶链反应(PCR)检测大肠癌细胞DLD-1、HCT116、LOVO、RKO、SW480、HT29的RONmRNA表达情况,筛选出表达丰度能满足RNAi的大肠癌靶细胞HT29。根据人RON基因序列,构建4种慢病毒载体质粒pGCSIL/RON-短发夹RNA(shRNA),转染包装细胞293T,获得4种重组慢病毒pGCSIL/RON-shRNA,分别感染HT29细胞。应用实时PCR检测各组HT29细胞RONmRNA表达情况,筛选出RON干扰效率最高的一种shRNA慢病毒载体质粒,构建RON基因稳定沉默的大肠癌细胞株HT29/RON-shRNA。结果 DLD-1、HCT116、RKO、SW480、HT29细胞RON表达丰度能满足RNAi的需要,选择HT29细胞作为RNAi的靶细胞。阴性对照病毒感染的细胞样品相对正常未感染病毒的细胞目的基因的相对表达水平为(94±5)%,RONshRNA-1靶点病毒感染的细胞为(86±5)%,RONshRNA-2靶点病毒感染的细胞为(67±6)%,RONshRNA-3靶点病毒感染的细胞为(63±6)%,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞为(30±8)%,RONshRNA-4靶点病毒感染的细胞的表达水平显著低于其他细胞(P值均<0.01),其对目的基因的沉默效果达到(70±8)%。结论慢病毒介导RNAi能显著抑制大肠癌细胞HT29的RON基因的表达,慢病毒载体介导的RNAi是一种高效的"基因沉默"的手段。 相似文献
4.
目的:评估ATP-TCA肿瘤药敏检测法指导制定大肠癌化疗方案的可行性。方法:应用ATP-TCA肿瘤药敏检测法,检测28例大肠癌手术标本和19例大肠癌外周血标本对8种常用抗肿瘤药物的敏感性。结果:大肠癌对抗癌药物的敏感程度存在着异质性,联合用药的敏感率高于单药。外周血标本和手术标本检测结果具有一致性,检测结果与临床疗效基本相符。结论:ATP-TCA肿瘤药敏检测法可用于临床制定大肠癌个体化的化疗方案。 相似文献
5.
目的 分析鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药性及产β-内酰胺酶情况.方法 应用VITEK-32全自动细菌鉴定仪对临床标本进行细菌鉴定和药物敏感试验,用改良三维试验检测产β-内酰胺酶情况.结果 分离到69株鲍曼不动杆菌菌株,对抗菌药物的敏感性以头孢哌酮/舒巴坦最高(46.38%),对亚胺培南和美洛培南敏感率43.48%,头孢他啶30.43%、头孢吡肟33.33%、哌拉西林/他唑巴坦34.78%.三维试验结果54株(78.3%)产β-内酰胺酶,其中9株单产AmpC酶(头孢菌素酶),8株单产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),17株同时产AmpC酶和ESBLs,20株不能被氯唑西林和克拉维酸联合抑制.结论 鲍曼不动杆菌的耐药率高,特别是出现了泛耐药的菌株(同时产AmpC酶和ESBLs).应加强鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶检测. 相似文献
6.
目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d'origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响.方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA.Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响.结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70%.Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P<0.05).Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28 ±1.34)、(8.93±1.20) μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07) μg/ml,均明显低于对照组(P<0.01).结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性. 相似文献
7.
发现1株携带多种β-内酰胺类、氨基糖苷类耐药基因的鲍氏不动杆菌 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 分析多药耐药鲍氏不动杆菌对β-内酰胺及氨基糖苷类抗菌药物耐药的原因.方法 用三维试验分析多药耐药鲍氏不动杆菌临床菌株所产β-内酰胺酶,并进行初步分类,用聚合酶链反应(PCR)扩增和产物测序方法确认β-内酰胺酶及氨基糖苷类基因,用基因测序证实基因型.结果 该临床菌株产超广谱β-内酰胺酶及AmpC酶,经分子生物学方法证实同时存在TEM、OXA-23、ADC基因型;并同时存在氨基糖苷类aac(3)-Ⅰ、aac(6')-Ⅰb和ant(3")-Ⅰ基因.结论 发现1株同时存在TEM、OXA-23、ADC、aac(3)-Ⅰ、aac(6')-Ⅰb和ant(3")-Ⅰ基因的鲍氏不动杆菌. 相似文献
8.
目的:了解分离自临床铜绿假单胞菌分子流行病学特性及菌株亲缘性。方法:对分离自临床的32株铜绿假单胞菌采用Kirby-Bauer法测定抗菌药物的敏感性;利用脉冲场电泳和多耐药基因聚类分析菌株的亲缘性。结果:32株铜绿假单胞菌中有17株对8种以上抗生素耐药,占53.1%,8株(25%)铜绿假单胞菌对检测抗生素全部耐药,为同一耐药表型。脉冲场电泳聚类分析显示,铜绿假单胞菌主要为3个克隆株;而多耐药基因聚类分析显示,铜绿假单胞菌主要为2个簇群,二个簇群内已发生衍化,存在3个克隆传播。结论:分离自临床的铜绿假单胞菌耐药严重,亲缘性分析中多基因聚类分析法分辨率高于脉冲场电泳。 相似文献
9.
目的 构建人绒毛膜促性腺激素(HCGB)原核表达载体PG5-HCGβ,使HCGβ在大肠杆菌中获得高效表达。建立一条简单、快速、高效的纯化复性路线,获得具有生物活性的高纯度rHCGβ。方法以本室克隆的PCRII/HCGB为模板,构建PG5-HCGβ,转化大肠杆菌BL21表达HCGβ。表达蛋白顺次用凝胶过滤和离子交换层析两步分离纯化。结果酶切及序列结果显示,PG5-HCGβ构建正确,HCGβ表达约占菌体总蛋白的20%。经过凝胶过滤和离子交换层析两步分离纯化,获得rHCGβ纯度达95%以上。复性的rHCGβ具有促进小鼠子宫生长的生物学活性。结论构建的PG5-HCGβ表达载体在大肠杆菌中获得高效表达,纯化复性的rHCGβ蛋白具有较高的生物学活性,为今后的rHCGβ生产打下了良好的基础。 相似文献
10.
毛联钢胡爱荣蒋素文颜华东胡耀仁 《中华全科医师杂志》2016,(8):614-618
目的了解非活动性HBsAg携带者的肝组织病理学改变。方法回顾性分析2011年1月至2015年9月110例接受肝脏穿刺活检术的非活动性HBsAg携带者的临床资料及其肝组织炎症活动度(A)与纤维化程度(F)。患者年龄21~66岁,其中男性76例、女性34例;〈A2者73例,≥A2者37例;〈F2者63例,≥F2者47例;血清ALT水平〈WHO正常上限(ULN)标准者59例(WHO标准组,男性30U/L、女性19U/L),〈我国ULN标准者110例(中国标准组,男性50U/L、女性40U/L)。结果110例中,≥A1者100例(90.9%)、≥A2者37例(33.6%);≥F1者84例(76.3%)、≥砣者47例(42.7%)。男性A和F的严重程度均高于女性,以F的改变显著(U=2.162,P=0.032;X^2=5.315,P=0.021)。中国标准组与WHO标准组间A和F严重程度的差异均无统计学意义(U=0.951,P:0.341;U=0.435,P=0.663)。随着年龄的增加,A和F的严重程度增加(F=3.705,P=0.014;F=5.915,P=0.001);≥A2和≥F2的平均年龄分别为(41.7±9.6)岁和(38.7±8.1)岁。影响A和F严重程度的独立危险因素分别是年龄、性别(男性)和年龄。结论大部分非活动性HBsAg携带者存在一定程度的肝脏病理性损伤,对I〉40岁者应进行肝脏炎症和纤维化进展的筛查,尤其是男性。 相似文献