大肠杆菌caiAB基因的克隆与表达

从E.coli MC4100菌株的染色体DNA中利用鸟枪法克隆含编码豆甜菜碱还原酶和L－肉碱脱水酶的caiAB基因片段，并经序列分析验证。由重组质粒pZJD-1480亚克隆得到pT7-A以及pT7-B重组表达质粒，后者转入E.coli BL21(DE3)菌株中，经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）上分子质量为40ku附近可见明显的表达蛋白带。     

肿瘤坏死因子α基因多态性对强直性脊柱炎发病易感性和临床病变程度的影响

背景：肿瘤坏死因子α基因多态性与强直性脊柱炎发生与发展的关系是近年强直性脊柱炎遗传学研究的热点。目的：探讨肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性对强直性脊柱炎发病易感性和病变程度的影响。设计：病例-对照观察。单位：第二军医大学长海医院风湿免疫科。对象：随机选择1999-01／2003-12在第二军医大学长海医院风湿免疫科就诊的强直性脊柱炎患者108例，各对象间均无血缘关系。男女比为5．3：1；年龄13～71(30&;#177;12)岁，根据骶髂关节破坏程度X射线片评估为Ⅰ～Ⅳ级。另从解放军上海血站(长海医院)随机选取100名健康献血者作为对照，年龄19～56(33&;#177;9)岁，男女比为4．9：1，参与者均知情同意。方法：每例参与者取外周血，加乙二胺四乙酸A抗凝后进行肿瘤坏死因子-α基因启动子的聚合酶链反应扩增和纯化；对聚合酶链反应产物测序，并用Chromas 1．62软件展示分析DNA测序结果。②以X射线骶髂关节片分级和肿瘤坏死因子α-308位点(G／C)和(G／A)的对应值评估其对疾病程度的影响。主要观察指标：以DNA直接测序法对-238和-308位点进行基因分型，并分析基因类型与疾病临床表现之间的关系。结果：①肿瘤坏死因子α-238G／G基因型和-238G／A基因型：强直性脊柱炎组有106例(98．1％)和2例(1．9％)，正常对照组有95例(95．0％)和5例(5．0％)，两组间比较无显著性差异。②肿瘤坏死因子α-308．1．1(G／G)基因型和-308．1．2(G／A)基因型：强直性脊柱炎组有89例(82．4％)和19例(17．6％)，正常对照组中有85例(85．0％)和14例(14．0％)。两组比较亦无显著性差异。③根据骶髂关节X射线分级判定疾病严重程度与肿瘤坏死因子α-308位点G／G和G／A基因型之间的关系：强直性脊柱炎患者X射线片Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级时，(G／G)型为3／35／40／11例，(G／A)型为1／12／6／0例。两组差异比较意义显著(GMH：4．77，P&;lt;0．05)。结论：在观察对象中未发现肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性与强直性脊柱炎发病易感性相关，但根据骶髂关节损害程度X射线分级说明肿瘤坏死因子α基因启动子-308位点的多态性对强直性脊柱炎的严重程度有影响。     

冠心病患者CASP7基因启动子区域甲基化水平的研究

目的:研究CASP7基因启动子区域甲基化水平与冠心病(CHD)的关系。方法:将研究对象分为两组,正常对照组(571例)和CHD组(679例)。用甲基化特异性实时定量聚合酶链技术(qMSP)检测CASP7基因启动子区域甲基化水平,分析CASP7基因启动子区域甲基化水平与CHD的相关性。结果:与对照组比较,CHD组患者年龄、男性数目、2型糖尿病(T2D)及吸烟人数显著性增高,差异具有统计学意义(P0.05)。比较两组间的生化指标发现,CHD患者的脂蛋白a[Lp(a)]、C反应蛋白(CRP)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸盐(ALP)及γ谷氨酰转肽酶(γ-GT)水平相较于对照组显著增高,而HDL-C水平降低(P0.05)。此外,在总体对照组及男性对照组中发现,CASP7基因启动子区域甲基化水平与年龄呈负相关(P0.05)。在CHD组中,CASP7基因启动子区域甲基化水平与Lp(a)呈负相关(P0.05)。在男性T2D患者中,CASP7基因启动子区域甲基化水平与狭窄程度呈负相关(P0.05)。结论:CASP7基因启动子区域甲基化水平的上调很可能会对CHD产生保护作用。     

肿瘤坏死因子α基因多态性对强直性脊柱炎发病易感性和临床病变程度的影响

背景肿瘤坏死因子α基因多态性与强直性脊柱炎发生与发展的关系是近年强直性脊柱炎遗传学研究的热点.目的探讨肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性对强直性脊柱炎发病易感性和病变程度的影响.设计病例-对照观察.单位第二军医大学长海医院风湿免疫科.对象随机选择1999-01/2003-12在第二军医大学长海医院风湿免疫科就诊的强直性脊柱炎患者108例,各对象间均无血缘关系.男女比为5.31;年龄13～71(30±12)岁,根据骶髂关节破坏程度X射线片评估为Ⅰ～Ⅳ级.另从解放军上海血站(长海医院)随机选取100名健康献血者作为对照,年龄19～56(33±9)岁,男女比为4.91,参与者均知情同意.方法每例参与者取外周血,加乙二胺四乙酸A抗凝后进行肿瘤坏死因子-α基因启动子的聚合酶链反应扩增和纯化;对聚合酶链反应产物测序,并用Chromas 1.62软件展示分析DNA测序结果.②以X射线骶髂关节片分级和肿瘤坏死因子α-308位点(G/C)和(G/A)的对应值评估其对疾病程度的影响.主要观察指标以DNA直接测序法对-238和-308位点进行基因分型,并分析基因类型与疾病临床表现之间的关系.结果①肿瘤坏死因子α-238G/G基因型和-238G/A基因型强直性脊柱炎组有106例(98.1%)和2例(1.9%),正常对照组有95例(95.0%)和5例(5.0%),两组间比较无显著性差异.②肿瘤坏死因子α-308.1.1(G/G)基因型和-308.1.2(G/A)基因型强直性脊柱炎组有89例(82.4%)和19例(17.6%),正常对照组中有85例(85.0%)和14例(14.0%).两组比较亦无显著性差异.③根据骶髂关节X射线分级判定疾病严重程度与肿瘤坏死因子α-308位点G/G和G/A基因型之间的关系强直性脊柱炎患者X射线片Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级时,(G/G)型为3/35/40/11例,(G/A)型为1/12/6/0例.两组差异比较意义显著(x2GMH=4 77,P＜0.05).结论在观察对象中未发现肿瘤坏死因子α基因启动子-238和-308位点多态性与强直性脊柱炎发病易感性相关,但根据骶髂关节损害程度X射线分级说明肿瘤坏死因子α基因启动子-308位点的多态性对强直性脊柱炎的严重程度有影响.     

Hcy代谢相关基因甲基化与脑梗死的相关关系

目的评价Hcy代谢相关基因S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因(AHCY)、胱硫醚β合成酶基因(CBS)甲基化与脑梗死之间有无相关关系。方法应用荧光定量甲基化特异性PCR(qMSP)检测研究对象外周血中AHCY、CBS基因甲基化水平,并分析其与脑梗死的相关关系。结果 (1)病例组AHCY甲基化水平为0.16%(0.07%,0.32%),对照组为0.25%(0.02%,0.67%),差异无统计学意义(P=0.115,Z=-1.577)。(2)病例组CBS甲基化水平70.20%(49.19%,94.87%),对照组为104.10%(74.65%,132.30%),差异有统计学意义(P=3.71E-10,Z=-6.266)。按性别、年龄进行亚组分析,CBS基因甲基化水平均低于对照组,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论 AHCY基因甲基化与脑梗死发病不相关,而CBS基因低甲基化与脑梗死的发病相关。     

中国汉族冠心病人群ABCG5/ABCG8基因rs4299376多态性及脂质水平分析

目的 探究中国人群ABCG5/ABCG8基因rs4299376多态性与冠心病的相关性,并对一些相关脂质和脂蛋白水平进行研究,探究其与冠心病的关系。方法 收集290例冠心病、198例非冠心病及331例健康正常人的血样,采用核酸自动提取仪提取基因组DNA,MassARRAY时间飞行质谱技术分析rs4299376基因型,并测定所有研究对象血脂水平,对比分析各组人群基因多态性及血脂水平差异。结果 中国人群ABCG5/ABCG8基因rs4299376多态性在冠心病组与非冠心病组以及健康对照组之间的分布差异无统计学意义。在总体和男性患者中,脂质水平与冠心病没有相关性;但在女性患者中,冠心病患者三酰甘油（TG）及总胆固醇（TC）水平比非冠心病患者高,差异有统计学意义（TG：2.23±1.05vs1.84±1.03,P=0.01;TC：4.79±1.17vs4.36±1.03,P=0.01）。根据年龄进行分层分析,≥60岁人群中,冠心病患者高密度脂蛋白 （HDL）水平比非冠心病患者低（1.09±0.23vs1.16±0.25,P=0.03）。结论 中国人群ABCG5/ABCG8基因rs4299376多态性与冠心病可能关系不大;女性冠心病患者较非冠心病患者具有更高的TC和TG水平,60岁及以上的冠心病患者较非冠心病患者具有更低的HDL水平。     

外周血PON1基因高甲基化、端粒长度变短与脑梗死发病相关

目的:探讨对氧磷酶1(paraoxonase1,PON1)基因启动子区甲基化水平和端粒长度与中国山东地区汉族人群脑梗死发病的相关性。方法:选取152例确诊脑梗死患者为病例组,152例健康人为对照组,提取外周静脉血基因组DNA,使用荧光定量甲基化特异性PCR(quantitative methylationspecif icPCR,qMSP)测定受试者的血液PON1基因启动子甲基化水平及端粒长度。每个样本的甲基化程度以甲基化参考百分比(PMR)来表示。结果:病例组中PON1甲基化程度显著高于对照组(Z=-3.898,P=0.0001),性别亚组显示差异主要在男性中更为显著(Z=-3.786,P=0.0002)。病例组患者的端粒长度显著低于对照组(Z=-11.843,P0.0001),且男女亚组中端粒长度均显著低于对照组(P0.05)。然而,并没有发现PON1甲基化水平与端粒长度的相关性(病例组r=0.023,P=0.775;对照组r=-0.157,P=0.054)。结论:PON1启动子区高甲基化和端粒长度变短与脑梗死发病相关,是中国山东地区汉族人群脑梗死发病的危险因素。     

健康人群CDKN2A和CDKN2B基因甲基化水平与衰老的相关性

目的在正常人群中寻找细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CDKN）2A、CDKN2B基因甲基化水平与衰老之间的关系。 方法我们收集了284名男性和246名女性体检者的外周血,采用甲基化特异性实时定量聚合酶链技术（qMSP）检测CDKN2A、 CDKN2B基因甲基化水平。使用Pearson直线相关系数或Spearman秩相关系数来分析CDKN2A和CDKN2B基因甲基化水平 与衰老的关系。结果两个基因甲基化水平之间呈正相关（P<0.05）。在总体样本组和女性组中,均发现CDKN2A基因甲基化 水平与年龄呈负相关（P<0.05）。在总体样本组中,CDKN2A、CDKN2B基因甲基化水平与甘油三酯（TG）、载脂蛋白E（ApoE）、 脂蛋白（a）[Lp(a)]、谷草转氨酶（AST）均呈负相关（P均<0.05）。性别分层分析后发现,女性组和男性组中两个基因甲基化水平 均与Lp(a)呈负相关（P<0.05）。男性组中CDKN2A基因甲基化水平与AST呈负相关（P<0.05）,而CDKN2B基因甲基化水平与 高密度脂蛋白（HDL）、ApoE 呈负相关（P 均<0.05）。女性组中CDKN2A 基因甲基化水平与低密度脂蛋白（LDL）呈正相关, ApoE、AST呈负相关（P均<0.05）。结论CDKN2A、CDKN2B基因甲基化水平与年龄以及多种蛋白指标密切相关。