特异切割多药耐药基因(MDR1)的核酶设计与克隆

目的:设计与克隆特异切割多药耐药基因(MDR1) 的核酶。方法:针对人类MDR1 mRNA第Ⅶ外显子附近第196 密码子的GUC 序列,按照“锤头结构”模型,设计、合成核酶,并定向克隆入载体PGEM-3Zf(t) 中;通过PCR- SSCP法及限制性分析,确保扩增片断为外源插入的DNA序列,并经DNA测序证实。结果:重组质粒插入片断序列与设计序列一致。结论:设计、克隆核酶作用人类MDR1 mRNA是有效的     

一个非氨基糖甙类抗生素致聋家系mtDNA突变研究

目的：对１ 个有明确母系遗传的非氨基糖甙类抗生素致聋“线粒体耳聋”家系致病的分子生物学机制进行探索。方法：应用 Ｐ Ｃ Ｒ、 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 和 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析等分子生物学技术对其线粒体 Ｄ Ｎ Ａ突变进行研究。结果：家系中全部患者和１ 个母系亲属存在线粒体 Ｄ Ｎ Ａ１２ Ｓｒ Ｒ Ｎ Ａ 基因１５５５ 位点 Ａ Ｇ 的突变,家系中的正常后代和２０ 个正常对照个体未发现突变。结论：线粒体 Ｄ Ｎ Ａ Ａ１５５５ Ｇ 点突变是导致该家系耳聋的主要因素之一。     

应用DNA pooling技术对一例母系遗传非综合征耳聋大家系进行全基因组扫描

目的 :从分子遗传学角度对 1个非综合征母系遗传耳聋大家系的发病机制进行研究。方法 :使用 3 65对常染色体全基因组扫描标记 (STRPs) ,应用DNApooling方法对该家系进行全基因组扫描。结果 :通过比较患者pool与患者亲属pool及对照pool的等位基因频率的差别 ,发现全基因组共 45个位点患者pool中出现某一较高频率的等位基因 ,并通过统计学处理确定其差异 ,这些位点即为连锁分析的候选位点。结论 :这些位点频率较高的等位基因可能与导致母系遗传性耳聋的相关基因连锁     

SmaRT快速克隆多药耐药基因（MDR1）cDNA产物

肿瘤细胞在化疗中会对许多药物产生耐药性 ,称多药耐药 (ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ,ＭＤＲ) ,导致ＭＤＲ的一个重要机制就是细胞膜上一种分子量为170ＫＤａ的Ｐ 糖蛋白 (Ｐ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ,Ｐ ｇｐ)的过度表达[1] 。Ｐ ｇｐ主要由位于人第 7号染色体 ｑ2 1 1的多药耐药基因ＭＤＲ1编码。研究ＭＤＲ多在信使核糖核酸 (ｍＲＮＡ)和蛋白质水平。ＭＤＲ1ｃＤＮＡ长4 669ｂｐ ,第 179～ 384 0ｂｐ之间为可读区 ,共编码12 80个氨基酸残基 ,其中第 185密码子被认为是编码影响Ｐ ｇｐ药物结合位点的氨基酸残基。把包含185…     

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤中人类乳头状瘤病毒和EB病毒DNA表达的研究

目的：探讨鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤（IP）与人类乳头状瘤病毒（HPV）和EB病毒（EVB）的关系。方法：对28例鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的病理组织标本，用多聚酶链反应（PCR）进行HPV和EBV和DNA检测。结果：28例IP标本中10例HPV－DNA阳性（35．7％），4例EBV－DNA阳性（14．3％）。6例伴不典型增生的IP标本中HPV－DNA阳性4例（66．75），其中1例同伴伴EBV－DNA阳性；22例不伴不典型增生的IP标本中HPV－DNA阳性6例（27．3％），3例EBV－DNA阳性（13．6％）。IP伴不典型增生组和IP不伴不典型增生组的HPV－DNA检出的阳性率无显著性差异。结论：HPV感染在IP的发生过程中可能发挥一定的作用，EBV与IP的发生无明显关系。IP伴不典型增生与HPV感染无关。     

树状DNA杂交技术在HCV检测中的应用

目的：建立一种敏感性,特异性,重复性较好的,适同原体群体筛查的检验方法。方法：通过RT－PCR－DDH,RT－nested-PCR和HCV RNA－DDH3种方法检测HCV核酸,推断RT－PCR－DDH技术检测病毒核酸的特异性,敏感性和稳定性。结果：47份ELISA检测HCV抗体阳性血清标本,RT－nested-PCR检出阳性标本33例（70．21％）,RT－PCR－DDH检出阳性标本39例（82．98％）,结论：RT－PCR－DDH技术在逆转录病毒核酸检测的应用中具有较好的特异性,敏感性和稳定性,而且成本较低,操作安全简便,适于中小实验室和基层医院病原微生物的检测。     

中国人散发性大肠癌中微卫星DNA不稳定的研究

目的：探讨中国人散发性大肠癌中微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定及复制差错与大肠癌生物学行为的关系。方法：选择１０ 个微卫星位点, 应用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对３９ 例散发性大肠癌组织进行检测。结果：在多个位点上发现了较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定（ Ｍ Ｉ） ,其中 Ｄ３ Ｓ１３１７ 位点上 Ｍ Ｉ为４４ ％ , Ｄ３ Ｓ９６６ 上 Ｍ Ｉ为２６ ．６ ％ , Ｄ２ Ｓ１２３ 和 Ｄ２ Ｓ１１９ 上 Ｍ Ｉ分别为３６ ％ 和２５ ．７ ％ 。结论： Ｍ Ｉ阳性率和肿瘤组织学分类无明显相关性,而与肿瘤组织的分化程度、浸润程度等有显著的相关关系,因而微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 可以为肿瘤的早期诊断及患者预后判断提供帮助。同时,在散发性结肠癌中也存在较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定,这可能与某种 Ｄ Ｎ Ａ 错配修复基因发生突变有关。