NPM1 A型突变体对TGF-β1诱导K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响

  目的  观察核仁磷酸蛋白（nucleophosmin 1,NPM1）A型突变体过表达对TGF-β1诱导的K562细胞增殖及AKT磷酸化的影响。  方法  腺病毒载体（Ad5－NPM1）转染髓系白血病K562细胞建立过表达NPM1蛋白细胞株;应用Western blot法及ELISA法分别检测细胞NPM1蛋白表达及上清液含量,Western blot法检测K562细胞NPM1、AKT和P-AKT蛋白表达,MTT法检测细胞增殖。  结果  K562细胞NPM1蛋白表达水平呈Ad5-NPM1转染复数[（multiplicity of infection,MOI）:30-200]依赖性增加,与空载组（Ad5-vector-100）相比,Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组K562细胞及细胞上清液NPM1蛋白水平均显著增高（P < 0.01）。TGF-β1（10 ng/mL）能够诱导K562细胞AKT蛋白磷酸化,但对总AKT水平无明显影响。TGF-β1（10 ng/mL）+Ad5-NPM1-100组K562细胞P-AKT水平显著高于TGF-β1处理组（P < 0.05）,各组总AKT水平无显著差别（P>0.05）。与空白对照组（CT）相比,TGF-β1（10 ng/mL）处理可促进K562细胞增殖;但TGF-β1（10 ng/mL）+Ad5-NPM1-100组细胞的增殖水平明显高于TGF-β1处理组（P < 0.01）。  结论  NPM1可促进TGF-β1诱导的K562细胞增殖。NPM1促进TGF-β1诱导的K562细胞可能与AKT磷酸化有关。      

黄芩苷衍生物02-036对Burkitt淋巴瘤CA46细胞株的作用及相关机制

目的:探讨黄芩苷(Baicalin)衍生物02-036对人Burkitt淋巴瘤CA46细胞株的增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法:应用MTT法检测和绘制细胞生长曲线;细胞集落形成实验检测黄芩苷衍生物02-036对CA46细胞增殖的影响;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测02-036对细胞凋亡的影响;DNA倍体分析(DNA ploidy analysis)检测02-036对细胞周期的影响;Western blot检测增殖及凋亡相关蛋白BCL-2、Procaspase-9、Procaspase-3、PARP和C-MYC表达水平。结果:细胞生长曲线结果显示黄芩苷衍生物02-036对CA46细胞株有明显的抑制增殖作用,并且呈量效和时效关系(r=0.963,r=0.992),48 h半数抑制浓度(IC50)为(6.04±0.11)μmol/L。细胞集落形成实验显示,02-036作用CA46细胞后,细胞集落形成能力明显降低,并在一定范围内呈量效关系(r=-0.967)。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析结果表明,02-036能有效诱导CA46细胞凋亡,并且在一定范围内,细胞凋亡率随着药物作用浓度的增高而增加(r=0.959)。DNA倍体分析检测显示02-036能将CA46的细胞周期阻滞于S期。不同浓度的02-036作用于CA46细胞后,BCL-2、Pro-caspase-9、Pro-caspase-3、PARP和C-MYC的表达逐渐下调,而Cleaved-PARP表达逐渐上调,并呈现量效关系(r值分别为-0.990、-0.939、-0.971、-0.967、-0.936和0.920)。结论:黄芩苷衍生物02-036能有效抑制CA46细胞增殖,诱导其凋亡,在一定范围内呈时效和量效关系;其作用机制可能与BCL-2、Pro-caspase-9、Pro-caspase-3、PARP及C-MYC的表达下调有关。     

兼有温型和冷型抗体的自身免疫性溶血性贫血

对３例兼有温型和冷型抗体的自身免疫性溶血性贫血的实验室检查进行了探讨。结果显示，３例病人的直接Ｃｏｏｍｂｓ试验，包括广谱，抗人ＩｇＣ，ＩｇＭ，Ｃ３均为阳性，其中１例抗人ＩｇＡ也为阳性，冷凝集素试验（４℃时）均≤１：６４，并随着温度升高效价（或积分）逐渐降低，发病率占同期自身免疫性溶血性贫血病人的７．１％，治疗后抗自身红细胞抗体效价（或积分）均有不同程度下降。     

糖水溶血试验临床意义的进一步探讨

本研究采用糖水溶血试验、Ham氏试验和红细胞热溶血试验等指标对167例再生障碍性贫血(AA)、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、AA—PNH综合征和血管外溶血及其它类型疾病患者进行测定。检测结果表明糖水溶血试验对PNH和AA—PNH综合征诊断具有一定的特异性和高度的敏感性,尚未出现假阴性,是一项较好的过筛试验。     

孪生兄弟遗传性球形红细胞增多症的家系调查及术后观察

孪生兄弟遗传性球形红细胞增多症的家系调查及术后观察傅丹晖，林敏辉，陈志哲，林坤治关键词：遗传性球形红细胞增多症，脾脏切除遗传性球形红细胞增多症（ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙｓｐｈｅｒｏｃｙｔｏｓｉｓ，ＨＳ）是一种红细胞膜先天缺陷的溶血性贫血。通常认为ＨＳ是常...     

应用MOEA技术进行β－地中海贫血基因诊断

β－地中海贫血是一种多见于我国南方的遗传性疾病。本文应用突变寡核苷酸延伸扩增ＰＣＲ（ＭｕｔａｎｔＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＥｘｔｅｎｓｉｏｎＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＭＯＥＡ）技术，检测了３个家系的１２条染色体的β－珠蛋白基因突变类型，共检测到３种基因突变类型：ｅｏｄｏｎ４１－４２（－ＴＣＴＴ）移码突变，ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）突变和ｃｏｄｏｎ１７（Ａ→Ｔ）突变（各占３３．３％）。     

14例β—地中海贫血的突变基因分析

β－地中海盆血是一种遗传性溶血性疾病，常见于我国南方地区。本文应用突变引物延伸扩增ＰＣＲ技术对来自于福建省不财了区的１４例β－地中海贫血患者的突变基因进行了分析，结果显示，在本组病例中ＩＶＳ－Ⅱ－６５４突变最常见。     

下调NPM基因表达对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的抑制作用研究

目的:运用RNA干扰技术抑制核仁磷酸蛋白(NPM)的表达,研究NPM基因在慢性髓系白血病细胞株(K562细胞)增殖中的作用及其机制。方法:采用shRNA抑制NPM的表达,应用实时荧光定量PCR技术检测NPM基因的表达,MTS法检测抑制NPM基因对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞周期的改变,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:成功构建了针对NPM基因的shRNA慢病毒载体,并感染K562细胞。检测结果显示,与对照组相比较,抑制K562细胞NPM基因的表达可以抑制细胞的增殖,减少细胞集落形成。干扰NPM基因可使G0/G1期延长,细胞周期阻滞,这可能与下调NPM基因后激活p21蛋白的表达,进而抑制CDK2/Cyclin E复合物形成有关。结论:下调K562细胞NPM基因的表达,可以通过诱导细胞周期阻滞抑制K562细胞的增殖。