胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌检测 中的应用评价

摘要:目的评估胶体金免疫 层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CPE)中的应用价值。方法收集福建医科大学附属第一医院分离的65株肠杆菌目细菌,包括41株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细茵(CRE)和24株非CRE菌株。采用PCR法检测5种 碳青霉烯类耐药基因( blaxc、blamp、blavw bax._s.m. .blaxmw),改良碳青霉烯类失活法(mCIM)与EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)以及胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶并分型,以PCR结果为参考,评估各方法的检测性能;挑取其中29株CRE与 24株非CRE构建模拟阳性血培养瓶,报阳后以胶体金免疫层析法进行分型检测并评估其性能。结果PCR 结果发现25株菌携带blarc基因.7株携带blasow基因.4株携带blamp基因.4株同时携帶blaxpc.Nou基因 .1株同时携带barc.NM..基因,另. 外24株未检出相应耐药基因。41株CRE的mCIM试验结果均为阳性,其中11株eCIM试验结果阳性。24株非CRE菌株的mCIM试验结果均为阴性。mCIM 试验与eCIM联合试验检测丝氨酸酶的敏感性与特异性均为100.00%, Kappa 值为1.000;检 测金属酶的敏感性为68.75%、特异性为100.00%,Kappa值为0.725。胶体金免疫层析法均能准确检出临床分离株与血培养阳性标本中的碳青霉烯酶,与PCR法的分型结果一致,因此其敏感性与特异性均为100.00%, Kappa值为1.000。结论胶体金 . 免疫层析法操作简便、用时较短,具有较高的敏感性与特异性,同时可大大缩短CPE血流感染的诊断时间,适合临床的推广应用。     

支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖检测在老年肺部疾病并存侵袭性肺曲霉病的诊断价值初探

目的 了解支气管肺泡灌洗液(BALF)半乳甘露聚糖(GM)检测在老年人肺部疾病并存侵袭性肺曲霉病(IPA)诊断中的价值。 方法 收集半年来因肺部疾病住院并高度怀疑并存IPA的老年患者,予支气管镜行支气管肺泡灌洗后,行BALF GM检测,同时行血清GM检测,并予痰或BALF真菌培养及涂片、胸部计算机断层显像(CT)等检查,依照欧洲癌症研究及治疗组织和真菌研究小组(EORTC/MSG)的建议,依宿主因素、临床特征、微生物学证据和组织病理学检查,将入选者分为确诊IPA、临床诊断IPA、拟诊IPA和非IPA患者,用统计学方法了解BAIF GM检测的诊断效率。 结果 共76例高度怀疑IPA的老年患者入选,其中1例确诊IPA,11例临床诊断IPA,6例拟诊IPA,以上18例作为病例组,其余58例非IPA患者作为对照组。当以GM值为0.5作为界值时,BALF GM检测的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为83.3％、82.8％、60.0％和94.1％.而血清GM检测在同样界值时的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为55.6％、91.4％、66.7％和86.9％;以GM值为1.0作为界值时,BALF GM和血清GM的特异度、阳性预测值均可达100％,但BALF GM检测的敏感度和阴性预测值（66.7％和90.6％）明显高于血清GM检测（22.2％和80.6％）。受试者工作特性曲线(ROC)分析结果显示,以GM值0.725为界值时BALFGM检测诊断效率最高,其敏感度、特异度分别为83.3％、96.6％。 结论 BAIF GM检测在诊断老年人肺部疾病并存IPA中具有重要意义,值得广泛推广。     

一株罕见Ihumii放线菌的分离和鉴定

正放线菌大多存在于健康人口腔、上呼吸道、胃肠道和泌尿生殖道等与外界相通的腔道,是寄居人体的一种正常菌群[1-2]。当机体免疫力减弱、口腔卫生不良、拔牙或外伤时,可侵入组织导致皮肤、皮下组织,肌肉,骨骼及中枢神经系统化脓性感染[3]。根据感染的途径和涉及的器官不同,临床上分为面颈部、胸部、腹部和中枢神经系统感染。其主要特征为慢性化脓性肉芽肿病变,以向周围组织扩展形成瘘管并排出带     

2011-2013年临床血培养病原菌的分布及耐药性变迁

目的 了解福建医科大学附属第一医院血液培养标本中病原菌分布及耐药性变化规律.方法 回顾性分析2011年至2013年从32779份血培养标本中分离的3098例阳性标本中病原菌种类及其药敏检测结果.结果 病原菌血培养阳性率为9.45％(3098/32779),居前5位的是大肠埃希菌(20.92％,648/3098)、凝固酶阴性葡萄球菌(16.59％,514/3098)、肺炎克雷伯菌(11.14％,345/3098)、金黄色葡萄球菌(6.23％,193/3098)和鲍曼不动杆菌(6.10％,189/3098).但从2013年开始出现对碳青霉烯类药物耐药的肺炎克雷伯菌菌株,其对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为3.18％和3.16％;凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌尚未发现对万古霉素耐药.结论 血培养分离的细菌菌种呈多样化,大肠埃希菌仍然是血流感染的首要致病菌,且其耐药率有上升趋势;凝固酶阴性葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的分离率有所增加.应继续开展病原菌分布及其耐药性监测,用于指导临床医生合理使用抗生素.     

改良显色平板在筛查碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中的性能评价

目的碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的感染是威胁人类健康的重要卫生问题。建立一种快速、准确的筛查方法是应对这种威胁的关键措施;本研究旨在制备快速检测CRE的改良显色平板并对其性能进行评价。方法以传统的PCR方法为参考方法,用临床标本分离出的49株CRE及24株非CRE对3种改良显色平板的敏感度和特异度进行评价;其中,21株CRE用于三种改良平板的检测限评价。结果亚胺培南改良显色平板的敏感度为83.7%(41/49),特异度为100%(24/24)。美罗培南改良显色平板的敏感度为87.8%(43/49),特异度为100%(24/24);厄他培南改良显色平板的敏感度为93.9%(46/49),特异度为95.8%(23/24)。结论三种改良显色平板均具有较高的敏感度与特异度,且操作简便,无需昂贵的仪器,对人员技术要求低;厄他培南改良显色平板相对于美罗培南与亚胺培南改良显色平板,其还具有检测限低的特点,更适用于临床的推广应用。     

MAS-PCR法快速诊断分析Leber''''s遗传性视神经病变原发性致病突变位点

目的探索一种简易、快速、高效的临床基因诊断分析原发性Leber’s遗传性视神经病变(Leber’s hereditaryoptic neuropathy,LHON)位点的新方法。方法根据已知的LHON患者线粒体DNA上的3个原发性LHON致病突变位点(G11778A、T14484C和G3460A),设计3条突变位点特异性聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)引物,直接以全血样为模板的等位基因特异性多重PCR(multiplex allele-specific polymerase chain reaction,MAS-PCR)分析3个原发性LHON致病突变位点。以此方法检测24例确诊的LHON患者,其中18例为线粒体DNA G11778A突变,4例为T14484C突变,2例为G3460A突变;同时,以20份正常血样标本作阴性对照。结果优化的MAS-PCR条件为94℃/3min,94℃/30s、59.8℃/30s、72℃/30s,30个循环,72℃/3min;以此方法检测了44份血样标本,其结果与预期结果一致,表明利用该方法筛查3个原发性LHON致病突变位点是可行的。同时,混和血液样本模拟实验结果显示,该方法可检测含多个原发性LHON致病突变位点的血液样本,且整个分析过程只需约2h。结论该方法直接以全血样作为PCR的模板,不需从血样中纯化DNA;单管一次性行PCR,可同时筛查3个原发性LHON致病突变位点。因此,该方法具有快速、高效、费用低、特异性好以及只需微量血液样本等优点。     

立体化引导式临床微生物实习带教的建立与实施

立体化引导式实习带教是以完整的微生物标本标准化操作流程为教学轴线,制定实习教学计划。通过实验、问题引导、讨论、讲座、考核和科研等多种方式的立体化应用．引导实习生完成对微生物“检验全过程”的学习,培养学生临床科学思维方法、分析能力、实践能力乃至独立工作能力。再根据标准操作流程制定相对应的量化实践评价标准,考核实习生对检验流程中各项职业技能的实际掌握情况及综合应用的水平。这一带教模式体现了现代检验医学的工作理念,并能更加科学、客观地评估人才的培养质量和教学质量。自实施以来提高了实习生的综合职业素质,为其毕业后走上工作岗位做好准备,得到实习生的高度评价,并提升了微生物实验室实习带教的水平。希望这一实践经验的推广会成为检验医学教育发展的一个有益尝试。     

育龄女性社区获得性生殖道支原体感染及耐药分析

目的 了解本地区育龄女性社区获得性生殖道支原体感染及耐药情况,为临床诊治提供依据。方法 2016年11月至2017年10月,采集门诊育龄女性患者生殖道分泌物标本共2 836份进行支原体培养、鉴定及药敏操作。育龄女性按每10岁年龄段进行分组并计算分析结果。结果 育龄女性社区获得性生殖道支原体感染以Uu单纯感染为主(430/574,74.9%),其次为Mh单纯感染(83/574,14.5%),同时感染Uu+Mh(61/574,10.6%),不同年龄段以25~34岁为感染检出的数量最多。单纯Uu感染时仅对氟喹诺酮类药物的耐药率大于10%,其余抗生素耐药率较低(<10%);单纯Mh感染时,仅对氟喹诺酮类药物的耐药率大于50%;混合感染Uu+Mh时耐药性明显高于单纯感染。结论 育龄女性社区获得性生殖道支原体感染以25~34岁居多,Uu感染为主,其次为Mh感染,除氟喹诺酮类药物外,其余抗生素均较为敏感。     

179株无乳链球菌的标本分布及耐药性分析

目的分析临床分离无乳链球菌的标本分布和对常用抗菌药物的耐药性。方法收集不同来源标本,在VITEKⅡ微生物分析仪上采用GPI卡和GP67卡进行菌种鉴定和药敏实验,红霉素、美罗培南的药敏实验及D-试验采用K-B纸片法检测。结果共收集无乳链球菌179株,标本的主要来源为中段尿(63.1%)、生殖道(7.8%)和伤口分泌物(6.7%)。来源患者年龄大于50岁的110例(61.5%),女性患者113例(63.1%),孕妇12例(6.7%),母婴垂直感染3例(1.7%),肿瘤、手术、放化疗、糖尿病、结核等患者82例(45.8%)。无乳链球菌对青霉素的耐药率除2008年之外均小于10%,对四环素的耐药率均大于80%,对红霉素的耐药率为42.9%~93.3%,对克林霉素的耐药率为41.9%~80.0%,D实验阳性率为4.1%。未发现对万古霉素、美罗培南的耐药株,偶见喹奴普丁/达福普丁耐药株。结论成年人感染无乳链球菌中最常见的是泌尿生殖系统感染和软组织感染,女性患者比例高于男性;青霉素和其他β-内酰胺类药物仍可作为无乳链球菌感染经验用药的首选药物;四环素、红霉素、克林霉素的抗菌作用是有限的,必须有实验室药敏实验结果作为使用依据。     

血清及支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖检测对侵袭性肺曲霉感染的诊断价值

目的评价血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)β半乳甘露聚糖(GM)检测对侵袭性肺曲霉感染的诊断价值。方法采集患者血清和肺泡灌洗液检测半乳甘露聚糖,计算不同阈值时的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果共收集肺部感染86例,病例组20例,对照组66例。两组之间血和BALFGM差异均有统计学意义(P<0.01),病例组血和BALF之间差异有统计学意义(P<0.01);取0.75为诊断阈值,血清标本的敏感度、特异度,阳性预测值和阴性预测值分别为35.0%、95.5%、70.0%和82.9%;BALF为65.0%、90.9%、68.4%和89.6%。结论血清和BALFGM检测具有较高的特异度(80%～100%),BALF具有更高的敏感度和阴性预测值;对缺乏深部真菌感染诊断依据的肺部感染患者,血清及BALFGM明显增高可早期提示有发生侵袭性肺曲霉感染的可能。