14,15-EET通过线粒体途径减轻烟雾诱导的肺上皮细胞凋亡

目的观察14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-EET)对香烟烟雾提取物(CSE)刺激肺上皮细胞凋亡的影响,并观察14,15-EET对线粒体膜电位、线粒体形态变化的影响,初步探讨其可能的机制。方法培养支气管肺上皮细胞(Beas-2B),实验分为对照组、CSE刺激组(加入5%CSE液)、CSE+14,15-EET组(1 mmol/L 14,15-EET预处理1 h后再加入5%CSE)及CSE+14,15-EET+14,15-环氧二十碳-5(Z)-烯酸(14,15-EEZE)组(1 mmol/L 14,15-EEZE预处理1 h后加入1 mmol/L 14,15-EET孵育1 h,最后加入5%CSE)。采用TUNEL方法检测肺上皮细胞细胞凋亡情况,应用JC-1染色的方法观察线粒体膜电位的变化,用透射电镜观察线粒体超微结构改变,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞DRP1及PINK1 mRNA含量变化。结果CSE刺激组较对照组[(23.80±6.54)%vs.(6.20±2.59)%]肺上皮细胞细胞凋亡指数明显增加,CSE+14,15-EET组[(13.00±3.54)%]较CSE刺激组凋亡指数明显降低,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组[(22.20±7.53)%]较CSE+14,15-EET组细胞凋亡指数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。CSE刺激组较对照组(2.28±0.54 vs.4.03±0.63)线粒体膜电位降低,CSE+14,15-EET组(3.22±0.20)较CSE刺激组粒体膜电位升高,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组(2.13±0.27)较CSE+14,15-EET组线粒体膜电位明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CSE刺激组较对照组(2.09±0.25 vs.1、1.88±0.28 vs.1)DRP1及PINK1 mRNA表达水平明显增加,CSE+14,15-EET组(1.14±0.17、1.11±0.23)较CSE组DRP1及PINK1 mRNA表达水平显著降低,而CSE+14,15-EET+14,15-EEZE组(1.64±0.24、1.75±0.29)较CSE+14,15-EET组DRP1及PINK1 mRNA表达水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论14,15-EET可能通过线粒体途径减轻CSE诱导的肺上皮细胞凋亡。