重组血小板第4因子在甲醇酵母中的高效表达

目的 利用甲醇酵母高效表达重组人血小板第4因子（rhPF4)。方法 用PCR方法扩增出血小板第4因子（PF4）cDNA序列，插入到穿梭质粒pPIC9的MFα信号肽后，在醇氧化脱氢酶1（AOX1）启动子的下游，得到重组质粒pPIC9-PF4，转化到甲醇酵母宿主菌GS115，经筛选得到PF4高表达菌株进行表达，并测定表达产物氨基酸序列和生物学功能。结果 rhPF4氨基酸序列与天然PF4相同，可中和肝素抗凝作用，并呈剂量相关。结论 rhPF4可在甲醇酵母中获得生产规模表达，产物性质和天然的PF4相同。     

联合应用骨保护素和阿伦膦酸钠对破骨前体细胞分化的影响

目的：探讨联合应用重组人骨保护素活性片断和阿伦膦酸钠对破骨细胞前体细胞（RAW264.7）分化的抑制效果，并探讨二者是否具有抑制破骨细胞前体细胞（RAW264.7）分化的协同作用。方法：实验于2004-06／12在解放军总医院骨科研究所完成。酶消化法获取新生小鼠颅骨成骨细胞，与破骨细胞前体细胞（RAW264.7）按照4：1比例混合，培养于96孔板中和6孔板骨磨片体系中。分别使用1&;#215;10^-5g／L重组人骨保护素活性片断、10mol／L阿伦膦酸钠、1&;#215;10^-5g/L重组人骨保护素活性片断＋10mol／L阿伦膦酸钠作用于96孔板和6孔板混合细胞体系，并设空白对照。9d后，观察破骨细胞数目和形态，计算单位面积内重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞个数，并行骨磨片吸收陷窝计数。统计学分析评价其抑制破骨细胞分化效果。结果：①破骨细胞常规形态及重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞计数：小鼠成骨细胞与RAW264．7混合培养并加入药物后9d，空白列照组出现大量多核成熟破骨细胞，重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色证实为成熟破骨细胞。②骨磨片吸收陷窝形态及计数：与空白对照组相比，其余各组破骨细胞重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞个数，骨磨片吸收陷窝计数均明显减少，以1&;#215;^-5g／L重组人骨保护索糟性片断＋10mol/L阿伦膦酸钠组减少最为显著。③重组人骨保护素活性片断组与阿伦膦酸钠组析因设计的方差分析：加药后9d重组人骨保护素活性片断与阿伦膦酸钠存在交互作用（F=19．878，623．57；P〈0．05）。结论：联合应用重组人骨保护素活性片断和阿伦膦酸钠可以发挥交互协同作用，更有效地抑制RAW264．7向成熟破骨细胞的分化。     

联合应用骨保护素和阿伦膦酸钠对破骨前体细胞分化的影响

目的:探讨联合应用重组人骨保护素活性片断和阿伦膦酸钠对破骨细胞前体细胞(RAW264.7)分化的抑制效果,并探讨二者是否具有抑制破骨细胞前体细胞(RAW264.7)分化的协同作用。方法:实验于2004-06/12在解放军总医院骨科研究所完成。酶消化法获取新生小鼠颅骨成骨细胞,与破骨细胞前体细胞(RAW264.7)按照4:1比例混合,培养于96孔板中和6孔板骨磨片体系中。分别使用1×10-5g/L重组人骨保护素活性片断、10mol/L阿伦膦酸钠、1×10-5g/L重组人骨保护素活性片断+10mol/L阿伦膦酸钠作用于96孔板和6孔板混合细胞体系,并设空白对照。9d后,观察破骨细胞数目和形态,计算单位面积内重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞个数,并行骨磨片吸收陷窝计数。统计学分析评价其抑制破骨细胞分化效果。结果:①破骨细胞常规形态及重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞计数:小鼠成骨细胞与RAW264.7混合培养并加入药物后9d,空白对照组出现大量多核成熟破骨细胞,重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色证实为成熟破骨细胞。②骨磨片吸收陷窝形态及计数:与空白对照组相比,其余各组破骨细胞重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色阳性细胞个数,骨磨片吸收陷窝计数均明显减少,以1×10-5g/L重组人骨保护素活性片断+10mol/L阿伦膦酸钠组减少最为显著。③重组人骨保护素活性片断组与阿伦膦酸钠组析因设计的方差分析:加药后9d重组人骨保护素活性片断与阿伦膦酸钠存在交互作用(F=19.878,623.57;P<0.05)。结论:联合应用重组人骨保护素活性片断和阿伦膦酸钠可以发挥交互协同作用,更有效地抑制RAW264.7向成熟破骨细胞的分化。