TGF-β抑制哮喘上皮细胞中EGFR/MAPK信号通路和细胞增殖

目的评估转化生长因子β1(TGF-β1)在哮喘中调控上皮细胞修复的重要作用。方法通过将哮喘患者的上皮细胞与健康志愿者的上皮细胞相比较,评估TGF-β1对于表皮生长因子(EGF)诱导的增殖及其下游信号的影响。用溴代脱氧尿嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖。结果通过将哮喘患者与健康志愿者的上皮细胞相比较,发现上皮细胞的基础增殖和EGF刺激后的增殖都明显减少,而且,ERK1/2磷酸化也减少了,这与EGFR磷酸化的减少相一致。TGF-β1的增加明显减少了EGF诱导的细胞增殖。哮喘细胞与正常细胞相比含有更多的TGF-β1。结论提示在支气管上皮细胞中,TGF-β抑制了EGFR磷酸化及其下游信号。     

肿瘤生物治疗中过敏反应机制的探讨

目的　初步总结肿瘤生物治疗中的过敏反应 ,并探索其与免疫网络之间的关系。方法　用流式细胞仪检测接受肿瘤生物治疗患者的树突状细胞表面CD4 0、CD83的表达。结果　对于过敏病人 ,加入该病人血清前后的树突状细胞表面CD4 0、CD83的表达量具有明显差异 ,加入后的表达量明显低于加入前的表达量 (P <0 0 5 ) ;对于未过敏病人 ,加入病人血清前后的树突状细胞表面CD4 0、CD83的表达量无明显差别 (P >0 0 5 )。结论　肿瘤生物治疗中的过敏反应与免疫网络具有一定的相关性 ,检测免疫网络可预测治疗效果。     

Cox7a2在小鼠睾丸支持细胞中的表达及定位

不育症的发病机制与支持细胞功能障碍有关,但是否与线粒体有关至今仍不清楚。本研究通过原代细胞培养以及荧光共定位技术,观察小鼠睾丸支持细胞中Cox7a2的表达与定位。通过纯化的支持细胞,在荧光显微镜下观察到了线粒体中Cox7a2的表达。从而为探讨支持细胞线粒体功能障碍的研究打下了基础。     

小鼠Leydig细胞中调控类固醇合成时EGF与TGF-β1的相互作用

目的 探讨在纯化的小鼠Leydig细胞的原代培养中,转化生长因子-β1(TGF-β1)和表皮生长因子(EGF)在调控类固醇合成中的相互作用.方法 纯化小鼠睾丸Leydig细胞,并将其分为四组,不加EGF或TGF-β1的空白对照组、仅加入EGF(10ng/ ml; 72h)的EGF组、仅加入TGF-β1(1ng/ml; 48h)的TGF-β1组和加入EGF与TGF-β1的EGF+ TGF-β1组.在不同条件下,通过特定的放射免疫(RIAs)法检测培养基中睾酮和脱氢表雄酮(DHEA)的表达水平. 结果 TGF-β1和EGF分别增强了人绒毛膜促性腺激素 (hCG)刺激睾酮合成的功能,二者的最大浓度效应在促性腺激素的激素作用中是叠加效应.它们的叠加效应来自一种复杂的相互作用,这一相互作用发生在胆固醇底物水平和3β-羟基类固醇脱氢酶/异构酶(3βHSDI)作用的水平. 结论 TGF-β1和EGF对于线粒体胆固醇底物活性的相互抑制效应,伴随着对3βHSDI活性的刺激增加效应,表明这两种生长因子对于促性腺素诱导的睾丸雄激素合成具有叠加效应.     

胰腺癌中凋亡抑制基因的表达意义

目的　探讨凋亡抑制基因 (survivin)在胰腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法　应用免疫组织化学链霉菌抗生物素 -过氧化酶连接法 (SP法 )检测survivin的表达情况。结果　胰腺癌中survivin阳性表达率为 87.88% ,高于 12例正常胰腺组织 (41.6 7% )具有差异性 (P <0 .0 5 ) ;而 10例良性胰腺疾病组织中均为阴性表达 ,与癌组织比较 ,具有差异性 (P <0 .0 5 ) ,且survivin与胰腺癌病理分级、TNM分期及淋巴结转移情况无关。结论　survivin在胰腺癌中的高表达提示其可能与肿瘤的发生有关 ,是胰腺癌早期而普遍的事件 ,有望成为一新的肿瘤标志物应用于临床 ,协助胰腺癌早期诊断和靶向性治疗。     

人胰腺癌组织中Survivin和P53的表达

目的:探讨人胰腺癌组织中Survivin和P53的表达及意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测33例人胰腺导管腺癌、12例癌旁正常胰腺组织和10例良性胰腺疾病组织中Survivin、P53的表达.结果:胰腺癌组织中Survivin阳性表达率为29/33,高于正常胰腺组织5/12及良性疾病组织0/10(P＜0.05);胰腺癌组织中P53阳性表达率为17/33,高于正常胰腺组织0/12及良性疾病组织0/10(P＜0.05).胰腺癌组织中P53和Survivin表达有相关性(P=0.044).结论:Survivin的过表达可能与胰腺癌的发生有关,且与P53表达密切相关,2者协同参与了胰腺癌的发生、发展.     

CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗中的佐剂效应

目的：探讨CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗中的佐剂效应。方法：培养Eca-109细胞,用酸洗法收集细胞膜表面小肽,再用去盐、浓缩、超滤法纯化这些小肽后,以此刺激人外周血树突状细胞（DC）作为人食管癌疫苗,不用小肽刺激的DC作为对照疫苗,并用这些疫苗加佐剂CpG基序激活纯化的T细胞。实验分组：①CpG基序加食管癌疫苗组（CpG—Ve）;②CpG基序加食管癌对照疫苗组（CpG—Vc）;③单纯食管癌疫苗组（Ve）;④单纯食管癌对照疫苗组（Vc）;⑤单纯CpG基序刺激组;⑥直接用纯化的T细胞加Eca-109细胞作效应对照组。用^3H渗入法对各组行T细胞增殖试验,用^51Cr释放试验测定各组细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的活性。结果：CpG-Ve组的T细胞增殖活性和CTL对Eca-109细胞杀伤率均高于其余各组（P〈0．01）。结论：CpG基序可能是人食管癌疫苗研究中的有效佐剂。     

体外研究CpG基序对人食管癌疫苗的佐剂效应

目的:探讨CpG基序在人食管癌Eca-109细胞疫苗研究中的佐剂效应.方法:以Eca-109细胞膜表面小肽刺激DC作为食管癌疫苗,HL-60细胞膜表面小肽刺激DC作为对照疫苗.以CpG基序作为佐剂,以CBPw作为对照佐剂,测定各组的T细胞增殖试验和CTL活性.结果:佐剂组的T细胞活性明显高于其余各组(P＜0.01);人食管癌疫苗组的T细胞活性明显高于其余各组(P＜0.01);与Eca-109细胞匹配的HLA也影响了T细胞活性的发挥.结论:CpG基序是人食管癌疫苗的有效佐剂,HLA对T细胞功能有影响.     

小鼠睾丸TM4细胞中TGF-β/Smad信号表达及其与EGFR通路的关联

目的 研究转化生长因子-β(TGF-β)信号缺陷及TGF-β与表皮生长因子(EGF)信号通路之间的交叉对话是否涉及唯支持细胞综合征(SCOS)中精原细胞消失的机制.方法 以TM3(小鼠睾丸间质细胞)、3T3(小鼠胚胎成纤维细胞)和B82(小鼠肺成纤维细胞)作对照,研究TM4(小鼠睾丸支持细胞)细胞在TGF-β1作用下的细胞增殖性;通过瞬时转染和荧光素分析技术,检测TGF-β反应启动子p3TP-Lux的活性;通过western blot检测TGF-β与EGFR信号通路的蛋白表达.结果 体外实验表明,TGF-β1能够明显抑制TM3和B82的细胞增殖(P<0.05),但不能明显抑制TM4和3T3的细胞增殖.结论 TGF-β信号通路及其与EGFR通路之间的相互作用在支持细胞功能紊乱中有可能起到了重要作用,并可能参与了SCOS发病机制中生殖干细胞的消失.     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期食管癌中自噬的研究

目的:探讨紫杉醇联合顺铂治疗前后,晚期食管癌细胞自噬的表达,为进一步研究食管癌的化疗耐药性提供依据.方法:随机筛选2005年1月～2008年12月郑州大学第二附属医院Ⅲ、Ⅳ期食管鳞癌21例,给予紫杉醇(PTX)加顺铂(DDP)联合化疗1个疗程前后,穿刺活检,使用淋巴细胞分离液分离肿瘤细胞,用电子显微镜观察自噬的表达,用MDC染色检测细胞自噬活性.结果:电镜显示,在化疗处理后的肿瘤细胞胞浆中出现大量的自噬泡(7.86±1.37),对照组未发现自噬泡的生成(0.03±0.28).MDC染色显示,化疗处理组细胞胞浆中存在大量的MDC标记上的点状结构(27.2±5.6),而对照组中这种结构较少(5.2±1.1).因此与紫杉醇联合顺铂治疗前相比,化疗后自噬泡显著增多(P<0.05),细胞自噬活性显著增加(P<0.05).结论:紫杉醇联合顺铂能够明显增加晚期食管癌细胞的自噬活性,这提示抑制自噬,有可能改善食管癌的疗效.