钙对HaCaT细胞整合素β1启动子活性和表达及细胞迁移的影响

目的 了解钙离子对人永生化KC株HaCaT细胞整合素β1启动子活性、蛋白表达及细胞迁移的影响.方法 (1)体外培养HaCaT细胞(12孔板),按随机数字表法分为5组,每组18孔.分别用pGL3启动子(阳性对照组)、pGL3空载体(阴性对照组)及pGL3-1756 bp(全长启动子组)、pGL3-1442 bp(远端启动子组)、pGL3-261 bp(近端启动子组)报告质粒转染HaCaT细胞,转染分别在含0.00、0.03、0.09、0.30、0.80、1.20 mmol/L钙离子的无血清RPMI 1640培养液中进行(每组每种浓度3孔).24 h后用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶相对活性.(2)取本室构建的稳定转染小干扰RNA-整合素β1载体(简称稳定转染)的HaCaT细胞,常规培养后按随机数字表法将细胞分为6部分,用前述6种浓度钙离子处理,每种浓度3个样本.采用蛋白质印迹法检测整合素β1蛋白表达水平.(3)于6孔板中培养正常HaCaT细胞和稳定转染的HaCaT细胞,每种细胞18孔.按常规进行划痕处理后,用含前述6种浓度钙离子的培养液(按随机数字表法划分.每种浓度3孔细胞)培养12 h.观察并检测细胞迁移率.(4)对各实验结果进行单因素方差分析和独立样本t检验.结果 (1)全长启动子组细胞在钙离子浓度由0.00 mmol/L升至0.09、0.30 mmol/L时,荧光素酶相对活性由0.16±0.09升至0.39±0.09、0.35±0.05(t值分别为3.143、3.140,P值均小于0.05);当钙离子浓度升至0.80、1.20 mmol/L时,荧光素酶活性下降.远端启动子组细胞荧光素酶相对活性随钙离子浓度变化的趋势与全长启动子组相似,但在0.09、0.30 mmol/L时,该酶活性分别为0.56±0.32和0.64±0.06,明显高于全长启动子组(t值分别为0.887、6.122,P值均小于0.05).各种浓度钙离子对近端启动子组荧光素酶相对活性无明显影响.(2)当钙离子浓度为0.00 mmol/L时,稳定转染的HaCaT细胞整合素β1蛋白表达量为0.53±0.10.当钙离子浓度为0.03、0.09、0.30、0.80、1.20 mmol/L时,整合素β1表达量分别为0.58±0.09、1.40±0.29、1.41±0.09、0.99±0.10、1.16±0.15,与0.00 mmol/L时比较均明显升高(t值分别为0.687、4.880、11.210、5.578、6.199,P值均小于0.05).(3)与钙离子浓度为0.00 mmol/L比较,当钙离子浓度为0.09、0.30 mmol/L时,正常HaCaT细胞迁移率明显增高;0.80、1.20 mmol/L时,迁移率明显降低.稳定转染的HaCaT细胞经各种浓度钙离子处理后,细胞迁移率无明显改变.结论 整合素β1远端启动子是调节人表皮细胞整合素β1转录的主要区域,钙离子对整合素β1启动子活性、蛋白表达和细胞迁移具有调节作用.     

封闭负压治疗技术不同压力值对深度烧伤创面移植皮片成活影响的临床研究

目的探讨深度烧伤创面植皮术后外加不同强度封闭负压治疗对移植皮片成活的影响。方法我院收治的深度烧伤需行植皮术患者60例,按随机数字表示分为6组,入院后2~3 d安排清创植皮手术,术后分别采用不同固定方式及不同压力强度固定皮片。比较6组患者植皮术后第7天创面皮片成活率、创面分泌物细菌培养阳性率,14天创面愈合率及创面愈合时间。结果烧伤创面植皮术后封闭负压治疗技术组(B~F组)7天创面皮片成活率、14天创面愈合率、创面愈合时间均优于传统包扎治疗组(A组);其中以C、D、E组结果最优(P0.05)。A组与D组术后7天移植皮片血管化差异无统计学意义(P0.05)。结论烧伤创面植皮术后应用负压封闭引流技术可以促进植皮创面愈合,尤以压力强度75~125 mm Hg为佳。     

猪烧伤创面渗出液蛋白质组学及创面修复过程中蛋白水解动态变化研究

目的 分析猪烧伤创面愈合不同时期创面渗出液蛋白质和蛋白N端动态变化,确定评估创面进展关键转折点的候选生物标志物.方法 西藏小型猪8头,随机分为4组,每组2头:伤后第0～2天(2 d)、第2～4天(4 d)、第4 ～6天(6 d)、第6～8天(8 d).用固体酒精燃烧30 s制作4组5 cm大小深二度皮肤烧伤创面,并将环氧乙烷灭菌的泡沫敷料切成适当的尺寸并置于创面内以收集创面渗出液.利用末端胺底物同位素标记技术-同位素标记相对或绝对定量技术(TAILS-iTRAQ)从猪烧伤模型的创面渗出液中建立了一个时间分辨的蛋白质组和N-末端组模型,并利用该模型来解释接受烧伤患者的异质数据集,确定表皮和真皮来源蛋白质的差异丰度和蛋白水解过程在评估创面进展关键转折点的潜在生物标志物候选物.结果 研究从猪创面渗出液中收集了1060种可定量蛋白质和1667种neo-N-末端的数据集.通过单向方差分析,确定了416种蛋白质和371种neo-N-末端的丰度随时间发生显著变化以及188个neo-N-末端子集[它们相对于整个蛋白质的丰度发生了显著变化(裂解)].IPA富集分析显示,与炎症相关的通路(巨噬细胞中的活性氧/一氧化氮合酶、急性期信号传导、补体系统)和损伤有关的通路(凝血系统)在烧伤后第4、6天(聚类2和3)具有高丰度以及与细胞增殖和迁移相关的蛋白质在愈合阶段(第8天)(聚类4和5)具有高丰度.对猪烧伤创面模型和患者数据得出的时间分辨蛋白丰度谱的相关性进行分析显示,上皮黏着连接动态相关的蛋白质丰度变化具有极高的相关性(0.84 ～0.98),其中黏附蛋白Zyxin(ZYX)、Ras GT-Pase激活蛋白IQGAP1(IQGA1)、丝氨酸蛋白酶丝氨酸肽酶1(HTRA1)可作为创面负压吸引治疗治疗患者创面渗出液中愈合进程的标志.结论 通过采用iTRAQ-TAILS分析来自猪烧伤模型的创面渗出液,鉴定了体内许多已知和新颖的蛋白水解加工事件,反映了这种高度复杂的组织反应中蛋白酶活性的关键域.     

血清白细胞衍生趋化因子2与糖尿病足患者炎症因子水平及预后的关系

目的:探究糖尿病足(DF)患者血清白细胞衍生趋化因子2(LECT2)与炎症因子水平以及预后的关系。方法:回顾性分析2020年3月至2021年9月我院收治的120例DF患者的临床资料,根据患者血清LECT2水平分组,<均值为A组(n=57),≥均值为B组(n=63),比较两组患者一般资料、血脂、血糖、血清炎症因子水平和出院3个月后的足预后情况。结果:与A组相比,B组Wagner分级3级者所占比例较高,甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及空腹血糖升高,高密度脂蛋白胆固醇水平降低,血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6以及C反应蛋白水平均升高(P<0.05)。A组足愈合率高于B组(86.0%vs 69.8%,P<0.05)。结论:血清LECT2高水平的DF患者病情更严重;血清LECT2水平升高可能提示预后不良。     

不同拉伸力加载培养对人血管内皮细胞增殖情况的影响和意义

目的 探讨外在不同强度机械拉伸力加载对体外培养人血管内皮细胞生长的影响和相关生长因子的表达情况,以及其在临床负压治疗中的指导意义.方法 对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞加载不同拉伸力干预,实验分6组,分别加载FX-5000T应力系统不同大小拉伸力(拉伸度分别为0、5%、10%、15%、20%、30%)后,利用CCK-8 法检测细胞增殖情况,qRT-PCR检测血管形成因子相关基因VEGF、Flk-1、Tie-2 表达水平,提取相关蛋白 WB检测Flk-1、Tie-2 蛋白表达水平.结果 各应力加载培养组细胞活性下降,且应力越高细胞活性越低;各应力组细胞内VEGF、Flk-1、Tie-2基因的表达呈不同程度下调趋势,且应力越高,VEGF、Flk-1、Tie-2的表达越低;各应力组细胞内Flk-1、Tie-2的蛋白表达呈下调趋势,且呈现一定的剂量依赖性,即应力越高,Flk-1、Tie-2的蛋白表达越低.结论 外在拉伸力对人血管内皮细胞生长增殖有一定影响,且长时间超生理范围的拉伸力对人血管内皮细胞的增殖有明显抑制作用.     

外用富林蜜凝胶治疗烧伤残余创面的多中心临床试验

目的 评价富林蜜凝胶在烧伤患者残余创面中的应用价值. 方法 2011年11月一2012年5月,选择6家笔者单位的60例烧伤残余创面患者进行多中心、随机、自身对照临床试验.将每例患者的2个残余创面按照随机数字表法分为治疗组与对照组,治疗组使用富林蜜凝胶处理,对照组采用碘伏纱布处理.用药后7、14 d比较2组创面的愈合率,并统计完全愈合创面数量;以视觉模拟评分法(VAS)评价患者每次换药的疼痛主诉,统计0分、大于0分且小于或等于3分、大于3分且小于或等于6分、大于6分且小于或等于10分的平均创面数量;统计2组创面的细菌检出情况并观察治疗过程中患者的不良反应.对数据进行重复测量方差分析、t检验、x 2检验或非参数秩和检验.结果 用药后7d,治疗组与对照组创面愈合率分别为(67±24)％和(45±25)％;用药后14 d,治疗组与对照组创面愈合率分别为(92±16)％和(72±23)％,组间比较差异有统计学意义(F=32.388,P ＜0.01).用药后7d,治疗组和对照组分别有10、4个残余创面愈合,组间比较差异无统计学意义(x2 =0,P＞0.05);用药后14 d,治疗组和对照组累计分别有42、7个残余创面愈合,组间比较差异有统计学意义(x 2 =42.254,P＜0.01).治疗组37个创面换药时患者感到轻微疼痛,VAS评分为大于0分且小于或等于3分;对照组43个创面换药时患者感到明显疼痛,VAS评分为大于3分且小于或等于6分,组间各级疼痛评分的平均创面数量比较,差异有统计学意义(Z=-4.638,P＜0.01).2组创面换药过程中检出的细菌包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、鲍氏不动杆菌、表皮葡萄球菌,组间比较差异无统计学意义(x2=0.051,P＞0.05).患者在用药过程中无不良反应. 结论 富林蜜凝胶可以显著促进烧伤残余创面愈合,明显减轻患者的疼痛.     

参附注射液对严重烧伤早期大鼠肠黏膜屏障功能保护作用的研究

目的观察严重烧伤大鼠早期应用参附注射液后肠黏膜屏障功能的变化。方法健康雄性SD大鼠30只,随机分为正常组、烧伤组和参附治疗组,其中烧伤组和参附治疗组处理致成30%TBSAⅢ°烧伤,并予相应处理,参附治疗组在烫伤后即刻腹腔注射参附注射液(10 mL/kg),于伤后72 h检测血浆内毒素含量,取肠系膜淋巴结(MLN)、肝、脾组织匀浆后进行细菌培养。结果参附治疗组血浆内毒素含量低于烧伤组,而与对照组相近;参附治疗组肠系膜淋巴结、肝、脾组织匀浆细菌易位量低于烧伤组。结论在严重烧伤早期应用参附可以明显减轻肠粘膜损害程度,减少肠源性感染的发生。