甲钴胺对神经源性痛大鼠脊髓神经元凋亡和疼痛的干预效应

目的：通过结扎大鼠坐骨神经以建立神经源性痛模型，探讨甲钴胺对神经源性痛大鼠坐骨神经结扎后脊髓神经元凋亡和疼痛的影响，并从药物对促炎性细胞因子表达的干预这一角度分析其作用途径，从而为神经源性痛的治疗提供实验依据。方法：实验于2003--10／2004--01在武汉大学人民医院动物实验中心完成。选取健康成年雄性Wistar大鼠66只，随机分为3组：假手术组6只、生理盐水组30只、甲钴胺组30只。①生理盐水组与甲钴胺组采用Bennett and Xie模型行坐骨神经结扎术，要求仅留下缢痕而不阻断神经血供。假手术组仅暴露坐骨神经而不进行结扎。②甲钴胺组在坐骨神经结扎后腹腔内注射600μg／ks的甲钴胺0．25mL，以后每天腹腔内注射相同剂量，连续3d。假手术组和生理盐水组在相同时间点给予等量生理盐水。③各组分别于术前、术后6h，1，3，7，14d进行行为学测定，记录缩足、热水尾弹阈值。应用免疫组织化学方法和图像分析系统检测脊髓中肿瘤坏死因子和白细胞介素6的表达，采用原位凋亡检测法观察脊髓神经元的凋亡，同时观察脊髓的病理形态学改变。 结果：实验共选用大鼠66只，全部进入结果分析。①坐骨神经结扎后不同时间点各组大鼠缩足痛阈值、热水尾弹痛阈值的变化：与假手术组比较，生理盐水组及甲钴胺组大鼠于术后6h即出现机械性痛觉超敏和热诱发的持续性疼痛（P〈0．05）；术后14d甲钴胺组的缩足痛阈值、热水尾弹痛阈值均已经恢复至基线，而生理盐水组仍较低（P〈0．01）。②坐骨神经结扎后各组脊髓病理学变化：假手术组无明显病理改变。坐骨神经结扎后生理盐水组脊髓灰质神经元细胞内尼氏小体呈中心性或周边性溶解，细胞数明显减少，脊髓白质水肿；甲钴胺组病理改变与生理盐水组相似，但神经元肿胀程度和数量减少程度均较生理盐水组轻（P〈0．05）。③坐骨神经结扎后各组大鼠脊髓肿瘤坏死因子、白细胞介索6表达的变化：假手术组脊髓中均只有少量表达。生理盐水组在坐骨神经结扎后6h，1，3d肿瘤坏死因子、白细胞介素6的表达均明显高于假手术组（P〈0．01）；损伤后14d表达均明显减弱，并接近正常。而甲钴胺组则能显著抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素6的表达，与生理盐水组比较各时间点均有显著差异（P〈0．01或0．05）。④坐骨神经结扎后各组脊髓神经元凋亡指数的变化：生理盐水组在术后6h及1d可见少量标记的阳性细胞，并于术后3d达高峰，术后14d则仅有少量表达；甲钴胺组大鼠脊髓中阳性神经细胞在各时间点均明显少于生理盐水组（P〈0．01），高峰发生在损伤后3d。凋亡指数与疼痛、肿瘤坏死因子、白细胞介素6表达阳性细胞率间均呈正相关（r=0．9，P〈0．01）。 结论：结扎坐骨神经可引起脊髓神经元的凋亡和促炎性细胞因子的过度表达，并与神经源性痛的发展相一致。甲钴胺对大鼠的脊髓能够起到保护作用，可能与其抑制促炎性细胞因子的表达以及神经元凋亡、减轻疼痛有关。     

坐骨神经结扎大鼠脊髓神经元凋亡与痛敏的关系

目的：探讨坐骨神经结扎大鼠脊髓神经元凋亡与痛敏的关系。方法：成年雄性Wistar大鼠50只，采用坐骨神经中段结扎模型，于术前、术后6h、1、3、7及14d分别测定抬足和甩尾潜伏期。应用免疫组织化学方法和图象分析系统检测脊髓中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor—α，TNF—α）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）的表达，采用TUNEL法观察脊髓神经元凋亡，同时用HE及尼氏染色法观察脊髓的病理改变。结果：坐骨神经结扎后6h可诱发出大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏；TNF—α于结扎后6h开始表达，1d达高峰，并于术后14d恢复到基线水平；IL-6于结扎后1d开始表达，术后3d达峰值并持续到术后7d，而后慢慢降低；术后6h脊髓中开始有少量凋亡神经元出现，凋亡指数于术后1d开始迅速增加，术后3d达峰值。结论：结扎坐骨神经可诱发神经源性痛，并导致脊髓神经元的凋亡，其机制可能与促炎性细胞因子TNF—α和IL-6的过度表达有关。     

甲钴胺对神经源性痛大鼠脊髓神经元凋亡和疼痛的干预效应

目的:通过结扎大鼠坐骨神经以建立神经源性痛模型,探讨甲钴胺对神经源性痛大鼠坐骨神经结扎后脊髓神经元凋亡和疼痛的影响,并从药物对促炎性细胞因子表达的干预这一角度分析其作用途径,从而为神经源性痛的治疗提供实验依据。方法:实验于2003-10/2004-01在武汉大学人民医院动物实验中心完成。选取健康成年雄性Wistar大鼠66只,随机分为3组:假手术组6只、生理盐水组30只、甲钴胺组30只。①生理盐水组与甲钴胺组采用BennettandXie模型行坐骨神经结扎术,要求仅留下缢痕而不阻断神经血供。假手术组仅暴露坐骨神经而不进行结扎。②甲钴胺组在坐骨神经结扎后腹腔内注射600μg/kg的甲钴胺0.25mL,以后每天腹腔内注射相同剂量,连续3d。假手术组和生理盐水组在相同时间点给予等量生理盐水。③各组分别于术前、术后6h,1,3,7,14d进行行为学测定,记录缩足、热水尾弹阈值。应用免疫组织化学方法和图像分析系统检测脊髓中肿瘤坏死因子和白细胞介素6的表达,采用原位凋亡检测法观察脊髓神经元的凋亡,同时观察脊髓的病理形态学改变。结果:实验共选用大鼠66只,全部进入结果分析。①坐骨神经结扎后不同时间点各组大鼠缩足痛阈值、热水尾弹痛阈值的变化:与假手术组比较,生理盐水组及甲钴胺组大鼠于术后6h即出现机械性痛觉超敏和热诱发的持续性疼痛(P<0.05);术后14d甲钴胺组的缩足痛阈值、热水尾弹痛阈值均已经恢复至基线,而生理盐水组仍较低(P<0.01)。②坐骨神经结扎后各组脊髓病理学变化:假手术组无明显病理改变。坐骨神经结扎后生理盐水组脊髓灰质神经元细胞内尼氏小体呈中心性或周边性溶解,细胞数明显减少,脊髓白质水肿;甲钴胺组病理改变与生理盐水组相似,但神经元肿胀程度和数量减少程度均较生理盐水组轻(P<0.05)。③坐骨神经结扎后各组大鼠脊髓肿瘤坏死因子、白细胞介素6表达的变化:假手术组脊髓中均只有少量表达。生理盐水组在坐骨神经结扎后6h,1,3d肿瘤坏死因子、白细胞介素6的表达均明显高于假手术组(P<0.01);损伤后14d表达均明显减弱,并接近正常。而甲钴胺组则能显著抑制肿瘤坏死因子、白细胞介素6的表达,与生理盐水组比较各时间点均有显著差异(P<0.01或0.05)。④坐骨神经结扎后各组脊髓神经元凋亡指数的变化:生理盐水组在术后6h及1d可见少量标记的阳性细胞,并于术后3d达高峰,术后14d则仅有少量表达;甲钴胺组大鼠脊髓中阳性神经细胞在各时间点均明显少于生理盐水组(P<0.01),高峰发生在损伤后3d。凋亡指数与疼痛、肿瘤坏死因子、白细胞介素6表达阳性细胞率间均呈正相关(r=0.9,P<0.01)。结论:结扎坐骨神经可引起脊髓神经元的凋亡和促炎性细胞因子的过度表达,并与神经源性痛的发展相一致。甲钴胺对大鼠的脊髓能够起到保护作用,可能与其抑制促炎性细胞因子的表达以及神经元凋亡、减轻疼痛有关。     

丹参酮ⅡA对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响

目的研究丹参酮IIA对糖尿病大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制。方法18只成年雄性SD大鼠,随机分为3组：正常对照组(C组)、糖尿病组(B组)、糖尿病+IIA组(A组)(n=6)。以佐脲霉菌素(STZ)75mg·kg~(-1)一次性经腹腔注射建立糖尿病模型,分别于注射STZ前、注射后7、14、27d测定机械性痛阈。于A组机械性痛阈小于8g开始腹腔注射丹参酮IIA 25 mg·kg~(-1),每日1次,持续2周。于注射STZ后27d处死大鼠,取I_(?)脊髓,采用尼氏体染色法光镜下观察脊髓组织的形态学变化,应用免疫组化法测脊髓神经元降钙素基因相关肽(CGRP)表达。结果与C组比较,A组、B组机械性痛阈降低(P＜0．05)；与B组比较．A组在注射STZ后27 d机械性痛阈升高(P＜0．05)。B组脊髓背角萎缩．冲经元变性坏死,数量减少．背角神经元内尼氏体减少,溶解消失；与B组比较,A组脊髓背角萎缩减轻,神经元数量增多．可见少量尼氏体。C组脊髓背角神经元有较多CGRP表达；B组背角神经元有少量或者无CGRP表达；与B组比较,A组脊髓背角神经元有大量CGRP表达。结论丹参酮IIA减轻糖尿病大鼠神经病理性疼痛,对脊髓背角神经元有保护作用,其机制可能与丹参酮IIA上调脊髓背角神经元CGRP的表达有关。     

行胰士二指肠切除手术中减黄的应用配合

近期我院对4例壶腹部周围癌所致梗阴性黄疸病人,术中先行胆囊\或胆道造瘘,并快速补液利尿,同时行胰十二指肠切除根治术,术中减黄胆效果明显,手术经过顺利.     

神经生长因子对神经源性痛大鼠脊髓保护作用研究

目的 探讨神经生长因子对神经源性痛大鼠脊髓的保护作用及其机制。方法 取成年雄性Wistar大鼠66只，随机分为3组，神经生长因子组30只，结扎坐骨神经后腹腔注射神经生长因子，20 μg·kg^-1;0.9%氯化钠溶液组30只，结扎左侧坐骨神经中段后腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液;假手术组6只，手术仅暴露而不结扎坐骨神经。于术前和术后6 h、1，3，7，14 d分别进行行为学测定，记录大鼠缩爪与尾弹时间。应用免疫组织化学方法和图像分析系统检测脊髓中TNF-α和IL-6的表达，采用TUNEL法观察脊髓神经元凋亡，采用HE染色及尼氏染色法观察脊髓的病理形态学变化。结果 与0.9%氯化钠溶液组比较，神经生长因子组大鼠脊髓TNF-α和IL-6表达降低，脊髓神经元凋亡指数降低且疼痛减轻(均P＜0.01)。 病理学检查显示，神经生长因子组脊髓组织损伤程度较0.9%氯化钠溶液组明显减轻。结论 神经生长因子对大鼠脊髓有保护作用。其机制可能与抑制促炎性细胞因子的表达，从而抑制神经元凋亡和疼痛有关。