FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化北大核心CSCD

目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上。重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJ et转染到HEK293T细胞进行表达。使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色。结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化。结论在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。     

RNA甲基化转移酶METTL3在白血病中的研究进展

近年来,RNA修饰成为表观遗传调控的研究新领域,其中,N6-甲基腺苷(m6A)修饰是发生在腺嘌呤第六位N原子上的甲基化修饰,是真核细胞mRNA最常见、最丰富的化学修饰,由甲基转移酶复合体、去甲基化转移酶及相应的阅读器协同调控,对维持mRNA的稳定性、调节剪接和翻译等过程具有重要意义,并参与肿瘤、生殖、生物节律等多种病理、生理过程。甲基转移酶样蛋白3(METTL3)作为核心成分,在正常造血和恶性血液肿瘤中起着至关重要的作用。该文重点关注METTL3的结构,及其在正常造血和血液恶性肿瘤中的作用,以及METTL3治疗血液肿瘤的潜力,归纳METTL3在白血病中的研究进展及相关作用机制,为白血病的治疗提供新的思路。     

浅析“脊柱枢纽论”

脊柱两端的枕寰枢关节与骶髂关节及脊柱各节段的交接部位颈7胸1交接区、胸12腰1交接区、腰5骶1交接区,甚至椎体与椎体之间的连接结构均是脊柱的关键部位,是脊柱的枢纽部分,对整个脊柱的结构与功能起着制约和调控的作用,对治疗脊柱及其相关性疾病有着重要的临床指导意义。     

基于神经可塑性理论的中医按摩戒毒康复技术

根据神经可塑性理论,反复的吸毒行为能够使连接在一起的同时启动的神经元结构发生变化,令神经元之间的突触连接更为强健,它让吸毒人员对毒品有刻骨铭心的体验,戒毒人员渴求毒品回路的自动化运行,中医按摩戒毒康复技术有意识运动能够阻断戒毒人员渴求回路的自动化过程,可以有效戒治毒瘾和降低复吸率,为科学戒治吸毒行为提供一个可供参考、探索的方向。     

寰枢关节的解剖与功能

寰枢关节是上颈椎节段最复杂、活动度最大的关节,特殊的功能造就了该结构单元的不稳定性和病理的多变性,从而使枕寰枢复合关节成为脊柱区疾病发生、发展的重要因素。本文通过综述寰枢关节区的骨骼、肌肉韧带、神经、血管等解剖结构,总结其运动与稳定功能,以期能深入认识该区的病理变化和相关性疾病。     

卵巢癌顺铂耐药转录组学分析和拮抗剂筛选的研究

目的 探讨卵巢癌细胞顺铂(DDP)耐药后的转录组差异,并基于此筛选找寻潜在的拮抗剂。方法 以A2780细胞为研究对象,构建DDP耐药细胞A2780-DDP;通过转录组学测序分析,找寻DDP耐药的关键因素,并以实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot实验进行验证;通过小分子抑制剂筛选,采用CCK-8细胞活力检测的方法找寻潜在拮抗剂。结果 成功构建了A2780-DDP细胞株,发现耐药后细胞增殖无差异,但细胞侵袭和迁移能力增强;通过转录组学测序分析,发现ITGB7、Akt等可能是DDP耐药的关键基因,且qPCR和Western blot验证发现两者在A2780-DDP细胞株中存在高表达。CCK-8结果显示,雷公藤内酯醇(TPL)、奥拉帕尼等在A2780-DDP细胞株中具有较好的抑制效果。结论 ITGB7/Akt通路在DDP耐药中发挥重要作用,TPL、奥拉帕尼等潜在的DDP耐药拮抗剂可为卵巢癌治疗提供新思路。     

FANCJ基因在成人急性髓系白血病中的突变图谱

目的:检测分析急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者FANCJ基因突变情况,为研究FANCJ突变类型的AML疾病致病机理奠定基础,同时为其疾病防治提供指导。方法:在FANCJ基因蛋白编码区设计引物,采用PCR扩增及sanger测序法检测222例初诊AML患者骨髓细胞中FANCJ基因编码区突变情况,同时检测AML患者黏膜上皮组织FANCJ基因突变情况;采用NCBI Blast在线生物信息学软件分析FANCJ基因突变在不同物种中的进化保守性。结果:测序分析显示,FANCJ基因在蛋白编码区的11个位点出现突变,分别为exon5:c.G430A:p.A144T,exon6:c.A587G:p.N196S,exon9:c.C1255T:p.R419W,exon10:c.G1442A:p.G481D,exon11:c.C1609G:p.L537V,exon16:c.C2360T:p.P787L,exon17:c.C2440T:p.R814C,exon19:c.C2608T:p.H870Y,exon19:c.A2686G:p.I896V,exon19:c.C2830G:p.Q944E,exon20:c.G3412A:p.D1138N,其中A144T、N196S、R814C、I896V及Q944E突变存在复现性;另外,A144、R419、G381、L537、P787、H870、Q944及D1138位点在不同物种中高度保守。结论:在222例AML患者中发现26名患者中存在FANCJ突变,并且突变位点在不同物种中相对保守,功能重要,这为接下来研究FANCJ突变类型的AML疾病致病机理奠定基础,同时为疾病防治提供指导。     

桂皮醛联合万古霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用

目的 研究桂皮醛联合万古霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (methiciline-resistant Staphylococcus aureus, MRSA) 生物膜的影响.方法 96孔板法构建金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923和5株临床分离MRSA菌株的体外生物膜模型, 结晶紫半定量法检测其成膜能力;选取标准菌株和强成膜临床菌株为实验菌株, 采用氯化三苯基四氮唑 (TTC) 法确定药物单用及联用的最低抑菌浓度 (minimum inhibitory concentration, MIC) ;微量棋盘稀释法测出两药联用的最小抑膜浓度 (s MIC) .结果 96孔板培养3 d可见成熟生物膜形成, 结晶紫半定量法测得编号为16187的实验菌株有较强的产生物膜能力;桂皮醛和万古霉素对标准菌株的MIC为256μg/m L和1μg/m L, 对MRSA16187菌株的MIC为128μg/m L和0.5μg/m L, 两药联用对标准菌株的MIC为16μg/m L和0.06μg/m L, 对MRSA16187菌株的MIC为16μg/m L和0.03μg/m L;MRSA16187在桂皮醛和万古霉素联用与单独用药后s MIC50相比差别有显著性 (P<0.05和P<0.05) , s MIC90相比差别有显著性 (P<0.05和P<0.05) ;ATCC25923在桂皮醛和万古霉素联用与单独用药后s MIC50相比差别有显著性 (P<0.05和P<0.05) , s MIC90相比差别有显著性 (P<0.05和P<0.01) .结论 桂皮醛能显著增强万古霉素抗MRSA生物膜的作用, 且两药具有协同抗菌作用.     

中华传统文化中临终关怀的独特智慧

一个民族在可利用的资源范围内能够给濒死患者提供的临终关怀,象征着这个民族的文明程度。虽然我国现代的临终关怀事业起步较晚,但是传统文化作为中华民族五千年精神活动的成果和精髓,其儒家、佛教、道教、易经和中医都有各自独特的生死智慧和临终关怀。儒家乐生安死,通过血脉相继而实现生命传承。佛教以"超越生死轮回的束缚"为目的,求生净土,离苦得乐。道家"乐死"升天,生死一体,生死俱善。易经视生死为自然。祖国医学的医家功德和不做无谓救治都对医护人员提出了相应的要求。本文希望通过对中华传统文化中的临终关怀智慧进行归纳提炼,以开创基于文化底蕴与民族个性的中国式临终关怀体系。