广州管圆线虫抗原IF的中间纤维蛋白组织来源分析和定位

目的 对广州管圆线虫抗原IF进行中间纤维蛋白家族分类和细胞组织定位.方法 IFTG诱导重组基因pET-IF在大肠杆菌中表达广州管圆线虫抗原IF,用组氨酸亲和层析纯化表达产物,用Western blot方法鉴定抗原IF的中间纤维蛋白类型;小鼠皮下多点注射法制备抗IF抗体血清,用免疫组织化学方法检测抗原IF在虫体组织和细胞上的定位.结果 广州管圆线虫抗原IF在体外成功表达并纯化,其属于中间纤维蛋白家族的角蛋白,定位于广州管圆线虫成虫肠管壁,存在于细胞质中.结论 广州管圆线虫抗原IF分布于虫体肠管壁,同时从组织学角度证明广州管圆线虫存在中间纤维结构.     

反向点杂交法在β-地中海贫血基因诊断中的应用

目的初步评价反向点杂交法对β-地中海贫血基因的诊断效能。方法使用反向点杂交法对1 004例疑似β-地中海贫血病例进行基因诊断。结果1 004例外周血样品中有283例β-地中海贫血。共发现11种突变,其中CD41-42(40．89％),IVS-2-654(22．68％),CD17(12．71％),TATAbox-28(14．43％),CD43 (3．78％)和CD26(1．72％),占突变的95％以上。结论反向点杂交法具有快速、准确的优点,适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断。     

中国人群少见血红蛋白H病的分子遗传学特征分析

目的 分析由少见基因类型导致的血红蛋白H病家系的分子遗传学特征.方法 采用标准的血液学分析技术检测先证者及家系成员红细胞参数,包括RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC和RDW,进行表型诊断.利用SPIFE快速自动电泳分析系统检测其血红蛋白组分Hb A、HbA2、Hb F、Hb H和Hb Bart＆#39;s.采用反向斑点杂交技术诊断α-地中海贫血基因非缺失突变,利用gap-PCR扩增特异位点序列并对扩增序列进行克隆测序,明确突变位点.结果 先证者母亲MCV、MCH均降低,Hb A2为2.39％且亨氏小体阳性,基因检测结果为α泰国型缺失杂合子.先证者父亲各红细胞参数正常,但RDB检测结果为携带αCS点突变.先证者及其弟表现为中重度小细胞低色素贫血,蛋白电泳结果显示他们均有Hb H和Hb Bart＆#39;s带,先证者Hb H为1o.8％,Hb Bart＆#39;s为7.51％,其弟Hb H为14.78％,Hb Bar（s为9.11％,基因检测结果证实该姐弟均为HbH病患者,遗传了母亲的α泰国型缺失片段和父亲的αCS点突变,故α地中海贫血型别为THAI/ααcs.结论 首次报道中国人群少见的H病类型THAI/α αcs地贫基因类型是中国人群少见的H病类型,丰富了中国人群α珠蛋白基因突变谱.     

异常HbK复合β地中海贫血家系及其风险胎儿的产前诊断

目的 了解一种由β珠蛋白肽链合成异常的HbK复合轻型β地中海贫血的家系及其风险胎儿的产前诊断.方法 用美国Helena公司全自动快速电泳分析系统进行血红蛋白电泳各区带定量分析和反向点杂交-RDB法进行β地贫基因联合检测,对家系及风险胎儿进行产前诊断.结果 先证者为异常HbK复合B珠蛋白基因ⅣS-Ⅱ-654突变双重杂合子,临床表型为中间型β地贫.父亲为β-珠蛋白基因ⅣS-Ⅱ-654突变杂合子,母亲为异常HbK杂合子,再次妊娠行产前诊断的胎儿为异常HbK杂合子,母亲和胎儿地贫基因型正常,建议保留胎儿.出生后8个月随访结果与产前诊断一致.结论 对β珠蛋白肽链合成异常和β地贫基因携带者的家庭进行遗传咨询和产前诊断,可预防中间型β地贫患儿出生.采用电泳技术联合β地贫基因检测技术,可在产前诊断中解决同类问题.     

冠心病伴阻塞性睡眠呼吸暂停综合征ICAM-1基因多态性研究

目的:观察ICAM-1基因多态性与冠心病(CHD)伴阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)的相关性,并观察ICAM-1的不同基因型与其血清中ICAM-1含量之间的关系。方法:选择CHD患者(A组)56例、CHD伴OSAS患者(B组)58例、OSAS患者(C组)54例和健康者(对照组)53例。以聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性(RFLP-PCR)对基因组DNA中ICAM-1基因多态性进行分析。结果:①4组间的ICAM-1469C/T3种基因型的分布比例差异有统计学意义,A、B、C组的TT TC型基因型分布频率分别是86.44%、89.67%、90.74%均高于对照组的47.16%(P<0.01)。而对照组的CC基因型分布频率高于其他3组(P<0.01)。②T等位基因在A、B、C3组的分布频率分别是74.11%、71.55%、72.22%,明显高于对照组的35.85%(P<0.01),而A、B、C3组间分布频率差异无统计学意义(P>0.05)。③所有组中TT TC基因型的ICAM-1含量均高于CC基因型的含量(P<0.01),B组的黏附分子含量明显高于其他3组。结论:①ICAM-1469C/T的基因多态性与CHD有关联,C-T的等位基因突变可能是CHD的一种遗传易感因素;②OSAS患者存在与CHD患者相同的基因型分布,这种相同的基因多态性分布可能是OSAS与CHD的一种易感的遗传因素;③ICAM-1469C/T的基因多态性与血清中的ICAM-1含量有着明显的相关性,OSAS可能是通过改变血清ICAM-1含量来加重CHD的发展进程。     

人类纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库的构建及质量分析

目的: 各种病因引起的心脏瓣膜纤维化是导致心脏瓣膜功能丧失的主要原因,样本来源有限和不可重获性是其分子机制研究的瓶颈。本研究旨在成功获取患者纤维化瓣膜的遗传信息物质,为探明瓣膜病变的分子机制提供直接证据。方法: 心脏换瓣手术中取纤维化瓣膜组织,提取高质量RNA,用SMART技术合成cDNA第1链,再用长距离PCR合成双链cDNA,经 Sfi I酶切后过柱分级收集长片段cDNA,经T4 DNA连接酶催化连接入λTriplEx2载体,最后经λ噬菌体包装后构建成原始文库,用PCR、X-gal等方法进行文库质量鉴定。 结果: 成功构建了纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库,原始文库滴度为8× 10⁹ pfu/L,重组率为99%,外源基因片段大小在500到3 000 bp之间,其中81.25%片段大于1 000 bp。 结论: 成功构建了高质量的人类纤维化心脏瓣膜噬菌体表达文库,该文库的库容量足够代表人类基因的复杂性,高重组率能保障功能筛选的高效性,长片段更有助于全长基因的获得和表达。     

柯萨奇B组病毒在心血管疾病发生中的作用

目的：了解柯萨奇B组病毒（CVB）在心脏疾病患者中的感染状况,探讨CVB感染与心血管疾病的内在关系。方法：采用间接酶联免疫吸附测定（ELISA）和反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）。进行CVBIgG抗体和核酸检测。结果：心脏病组CVBIgG阳性率为44．8％（112／250）,对照组抗体阳性率为16．7％（18／108）,两者有显著性差异（P〈0．05）。CVBRNA检测结果显示,心脏病组阳性率为20．4％（51／250）,对照组为3．7％（4／108）．两者比较有显著性差异（P〈0．05）。结论：在心脏病患者中CVB感染较普遍,应引起重视。     

多重PCR快速检测金黄色葡萄球菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因及其临床应用

目的 建立金葡菌氨基糖苷类抗生素耐药基因的多重PCR快速检测体系,了解耐药基因acc(6')-Ie+aph(2″)、aph(3')-Ⅲat ant(4')-Ia在广州地区的流行分布.方法 采用VITEK-60或PHOENIX-100微生物自动鉴定系统鉴定菌株及药敏试验,利用琼脂扩散法检测4种氨基糖苷类抗生素的耐药表型.通过优化PCR体系建立多重PCR并应用于检测金葡菌氨基糖苷类抗生素耐药基因.结果 构建了四重PCR快速检测体系, 124株金葡菌临床分离株中,acc(6')-Ie+aph(2″)、aph(3')-Ⅲa和ant(4') -Ia的检出率分别为62.1%、32.3%和1.6%;所有庆大霉素、奈替米星以及阿米卡星耐药的金葡菌菌株均检测到上述3个耐药基因中的1个或1个以上基因;74株mecA阳性菌株中72株(97.3%)检测到acc(6')-Ie+aph(2″) 基因.结论 所构建的多重PCR检测体系为临床实验室提供快速而有效的菌株耐药基因检测手段.编码AAC(6')-APH(2″)双功能酶的acc(6')-Ie+aph(2″) 基因是金葡菌最重要的氨基糖苷类抗生素耐药基因,其次为aph(3')-Ⅲa,ant(4')-Ia则少见.     

-α3.7伴有anti4.2片段的α地中海贫血基因型的研究

在我国广东、广西两省人群中α地中海贫血(α地贫)基因携带率约高达10%[1].其中东南亚型缺失(--SEA)、右向缺失(-α3.7)和左向缺失(-α4.2)占α地贫的96%以上[2-3].一些更复杂的交叉重组可能产生更复杂的异常基因型(如HKαα,在同一条染色体上含有-α3.7及anti4.2不平衡交叉连接片段).