曼氏迭宫绦虫cathepsin L样蛋白酶的生物信息学分析

目的 通过生物信息学预测曼氏迭宫绦虫cathepsin L样蛋白酶(Smcathepsin L样蛋白酶)的生物学特征及其潜在功能和结构,为下一步Smcathepsin L样蛋白酶参与寄生虫和宿主相互作用过程研究提供依据. 方法 通过NCBI的ORF finder工具对Smcathepsin L样蛋白酶的开放阅读框(ORF)进行分析,利用ExPASy网站进行蛋白的物理化学参数、信号肽、跨膜螺旋和潜在分子生物学功能的预测,通过NCBI/BLAST对蛋白保守功能域进行预测.从NCBI网站获取不同物种的cathepsinL样蛋白酶序列,并利用Vector NTI suit 8.0和TreeView软件进行分析.利用SWISS-MODEL网站和SPDBV4.10软件分析Smcathepsin L样蛋白酶的三维空间结构. 结果 Smcathepsin L样蛋白酶是一个全长基因,编码336个氨基酸.蛋白由2个典型的cathepsin L样蛋白酶结构域组成,序列当中有信号肽,是一个稳定的可溶性蛋白分子.三维空间立体结构分析结果显示Smcathepsin L样蛋白酶是一个保守的蛋白.Smcathepsin L样蛋白酶编码氨基酸序列与细粒棘球绦虫、链状带绦虫、多房棘球绦虫和人的cathepsin L样蛋白酶基因的同源性分别是50％、50％、49％和46％.分子进化分析显示SmcathepsinL样蛋白酶与日本血吸虫、多房棘球绦虫和链状带绦虫亲源性更近,而与其他物种,例如原虫、线虫和哺乳动物亲源性较远. 结论 Smcathepsin L样蛋白酶可能是一个潜在的分泌蛋白,该蛋白能在胞外发挥作用,即在寄生虫的消化、转移、入侵及宿主-寄生虫相互作用中起着重要的作用,是一个具有潜在研究价值的多功能分子.     

曼氏迭宫绦虫中亮氨酸氨基肽酶基因的生物信息学分析和转录水平检测

目的 检测曼氏迭宫绦虫的3个亮氨酸氨基肽酶亚类(leucine aminopeptidases of Spirometra mansoni,SmLAPs)基因在虫体不同发育阶段的转录水平,为进一步病原诊断研究奠定基础.方法 运用生物信息学相关软件对3个亮氨酸氨基肽酶亚类编码蛋白的氨基酸序列的功能区域、免疫学特征、信号肽和跨膜区预测分析.应用Real time PCR方法检测SmLAPs在曼氏迭宫绦虫的成节、孕节和裂头蚴阶段的转录水平. 结果 对SmLAPs编码氨基酸序列的保守区域进行比对,SmLAPa与SmLAPb、SmLAPc的氨基酸序列一致性均为38％,SmLAPb和SmLAPc的一致性也只有44％.多功能位点分析发现,SmLAPs均含有底物结合位点、锌离子结合位点和多肽结合位点.在B细胞线性表位预测结果显示,SmLAPa有13个、SmLAPb有14个、SmLAPc有13个.T细胞表位预测中,SmLAPa有12个、SmLAPb有13个、SmLAPc有14个.3个SmLAPs亚类序列中均含有一个强烈的信号肽,并且均没有跨膜区域.在虫体各个发育阶段的转录水平检测中,在成节阶段,SmLAPb的转录水平是SmLAPa的1.34倍,SmLAPc的转录水平是SmLAPa的46.53倍.在孕节阶段,SmLAPb的转录水平是SmLAPa的1.96倍,SmLAPc的转录水平是SmLAPa的56.89倍.在裂头蚴阶段,只有SmLAPc有转录,没有检测到SmLAPa和SmLAPb的转录. 结论 在3个SmLAPs亚类基因中,SmLAPc是裂头蚴病更有价值的免疫诊断分子.     

2009年广州市市区职业人群对流通纸币卫生的观念和习惯调查

[目的]了解不同职业人群对流通纸币卫生的观念与使用习惯,为进一步开展有关内容的健康教育提供支持和依据。[方法]2009年,在广州市市区采用分层的单纯随机抽样方法,在不同职业人群集中区域抽取部分人群进行调查。[结果]调查425人,认为纸币脏的占83.29%,不脏的占8.94%,不清楚的占7.76%。认为纸币脏者所占比例,银行职员为41.43%,医务工作者为30.43%,餐饮工作者为9.64%,学生为17.50%,其他职业者为87.86%（P〈0.01）。全部调查对象中,认为纸币可以消毒的占87.86%,认为纸币可以传播疾病的占87.06%;使用纸币卫生习惯优秀、良好、差的分别占3.06%、40.71%、56.24%。使用纸币卫生习惯优良者所占比例,医务工作者为63.94%,餐饮工作者为40.96%,银行职员为34.29%,学生为20.00%,其他职业者为45.00%（P〈0.01）。[结论]广州市市区职业人群对于纸币的卫生意识以及使用习惯存在问题。     

应用PCR技术研究白纹伊蚊的吸血习性

目的应用PCR技术鉴定登革热传播媒介白纹伊蚊胃血来源,研究白纹伊蚊的吸血习性。方法在实验室条件下,将6种动物（鸡、猫、狗、鸽、野鼠、小鼠）分别放人6个小玻璃房,同时,将6种动物放入一个大玻璃房,然后放入已经饥饿18h的白纹伊蚊雌蚊,3h后采集吸血蚊,应用PCR技术鉴定白纹伊蚊胃血来源。现场调查则通过紫外诱蚊灯和BG．SentinelTrap采集吸血蚊,利用实验室建立的PCR体系鉴定白纹伊蚊胃血来源。结果在不同空间内,白纹伊蚊对野鼠的平均吸血率最高,为44．45％,其余依次为鸡、猫、小鼠、狗、鸽（38．27％、36．53％、35．70％、34．94％、24．75％）。在同一空间内,白纹伊蚊对鸡、小鼠、猫、野鼠、狗、鸽的吸血率依次为12．36％、7．09％、6．41％、4．81％、2．52％、1．60％。在现场收集到的饱血白纹伊蚊共13只,其中吸狗血的有7只,吸人血的白纹伊蚊有2只,多重吸血（sb鼠和猫）的白纹伊蚊有1只。结论PCR技术可鉴定白蚊伊蚊胃血来源,结果稳定可靠;白纹伊蚊不仅嗜吸人血,也可兼吸多种常见的动物血。     

曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I(SmCaMK I)基因的生物信息学分析与表达鉴定

目的 开展SmCaMK I(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I)的潜在生物学特征分析和功能研究。方法 利用相关网站和软件对SmCaMK I的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测。此外,SmCaMK I进行扩增,并克隆到表达载体pET-28α(+)中进行蛋白的表达纯化,制备大鼠免疫血清进行虫体免疫组织定位分析。结果 SmCaMK I是一个全长基因,由1 068 bp组成,编码355个氨基酸。SmCaMK I与细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫的CaMK I保守功能域的氨基酸序列一致性分别为89%和88%,与人的CaMK I氨基酸序列一致性仅仅只有44%。分子进化树分析中SmCaMK I与绦虫属的亲缘关系最近,与其他物种亲缘性较远。与人类CaMK I相比,淋巴细胞表位具有统计学差异。SmCaMK I能够定位在成虫的睾丸和虫卵,在裂头蚴中大量表达和特异定位于体表。结论 SmCaMK I是参与虫体生长发育繁殖的重要蛋白分子,还可能是一个潜在的疫苗靶标蛋白。     

曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅰ(SmCaMK Ⅰ)基因的生物信息学分析与表达鉴定

目的 开展SmCaMK Ⅰ(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅰ)的潜在生物学特征分析和功能研究.方法 利用相关网站和软件对SmCaMK Ⅰ的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测.此外,SmCaMK Ⅰ进行扩增,并克隆到表达载体pET-28α(+)中进行蛋白的表达纯化,制备大鼠免疫血清进行虫体免疫组织定位分析.结果 SmCaMK Ⅰ是一个全长基因,由1 068 bp组成,编码355个氨基酸.SmCaMK Ⅰ与细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫的CaMK Ⅰ保守功能域的氨基酸序列一致性分别为89％和88％,与人的CaMK Ⅰ氨基酸序列一致性仅仅只有44 ％.分子进化树分析中SmCaMK Ⅰ与绦虫属的亲缘关系最近,与其他物种亲缘性较远.与人类CaMK Ⅰ相比,淋巴细胞表位具有统计学差异.SmCaMK Ⅰ能够定位在成虫的睾丸和虫卵,在裂头蚴中大量表达和特异定位于体表.结论 SmCaMK Ⅰ是参与虫体生长发育繁殖的重要蛋白分子,还可能是一个潜在的疫苗靶标蛋白.     

海口市居民蚊媒防治知识态度行为现状调查

目的 了解海口市居民有关蚊媒防制知识、态度和行为情况,为今后更好地开展有针对性的干预措施提供依据。方法 采用统一设计的调查问卷,于2017年7—9月在海口市4个区各随机选择两个调查点,每个调查点随机抽取约150个家庭,每个家庭选一位18岁以上的成人作为调查对象进行答卷。结果 本次调查共发放问卷1 020份,回收有效问卷988份,有效问卷回收率为96.9%。居民蚊虫防治知识总知晓率为54.8%,其中城区居民总知晓率为58.9%,郊区居民为50.6%,城区居民知晓率显著高于郊区（P<0.05）。不同人口特征（性别、地区、文化程度、年龄和职业）的居民对蚊媒防治知识的知晓率差异有统计学意义（P<0.05）。81.2%的居民意识到蚊虫叮咬会传播疾病,分别有67.1％、52.7%及31.5%知道登革热、疟疾和寨卡病毒病由蚊虫传播。63.8%知道蚊子有雌雄之分,33.6%知道雌蚊吸血。防治态度方面,51.1％的居民迫切希望政府和社区增加灭蚊次数,86.1%的居民认为非常有必要防蚊灭蚊。结论 目前海口市居民的蚊媒防治知识需要进一步提高,卫生防疫部门与地方政府应重视开展蚊媒及其传播疾病的健康教育活动。