人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达

目的构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A_(600nm)值及时间条件进行诱导表达,然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达,分析其可溶性和抗原性。结果重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A(登录号:BC021277.2)的核苷酸序列同源性为99.9%,氨基酸序列同源性为100%。重组蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku处出现两条特异性条带,采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A_(600nm)值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25℃、A_(600nm)值为0.6～0.8、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导9 h;在此基础上进行大量表达,并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达。结论成功构建了TMEM39A的原核表达载体,确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达,为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础,并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据。     

VCAM-1与VLA-4相互作用与肿瘤关系的研究进展

晚期抗原4(VLA-4)与血管细胞黏附分子1(VCAM-1)互为配体,VLA-4能与VCAM-1的第1结构域或第4结构域的特异性结合。在VCAM-1的结构域1和结构域4中发现的6个线性氨基酸序列对两者的特异性结合起着至关重要的作用。VLA-4和VCAM-1在多种疾病中都高表达并与许多疾病的发病机制有着密不可分的联系。     

人脑心肌炎病毒免疫球蛋白M捕获酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

目的建立脑心肌炎病毒(EMCV)免疫球蛋白M(IgM)捕获酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,用于感染EMCV血清学早期诊断。方法用抗人IgM(μ链)单抗进行包被,辣根过氧化物酶(HRP)标记的EMCV为酶标抗原,初步建立EMCV IgM捕获ELISA;对建立的方法进行条件优化及特异性、精密性、稳定性等验证。结果建立的EMCV IgM捕获ELISA检测方法抗体包被浓度为1μg/mL,EMCV-HRP工作浓度和反应时间分别为1∶400和45min,封闭液为10%马血清时该法检测效果可达最佳,3批试剂批内及批间变异系数均小于5%,且特异性、精密性及稳定性较好。结论建立的EMCV IgM捕获ELISA法特异、精密且稳定,可用于人感染EMCV的早期检查,为EMCV的诊断奠定基础。     

冠状病毒的研究进展

冠状病毒是一类在自然界广泛存在的,可引起跨种间传播并对人兽健康构成严重威胁的传染病病原体.由于宿主谱广泛和选择压力大,冠状病毒会发生变异以逃避宿主免疫反应,从而变得更具致病性.在不到20年的时间里,冠状病毒已经导致了 3次令全球恐慌的重大疫情,包括目前的新冠疫情.基于此,有必要对冠状病毒进行重新审视.因此,本文从冠状病...     

人类疱疹病毒逃逸宿主抗病毒固有免疫应答机制的研究进展

人类疱疹病毒(Human herpesvirus,HHV)作为一类可引起人体蔓延性皮疹的病毒,其在宿主细胞中呈潜伏感染且被感染者可终生带毒.在长期进化过程中,宿主细胞通过各种方式以抑制该病毒的扩散,同时,疱疹病毒也通过其病毒蛋白及基因组miRNAs等影响机体固有免疫应答过程中关键蛋白及细胞因子的表达等方式干扰宿主细胞对...