Beclin1对喉鳞癌细胞Hep-2紫杉醇敏感性影响的体外研究

目的:通过检测不同Beclin1表达水平对喉癌细胞紫杉醇敏感性的影响。方法:本研究利用以喉癌细胞株Hep-2、稳定转染pcDNA3.1-Beclin1质粒的喉癌细胞株Hep-2-Beclin1、稳定转染pcDNA3.1质粒载体的喉癌细胞株Hep-2-pcDNA3.1为研究对象,对3组细胞施加不同浓度的化疗药物紫杉醇(1、2、5、10、20μg/L)干预24h,利用MTT法及流式细胞术检测紫杉醇对3组细胞增殖和凋亡的影响。利用Western blot检测3组细胞Akt和p-Akt蛋白表达水平。结果:不同浓度的紫杉醇处理后的3组喉癌细胞与药物终浓度正相关地出现生长抑制率提高。当紫杉醇浓度大于5μg/L时,紫杉醇对Hep-2-Beclin1的生长抑制率高于对另两株细胞的生长抑制率。以终浓度为10、20μg/L的紫杉醇处理3株喉癌细胞24h后,流式细胞术检测结果显示:各组细胞20μg/L紫杉醇处理后细胞的凋亡率均高于10μg/L紫杉醇处理后细胞的凋亡率(P<0.05)。紫杉醇处理后Hep-2-Beclin1组细胞凋亡率均高于Hep-2组和Hep-2-pcDNA3.1组(P<0.05)。Western blot结果显示:Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1、Hep-2-Beclin1细胞Akt相对蛋白表达量分别为:1.24±0.03、1.25±0.05、1.27±0.09,3组细胞间Akt相对蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05);Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1、Hep-2-Beclin1细胞p-Akt即活化型Akt相对蛋白表达量分别为:0.98±0.09、1.03±0.04、0.54±0.03,Hep-2-Beclin1细胞p-Akt相对蛋白表达量低于Hep-2、Hep-2-pcDNA3.1组细胞(P<0.05)。结论:Beclin1可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的活化上调喉癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

TRAIL对人喉癌Hep-2细胞生长及凋亡的影响

目的:研究TRAIL对人喉癌Hep-2细胞生长及凋亡的影响,并探索其相关机制.方法:用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度TRAIL对喉癌细胞Hep-2,成纤维细胞MRC-5生长及凋亡率的影响.用western blotting对比两种细胞DR-4,DR-5的表达情况.检测Hep-2细胞TRAIL干预前后caspase-8,caspase-3,caspase-9表达的变化.结果:随着TRAIL浓度的升高,Hep-2细胞存活率逐渐降低,而凋亡率逐渐提高.MRC-5细胞对TRAIL不敏感.Western blotting检测发现Hep-2细胞DR-4、DR-5表达明显高于MRC-5.TRAIL干预Hep-2细胞后caspase-8、caspase-3、caspase-9活化分解明显增多.结论:喉癌细胞Hep-2由于DR-4、DR-5的高表达,对TRAIL促凋亡作用具有特异敏感性,其促凋亡作用是通过激活线粒体依赖性通路实现的.     

靶向联合阻断表皮生长因子受体和环氧化酶-2信号通路影响鼻咽癌细胞生长的研究

目的：观察联合阻断表皮生长因子受体（EGFR）和环氧化酶-2（COX-2）介导的信号通路,对鼻咽癌细胞株CNE-2的影响。方法：用EGFR-酪氨酸激酶拮抗剂和COX-2抑制剂单独和联合处理鼻咽癌细胞株CNE-2,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,流式细胞术进行细胞周期、凋亡率的分析,Western blot检测相关蛋白表达。结果：①联合用药组CNE-2细胞生长抑制率显著大于两者单独处理组生长抑制率之和（P〈0．05）;②联合处理组细胞G1期比例大于单独处理组（P〈0．05）。联合处理组细胞凋亡率与单独处理组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;③与单独处理组相比,联合处理组出现明显的p—EGFR,COX-2表达下调。结论：联合阻断EGFR和COX-2信号通路对抑制鼻咽癌细胞株CNE-2生长,增加G1期阻滞及抑制EGFR的磷酸化和COX-2的表达方面具有协同作用。     

TrKB与VEGF在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)、酪氨酸激酶B(TrKB)在鼻咽癌(NPC)组织中的表达并比较两者表达的相关性及分析与肿瘤临床特征的关系。方法采用免疫组化方法检测经活检确诊为NPC的患者55例及鼻咽炎组织30例中VEGF、TrKB蛋白表达水平,比较二两者表达差异。根据患者年龄和性别、肿瘤临床分型、原发灶大小、淋巴结转移和有无远处转移将病例分组,应用双变量相关Pearson检验分析研究VEGF、TrKB表达与肿瘤临床病理特征之间的关系。结果①VEGF蛋白于肿瘤细胞浆及血管内皮细胞浆中均表达,TrKB蛋白阳性表达绝大多数位于细胞浆内。在55例NPC患者中,45例TrKB阳性表达,阳性表达率为81.8%;47例VEGF阳性表达,阳性表达率为85.4%。30例鼻咽炎中,只有3例TrKB阳性表达,阳性表达率为10.0%;5例VEGF阳性表达,阳性表达率为16.7%。肿瘤组织中TrKB、VEGF阳性表达率明显高于鼻咽炎组织（P<0.05）,NPC组织中VEGF与TrKB表达有明显相关性（R=0.716,P<0.01）;②VEGF蛋白表达与NPC的临床分期(P=0.002)、肿瘤的直径大小(P=0.009)及有无淋巴结转移(P=0.001)明显相关,与患者性别、年龄、有无远处转移无关（P＞0.05）。TrKB蛋白表达与临床分期(P=0.00)、肿瘤的直径大小(P=0.00)、有无淋巴结转移（P=0.006）明显相关,与患者性别、年龄、有无远处转移无关（P＞0.05）。结论VEGF、TrKB在NPC组织中表达增加,可能与NPC的发生发展有关。TrKB可能与NPC血管形成有关。 （     

国家级继续教育学习班在中南大学湘雅二医院举办

由中南大学耳科研究所、中南大学湘雅二医院耳鼻咽喉头颈外科主办的国家级继续医学教育项目＂第九届全国听力与耳聋基础和临床新进展专题研讨班＂与＂第二届头颈肿瘤器官功能保全的外科治疗专题研讨班＂于2014年7月11～14日在湖南长沙湘雅二医院召开。来自全国20个省、市、自治区约400余名耳鼻咽喉头颈外科、妇幼保健及相关基础研究人员和医师参加了本次学习。     

对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者进行行为干预及手术治疗疗效对比

目的:对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者进行行为干预和手术治疗疗效对比,并探讨合理的治疗方法。方法:将45例OSAHS的肥胖患者随机分为手术组和行为干预组,手术组患者接受腭咽成形手术,行为干预组接受6个月行为干预,在干预后第3个月和第6个月分别对两组患者的睡眠监测指标进行比较评价。结果:在干预第6个月对两组患者的睡眠监测指标进行比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:对以肥胖为病因的OSAHS患者进行行为干预可达到与手术治疗相似的效果。     

脑源性神经营养因子与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者软腭肌失神经改变的相关性研究[论著]

目的　本研究通过观察脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）在阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）患者软腭肌中的分布特点及表达水平,旨在探究BDNF与OSAS患者软腭肌失神经改变的相关性。方法　将45例研究对象分为轻中度OSAS组（15例）、重度OSAS组（18例）、对照组（12例）。光镜下观察患者软腭肌形态结构特征,免疫荧光观察软腭肌BDNF分布特点,ELISA检测样本中BDNF的含量,Western blot检测样本中高分子量神经微丝蛋白（high molecular weight neurofilament protein,NFH）的含量并进行统计分析。结果  重度OSAS组软腭肌肌纤维排列紊乱,部分呈失神经后改变;与轻中度OSAS组及对照组比较,重度OSAS组软腭肌上BDNF分布更为紊乱,其表达水平显著高于对照组（P =0.001）。轻中度OSAS组软腭肌NFH表达水平低于对照组（P =0.022）。BDNF的表达水平与呼吸暂停低通气指数（AHI）呈正相关（r =0.417,P =0.016）,与NFH之间未见明 显相关性。结论　BDNF在OSAS患者软腭肌失神经改变中具有重要作用。BDNF表达水平增高可能会加重OSAS患者软腭肌形态结构改变。     

表皮生长因子受体信号通路调控E-cadherin表达影响喉癌细胞增殖和侵袭的机制

目的　探讨表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）信号通路调控喉癌细胞E-cadherin表达并影响细胞增殖、侵袭等生物学行为的机制。方法　采用外源性的EGFR激动剂表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）和EGFR酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼干预体外培养喉癌Hep-2细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡、迁移力和侵袭力及相关蛋白表达改变。结果 EGF呈时间和浓度依赖性促进喉癌细胞增殖,并使喉癌细胞G1期比例减少而S期比例增加,细胞迁移距离及侵袭能力明显增加;厄洛替尼呈时间和浓度依赖性抑制喉癌细胞增殖,并导致喉癌细胞G1期比例增加而S期比例减少,同时增加细胞凋亡率,细胞迁移距离及侵袭能力均明显低于对照组。Western blot检测发现EGF干预使喉癌细胞E-cadherin表达下调而Vimentin表达上调,而厄洛替尼干预后喉癌细胞E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调。结论 小分子酪氨酸激酶抑制剂阻断EGFR信号通路导致喉癌Hep-2细胞E-cadherin表达上调,并抑制细胞增殖和侵袭转移能力。     

LMP1诱导鼻咽癌细胞发生TRAIL抵抗的体外实验

 目的探讨EBV膜潜伏蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)基因过表达后对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)凋亡诱导作用和凋亡信号传导的影响。方法利用脂质体介导的pGL6 LMP1上调LMP1低表达的TRAIL抵抗性鼻咽癌细胞CNE 1中LMP1的表达;通过MTT比色法、流式细胞术观察LMP1过表达后对CNE 1细胞TRAIL敏感性的影响;流式细胞术、Western blot、线粒体膜电位检测观察LMP1过表达后对死亡受体表达、细胞内外凋亡信号通路激活、线粒体膜电位改变的影响。结果死亡受体荧光标记后流式细胞术检测发现CNE 1和CNE 1 LMP1之间细胞膜蛋白死亡受体4（death receptor 4,DR4）,死亡受体5（death receptor,DR5）表达差异无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果显示TRAIL(100 ng/ml)分别作用2、4、6、12 h后,CNE 1细胞中caspase 8 p43/p41,p18亚单位蛋白和caspase 3 p17,p10亚单位蛋白表达明显高于CNE 1 LMP1细胞,而Bcl 2相互作用域死亡激动蛋白的截短形式（truncated form of Bid,tBid）和caspase 9 p35亚单位蛋白表达无明显改变,且两个细胞株间也无明显区别。JC 1线粒体膜电位检测法结果显示TRAIL干预后,线粒体膜电位无明显改变,且两个细胞株间也无明显区别。结论LMP1过表达抑制TRAIL对鼻咽癌细胞的凋亡诱导作用和其细胞外凋亡信号的传导,提示LMP1是通过抑制细胞外信号通路激活诱导鼻咽癌细胞发生TRAIL抵抗。     

气管切开后二氧化碳排出综合征1例报告并文献复习

目的讨论二氧化碳排出综合征的发生机制、临床特征、治疗方法以及该综合征在气管切开患者发生的原因。方法报告1例长期喉梗阻的患者行气管切开后发生二氧化碳排出综合征的病例，同时进行相关文献复习。结果上呼吸道梗阻是引起高二氧化碳血症的常见原因。在行气管切开解除上呼吸道梗阻后易出现二氧化碳排出综合征。结论长期上呼吸道梗阻的患者，若行气管切开，应考虑到二氧化碳排出综合征可能。二氧化碳排出综合征后果严重，应在解除上呼吸道梗阻的同时，监测血压、心率、中心静脉压、血气、电解质、意识变化等情况，积极纠正酸碱失衡及电解质紊乱，避免严重并发症。