小分子糖负载血小板+冻干保护剂混合悬液的相变点测定与屏蔽实验研究

目的测定冻干血小板长期保存预冻程序和所依据的制品相变点温度并摸索相应屏蔽相变点的最佳冷冻曲线。方法研制出小分子糖负载血小板+冻干保护剂混合悬液,使用速率程序降温仪分析测定该混合悬液样品的相变点温度;根据测得的相变点温度,设计屏蔽相变点的预冻程序,根据温度变化曲线,判断相变点屏蔽结果。结论该混合悬液样品的相变点温度为(-13.56±2.05)℃;据此相变点温度所设计的3种相应的屏蔽相变点的预冻程序中,程序3为最佳冷冻曲线。结果获得了小分子糖负载血小板+冻干保护剂混合悬液的相变点温度及相应的屏蔽相变点的最佳预冻程序。     

高浓度葡萄糖诱导红细胞磷脂酰丝氨酸暴露的机制研究

本研究探讨高浓度葡萄糖诱导红细胞磷脂酰丝氨酸（PS）暴露的机制。将红细胞于葡萄糖缓冲液中孵育后用流式细胞术分析PS标记率和前向角值；检测caspase-3和easpase-8的活化情况；用流式细胞术和荧光显微镜观察亮抑酶肽对葡萄糖引起的红细胞PS暴露的抑制效果。结果表明：葡萄糖可以诱导红细胞PS暴露，而且其效率和葡萄糖浓度密切相关。随着葡萄糖浓度的增加，红细胞的PS标记率呈逐步增加的趋势，当葡萄糖浓度为0．8mol／L时，红细胞的PS标记率在80％以上。然而，在葡萄糖引起的红细胞PS暴露过程中，caspase-3和caspase-8没有活化，而亮抑酶肽却可以很好地抑制红细胞PS暴露和使其体积缩小。随着亮抑酶肽浓度的增加，红细胞PS标记率呈逐步下降的趋势，而细胞体积却呈逐步增加的趋势。结论：高浓度葡萄糖可以导致严重的红细胞PS暴露，而且这种PS暴露和caspase无关，推测葡萄糖诱导的红细胞PS暴露是受一条对亮抑酶肽高度敏感的、未知的通路调控的．     

冰冻干燥红细胞超微结构的分析

本研究的目的是探讨冰冻干燥红细胞在电镜下的形态变化。全血采自健康献血者 ,实验分为 3组。组 1:新鲜红细胞 ,4℃保存不超过 2 4小时 ;组 2 :红细胞中加入终浓度为 35 %的甘油 ,- 80℃保存 2 4小时 ;组 3:红细胞经过预处理 ,冰冻干燥 16小时。对解冻红细胞或水化重悬冰冻干燥的红细胞进行计数 ,电镜下观察 3组红细胞超微结构 ,并对电镜下红细胞平均直径、平均光密度及积分光密度进行图像分析。平均光密度及积分光密度代表细胞内血红蛋白的相对含量。结果表明 ,冰冻干燥后红细胞回收率为 5 3% ,红细胞具有圆盘状的结构。组 1红细胞平均直径(μm)、平均光密度及积分光密度分别为 4 .7± 0 .4 ,0 .14± 0 .0 2 ,1.5 8± 0 .4 6 ;组 2红细胞平均直径 (μm)、平均光密度及积分光密度分别为 4 .6± 0 .7,0 .14± 0 .0 2 ,2 .35± 0 .6 4 ;组 3红细胞平均直径 (μm)、平均光密度及积分光密度分别为 4 .4± 0 .4 ,0 .17± 0 .0 5和 2 .35± 0 .4 6。对电镜下红细胞平均直径、平均光密度及积分光密度数据进行统计学处理 ,三元方差分析的Wilks′Lambda检验显示 ,组 3与组 2之间无显著差异 ,组 3与组 1相比较差异显著。结论 :冰冻干燥红细胞具有相对完整的超微结构 ,平均直径及血红蛋白的含量与冰冻保存红细胞相     

生物化学稳定法冰冻干燥血小板制剂的功能研究

目的对生物化学稳定法——小分子糖稳定法冻干的血小板的功能进行分析研究,进一步验证此种方法保存的血小板的质量。方法采用小分子糖负载的方法对血小板进行预处理保护后冻干;通过细胞计数的方法测定细胞回收率、诱导聚集试验测定血小板冻干制剂的聚集活性、血小板Ⅲ因子有效性试验检测冻干血小板的Ⅲ因子活性;通过动物实验,观察小分子糖稳定法冻干的血小板是否具有缩短实验动物的静脉出血时间的作用。结果小分子糖稳定法冻干的血小板细胞回收率为70%;ADP诱导的聚集活性可达新鲜血小板的50%以上;THR诱导的聚集活性99.9%;缩短实验小鼠的尾静脉出血时间。结论生物化学稳定法冻干的血小板保留了初期止血功能。     

保护液的玻璃化状态对红细胞冷冻干燥保存后回收率的影响

为了研究保护液的玻璃化状态对红细胞冷冻干燥 (简称冻干 )保存后回收率的影响 ,采用含有 7%二甲亚砜 (v/v)和 2 0 %、30 %、4 0 %或 5 0 %聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) (w/v)的缓冲液作为保护液进行保护液的玻璃化测试和红细胞的冻干保存实验。首先检测溶液的玻璃化状态 ,如果冷冻和解冻过程中任一过程出现白色冰晶即为非玻璃化溶液 ;再将浓集红细胞和不同的保护液按比例混匀 ,预冻后移入冻干机内进行冻干处理 ;冻干完毕后 ,快速水化样品 ,测定红细胞回收率、血红蛋白回收率和上清游离血红蛋白浓度 ,然后对冻干后红细胞形态进行电镜观察。结果表明 :2 0 %PVP +7%DMSO和 30 %PVP +7%DMSO在冷冻和解冻过程中都出现白色冰晶 ;4 0 %PVP +7%DMSO在冷冻过程中无冰晶出现 ,但在解冻过程中出现冰晶 ;而 5 0 %PVP +7%DMSO在冷冻和解冻过程中均无冰晶出现。冻干红细胞再水化后 ,4 0 %PVP +7%DMSO的细胞回收率和血红蛋白回收率分别为 (81.36±14 94 ) %和 (77.5 4± 12 .86 ) % ,显著高于其它 3组 (P <0 .0 1) ;另外 4 0 %PVP +7%DMSO的上清游离血红蛋白浓度也显著低于其它 3组 (P <0 .0 1)。研究表明 :随着溶液中PVP浓度的升高 ,溶液的玻璃化程度也随之增加 ,同时冻干 再水化后红细胞的各项指标也随之改善 ,当溶液中PV     

人红细胞冰冻干燥保存研究的进展

目前红细胞临床保存方法主要有低温（4℃）和深低温（-80℃或-196℃）保存。4℃保存时间短，而且容易受到细菌污染；深低温保存大大延长了红细胞保存时间，但需要笨重的低温设备，而且由于保护液中含有甘油等渗透性保护剂，解冻后需要反复洗涤。这些缺陷限制了常规红细胞保存方法在一些特殊情况，例如在战争和自然灾害条件下的应用。相对于常规保存方法而言，冰冻干燥具有以下优势：重量大大减轻，便于运输，适合室温保存。易于再水化。本文就冰冻干燥保存红细胞研究的进展和所面临的挑战，尤其是最近海藻糖在冰冻干燥保存过程中的应用以及其作用机制进行了综合讨论，从而为发展一种安全、简单和有效的红细胞冰冻干燥保存方法提出理论指导。     

预冻温度和冻干机搁板温度对冷冻干燥红细胞的影响

为研究预冻温度和冷冻干燥机 (冻干机 )搁板温度对红细胞冻干保存后回收率的影响 ,采用主要成分为7%二甲亚砜和 4 0 %聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)的缓冲液作为保护液 ,在不同预冻温度或搁板温度下进行红细胞的冻干保存。首先将新鲜血液离心、洗涤和平衡以制备浓集红细胞 ,然后将浓集红细胞和保护液按 1∶3混匀制备红细胞悬液 ,在不同温度 (- 2 0 ,- 35 ,- 4 5 ,- 80或 - 196℃ )下预冻后移入冻干机 (搁板温度设为 - 35℃ ,抽真空压力为2 0 0mbar)内进行真空干燥。为研究冻干机搁板温度对冻干红细胞的影响 ,将上述红细胞悬液先在 - 80℃下预冻后移入冻干机 ,在不同的搁板温度 (- 2 0 ,- 2 5 ,- 30 ,- 35 ,- 4 0或 - 4 5℃ )下抽真空干燥 ,冻干结束后用 37℃的再水化液快速水化。结果表明 :在不同预冻温度下 ,冻干后红细胞和血红蛋白的回收率均在 85 %和 75 %以上 ,各组之间差异不显著。但 - 196℃组上清游离血红蛋白浓度显著高于其他各组 (P <0 .0 1) ;当搁板温度等于或高于- 2 5℃时 ,样品无法冻干 ;当搁板温度等于或低于 - 30℃时 ,随着搁板温度的降低 ,冻干时间相应延长。再水化后红细胞和血红蛋白回收率均在 90 %以上 ,各组之间差异不显著 ;但当洗涤至等渗时 ,4组血红蛋白回收率之间差异不显著。结论 :本冻     

糖基化修饰后人血小板形态、超微结构及功能的研究

经糖基化修饰可使4℃保存的血小板在输入体内后延长其存活。本研究探讨尿苷二磷酸半乳糖（UDP—Gal）糖基化修饰对血小板形态、结构、功能以及其膜糖蛋白的影响。实验分为室温对照组、冷藏对照组和修饰组。用荧光标记的特异凝集素（FITC—RCA I）检测膜糖蛋白糖残基变化，用扫描、透射电镜观察修饰后血小板形态和超微结构的变化，用比浊法测定血小板聚集率，用流式细胞术检测血小板膜蛋白CD42b、膜表面标志CD62P以及血小板凋亡标志annexinV结合率。结果表明，UDP—Gal修饰组RCAI结合率显著高于室温对照组和冷藏对照组（P〈0．01）；与新鲜血小板相比，UDP—Gal处理后的血小板超微结构无明显变化，而冷藏对照组则有伪足延伸等形态学改变；修饰后最大聚集率可达新鲜血小板的50％以上；血小板膜蛋白CD42b、膜表面标志C1362P及annexinV结合率与室温对照组相比均无明显差异。结论：UDP—Gal可使β-半乳糖有效地结合于链聚糖末端，糖基化血小板仍然具有较强的聚集活性和相对完整的超微结构，功能基本正常。     

乙二醇为主体的玻璃化溶液对小鼠桑椹胚的超低温保存

本试验系统地研究了以低毒性的乙二醇为主体,添加葡聚糖和海藻配制成的玻璃化溶液（EDT20,EDT30及EDT40）,在室温（20 ℃或25 ℃）下对小鼠体内受精的桑椹胚进行玻璃化冷冻保存。毒性试验表明,30%葡聚糖溶液（D）,0.5mol/L海藻糖溶液（T）,以及两种物质的混合液即DT溶液,对胚胎均无化学毒性作用,乙二醇是化学毒性的主要来源。且随着乙二醇浓度的增加和平衡时间的延长,对胚胎的化学毒性也增大。小鼠桑椹胚的玻璃化冷冻试验中,20 ℃室温下胚胎冷冻效果好于25 ℃,但差异无显著意义（P>0.05）。在20℃室温下,胚胎于EDT30中平衡1 min,后直接投入液氮中一步法冷冻后胚胎体外发育率、移植妊娠率和产仔率分别为94.00%、45.00%、38.00%,与对照组差异均无显著意义（P>0.05）。若将胚胎在10%EG中平衡5 min,再移入EDT30中平衡30 s二步法冷冻效果最佳,解冻后囊胚发育率、移植妊娠率和产仔率分别为96.00%、57.00%、52.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05)。     

海藻糖在哺乳动物细胞保存中的作用机制及应用现状

哺乳动物的细胞保存研究作为低温生物学领域的一个重要分支 ,近年来已经获得了长足的发展。在此过程中研究人员也发现保存过程对细胞 ,特别是生物膜造成了一定的伤害 ,这主要是由于哺乳动物细胞对低温非常敏感 ,另外保存液通常由大分子物质、糖类和渗透性抗冻保护剂组成 ,溶液渗透压很高 ,从而对细胞膜产生不利影响。因此 ,长期以来研究人员一直在探索减轻渗透压力对生物膜影响的有效方法。海藻糖作为一种非还原性二糖在细胞保存中的作用已经引起国内外研究人员的广泛注意。现将海藻糖在保存哺乳动物细胞中的作用机理以及在国内外的研究情况…