敲除TRIF基因对TLR3介导胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的 探讨敲除TRIF基因后,激活Toll样受体3(TLR3)对胰岛β细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法 首先利用CRISPR/Cas9技术,在小鼠胰岛素瘤β细胞NIT-1细胞株中敲除TRIF基因,得到敲除TRIF基因细胞株。再以敲除TRIF基因的NIT-1细胞株为研究对象,用DMEM培养基进行细胞培养,当细胞处于增殖期比例达到80%～90%时进行实验分组,分为空白对照组和实验组,实验组予以不同水平(30、60、90μg/mL)的TLR3特异性激动剂病毒聚肌胞(PIC)刺激,刺激干预48 h后再检测细胞增殖、细胞周期与凋亡蛋白表达,以及核转录因子-κB(NF-κB)的mRNA和蛋白表达。结果 与空白对照组相比,PIC刺激敲除TRIF基因后的NIT-1细胞株,细胞停留在G₀/G₁期细胞的比例明显上调,而在S期和G₂/M期的细胞比例出现明显下调,差异均有统计学意义(P<0.05);CyclinD1表达在不同水平的PIC刺激下明显下调(P<0.05);细胞因子NF-κB和凋亡蛋白Caspase-3的表达在不同水平...