基因芯片技术检测结核分支杆菌耐利福平基因突变的研究

目的建立基因芯片检测结核分支杆菌耐利福平基因突变，结合基因测序和常规药物敏感性试验进行比较，探讨其实用价值。方法根据结核菌rpoβ基因突变特点，设计不同的寡核苷酸探针，点样制备可检测rpoβ基因突变的芯片，检测利福平（Rifompicin，RFP）株的rpoβ变异情况。结果137株临床分离结核菌，49株耐RFP，占35．8％，平均MIC为179．6±135．0ug／mL。Rpop突变率为95．7％（47／49），主要为点突变。突变点依次为531 Ser（TCG）→Leu（TTG）（40．8％）、531 Ser（TCG）→Trp（TGG）（12．2％）、526 His（CAC）→Tyr（TAC）（6．1％）、526His（CAC）→Asp（GAC）（6．1％）。526 His（CAC）→Asn（AAC）（6．1％）、526 His（CAC）→Pro（CCC）（8．2％）、516Asp（GAC）→Val（GTC）（12．2％）、533 Leu（CTG）→Arg（CGG）（4．1％）和513 GIn（CAA）→Pro（CCA）（2．1％）。结论本研究建立的检测结核菌rpoβ基因突变的基因芯片技术敏感性高，特异性强，可应用于结核菌耐RFP基因的检测。     

结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因检测芯片的研究

目的建立用于检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因突变的基因芯片，并与基因测序和常规药物敏感性试验进行比较，探讨其使用价值。方法根据结核分枝杆菌katG基因突变的规律，设计不同的探针，制备可检测katG基因突变的芯片，并且同时检测药物敏感株和耐药株的katG的变异情况。结果结核分枝杆菌临床分离株共137株，至少耐1种抗结核药物共97株（70．8％）。耐异烟肼的比例为32．8％（45／137）。敏感株katG基因扩增阳性率为100％。耐INH菌株katG的阳性率为88．9％（40／45）。PCR检测katG阳性率为91．1％（41／45）。耐INH菌株katG的缺失率为8．9％。katG315位密码子的突变依次为AAC（32．5％，13／40），ACC（15．0％，6／40），ACA（10．0％，4／40）。ATC（5．0％，2／40）和AGC（5．0％，2／40）。基因芯片检测、药物敏感性试验和基因测序的结果一致。结论本研究建立的检测结核菌katG基因突变的基因芯片技术敏感性高，特异性强，可用于结核菌的快速药物敏感性试验评价。