丹参酮Ⅱ_A磺酸钠促进低温保存的大鼠坐骨神经同种异体移植后神经再生

探讨丹参酮Ⅱ_A磺酸钠(tanshinoneⅡ_Asulfonate)对深低温保存大鼠坐骨神经活性以及同种异体移植后神经再生、功能恢复的保护作用及其可能的作用机制。将SPF级标准雄性SD大鼠坐骨神经片段15 mm,分别在含有不同浓度丹参酮Ⅱ_A磺酸钠(A 0 mg·L~(-1),B 80 mg·L~(-1),C 160 mg·L~(-1),D 480 mg·L~(-1))中低温(-80℃)保存24周,另设有新鲜对照组,通过电镜观察保存后神经超微结构,calcein-AM/PI荧光染色激光共聚焦显微镜观察活细胞、死细胞数量,Western blot法检测Bax,Bcl-2的蛋白表达变化;冻存后神经体外培养7 d,PCR,Western blot法检测NGF,GDNF的mRNA以及蛋白表达水平。用保存24周的SD大鼠坐骨神经,修复对应的Wistar雄性大鼠坐骨神经10 mm缺损(A',B',C',D'组),术后16周,电生理检测肌肉复合动作电位潜伏期和神经传导速度,甲苯胺蓝染色分析再生有髓神经纤维数目和髓鞘厚度,电镜观察再生神经超微结构。结果显示,大鼠坐骨神经保存24周,与A,B组相比,C,D组脱髓鞘、空泡化程度较弱,活细胞数量较多,Bax表达降低,Bcl-2表达升高;与此同时,保存24周后的坐骨神经NGF,GDNF mRNA及蛋白表达,C,D组均显著高于A,B组。同种异体移植16周后,与A',B'组相比,C',D'组再生有髓神经纤维数量较多,分布广泛、髓鞘较厚,肌肉复合动作电位潜伏期缩短,神经传导速度升高。这表明丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对-80℃长期保存的大鼠坐骨神经具有保护作用,能维持保存后神经的生物活性,促进同种异体移植后受体神经再生,其中以中、高浓度(C,D组)效果更好。     

促性腺激素释放激素类似物治疗女童特发性中枢性性早熟的疗效分析

目的比较分析促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)治疗女童特发性中枢性性早熟(ICPP)的临床疗效。方法 51例女童ICPP患儿用GnRHa治疗,疗程1～2年,观察治疗前后促黄体生成素峰值(P-LH)、促卵泡刺激素峰值(P-FSH)、雌二醇(E2)、子宫容积、卵巢容积以及随疗程变化体重指数(BMI)、骨龄(BA)、骨龄与生活年龄比值(BA/CA)、生长速率(GV)、预测成人身高(PAH)的动态变化。结果治疗前后促黄体生成素峰值、促卵泡刺激素峰值比较,差异有统计学意义(P<0.01);治疗前后骨龄与生活年龄比值、生长速率比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前后预测成人身高有提高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GnRHa能有效抑制下丘脑-垂体-性腺轴治疗ICPP,但其促身高增长作用有待进一步研究。     

中至重度肥胖儿童尿酸水平与糖脂代谢相关性研究

目的探讨中至重度肥胖儿童尿酸(UA)水平与糖脂代谢之间的关系。方法选择2006年1月至2010年12月在本院内分泌代谢专科门诊和病区就诊并确诊的74例肥胖儿童为研究对象。其中,男性患儿为45例,女性为29例;年龄为2.7～16.6岁。诊断标准:体重指数(BMI)超过同年龄、同性别儿童95百分位(P95,诊断为肥胖,以BMI超过同年龄、同性别儿童的30%,则诊断为中度肥胖,若超过40%,则诊断为重度肥胖。纳入标准:入选儿童既往均无严重肝、肾损害和使用影响UA的药物史。按照UA水平将其分为高UA水平组(n=24,UA>416μmol/L)和正常UA水平组(n=50,UA≤416μmol/L)(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象监护人的知情同意,并与其签署临床研究知情同意书)。两组患儿性别、年龄等比较,差异无显著意义(P>0.05)。分别检测两组儿童BMI、空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及UA,并计算血糖/胰岛素比值(G/I)、稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和稳态模型评估的胰岛素敏感性(HOMA-IS),TG及HDL-C比值(TG/HDL-C)。结果高UA水平组FBG,G/I,TG,TC,HDL,LDL和TG/HDL-C与正常UA水平组比较,差异无统计学意义(P>0.05),而两组FINS,HOMA-IR和HOMA-IS比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中至重度肥胖儿童合并高尿酸血症(HUA)与胰岛素敏感性密切相关,肥胖儿童需早期干预和长期随访血UA浓度。     

大黄素对大鼠急性脊髓损伤后氧化应激和炎症反应的影响研究

研究大黄素对大鼠急性脊髓损伤后氧化应激和炎症反应的影响,探讨大黄素对急性脊髓损伤后神经元的保护机制。以Allen's法制备脊髓损伤模型。将195只SD大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、大黄素20 mg·kg-1组(C组)、大黄素40 mg·kg-1组(D组)、大黄素80 mg·kg-1组(E组),术后3,7,14,28 d予BBB评分,斜板实验观察大鼠运动功能恢复。术后7 d,甲苯胺蓝染色观察神经元尼氏小体,电镜观察脊髓神经纤维改变;Western blot法检测Nrf2,HO-1,NQO1,GFAP,NF-κB蛋白表达;ELISA检测TNF-α,IL-1β,IL-6含量;免疫荧光检测GFAP,NG2,ED-1表达。BBB评分与斜板实验显示,术后7,14,28 d,C,D,E组较B组明显升高,差异均具有统计学意义(P0.05);术后7 d,B,C组尼氏小体开始融合,D,E组较B,C组融合明显减轻;电镜显示,B,C组脊髓神经纤维出现明显脱髓鞘改变,D,E组髓鞘变性较B,C组减轻;Nrf2,HO-1,GFAP,NF-κB蛋白表达C,D,E组与B组比较,NQO1蛋白表达D,E组与B组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。C,D,E组TNF-α,IL-6含量较B组,D,E组IL-1β含量较B组显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。C,D,E组GFAP,NG2表达较B组增加,D,E组更明显;C,D,E组ED-1表达较B组显著降低。大黄素对脊髓急性损伤后神经细胞具有保护作用,其机制可能与激活Nrf2-ARE通路,降低NF-κB,ED-1,TNF-α,IL-1β,IL-6表达,促进GFAP,NG2表达有关。     

冷诱导RNA结合蛋白促进冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的作用

目的探讨冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对冷冻保存大鼠坐骨神经活性及同种异体移植后神经再生的影响。方法将15 mm雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经片段置于DMEM溶液中,分别在4℃、15℃、32℃预处理24 h(A组、B组、C组),设置新鲜神经组(D组)。RT-PCR和Western blotting检测CIRP m RNA和蛋白表达。将上述4组神经置于冷冻保存液中液氮保存4周,Calcein-AM/PI荧光染色、激光共聚焦显微镜观察保存后神经活细胞、死细胞情况,Western blotting检测Bax、Bcl-2蛋白表达。取冷冻保存4周的坐骨神经,37℃、5%CO2培养7 d,Western blotting检测神经生长因子(NGF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)蛋白表达;用冷冻保存4周或新鲜雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经,修复对应的雄性Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(A′组、B′组、C′组、D′组、E′组),设立同系移植新鲜组(F′组)。术后4周,免疫组化染色观察移植段神经CD+4T淋巴细胞入侵,ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、干扰素(IFN)-γ水平;术后20周,电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和运动神经传导速度(MNCV),甲苯胺蓝染色分析再生有髓神经纤维数目和髓鞘厚度,电镜观察再生神经超微结构。结果 C组神经CIRP m RNA及蛋白表达均高于A组和B组(P0.05)。冷冻保存4周后,与A组、B组、D组相比,C组神经活细胞数量较多,Bax表达降低(P0.05),Bcl-2表达升高(P0.05);C组冷冻保存神经分泌NGF、GDNF表达均高于A组和B组(P0.05)。同种异体移植术后4周,与E′组相比,C′组CD+4T淋巴细胞减少,血清IL-6、IFN-γ水平降低(P0.05),但C′组与D′组和F′组比较无显著性差异(P0.05)。术后20周,C′组CMAP、MNCV、再生神经轴突密度及髓鞘厚度均优于A′、B′、D′组和E′组(P0.05)。再生神经超微结构显示,与A′组、B′组、D′组和E′组相比,C′、F′组有髓神经纤维数量多,粗细均匀,分布广泛,髓鞘厚。结论 32℃预处理可促进坐骨神经CIRP高表达,CIRP高表达对冷冻保存大鼠坐骨神经具有保护作用,能维持保存后神经的生物活性,促进同种异体移植后受体神经再生。     

大黄素对大鼠急性脊髓损伤后继发脊髓水肿的影响北大核心CSCD

目的探讨大黄素对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的影响及其机制。方法将180只健康雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(A组),模型组(B组),大黄素低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组36只。采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,术后3 d、7 d、14 d及28 d,BBB评分及斜板实验观察大鼠运动功能恢复。术后3 d,HE染色观察脊髓组织病理变化,干湿重法检测脊髓组织含水量,伊文思蓝(EB)染色检测血脊髓屏障(BSCB)通透性,RT-PCR和Western blotting检测水通道蛋白-4(AQP-4)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)m RNA和蛋白表达。结果 BBB评分及斜板实验结果显示,术后7 d、14 d、28 d,C组、D组和E组均优于B组(P<0.05),E组最佳(P<0.05)。术后3 d,HE染色显示,B组损伤节段内有大片出血灶,神经细胞肿胀、破坏,大量炎性细胞浸润,组织间隙增宽,水肿严重,C组、D组和E组上述病理改变改善,其中E组最明显;B组脊髓组织含水量较A组增高(P<0.05),D组、E组脊髓组织含水量低于B组和C组(P<0.05),E组低于D组(P<0.05);B组EB含量高于A组(P<0.05),C组、D组和E组EB含量均低于B组(P<0.05);C组、D组和E组AQP-4、MMP-2 m RNA和蛋白表达均低于B组(P<0.05),E组最低(P<0.05)。结论大黄素能减轻大鼠急性脊髓损伤后的脊髓水肿,促进肢体功能康复,这可能与大黄素下调损伤后脊髓组织AQP-4和MMP-2表达,降低BSCB通透性有关。     

儿童1型糖尿病血脂异常的临床分析

目的分析31例儿童1型糖尿病的血脂特点以及与血糖控制的关系。方法将我院31例1型糖尿病患儿分成DKA组(n=12)和非DKA组(n=19),比较两组空腹血糖、糖化血红蛋白、三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白有无差异;根据血脂分为异常组(n=18)和正常组(n=13),比较两组DKA发生、病程、空腹血糖及糖化血红蛋白差异;分析糖化血红蛋白与三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白的关系。结果 DKA组和非DKA组的空腹血糖、三酰甘油和低密度脂蛋白差异有统计学意义(P<0.05);糖化血红蛋白、总胆固醇及高密度脂蛋白的差异无统计学意义(P>0.05)。血脂异常组和血脂正常组发生DKA的百分比分别是55.56%和15.38%,两者差异有统计学意义(P<0.05),但是两组间病程、空腹血糖和糖化血红蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。TC、TG不随HbA1c的升高而升高(P>0.05),HDL随HbA1c升高而降低(P<0.05)。结论 1型糖尿病患儿合并DKA者三酰甘油明显升高,血脂异常组更易发生DKA。     

大黄素对大鼠急性脊髓损伤后继发脊髓水肿的影响

目的探讨大黄素对大鼠急性脊髓损伤后脊髓水肿的影响及其机制。方法将180只健康雌性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(A组),模型组(B组),大黄素低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组36只。采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,术后3 d、7 d、14 d及28 d,BBB评分及斜板实验观察大鼠运动功能恢复。术后3 d,HE染色观察脊髓组织病理变化,干湿重法检测脊髓组织含水量,伊文思蓝(EB)染色检测血脊髓屏障(BSCB)通透性,RT-PCR和Western blotting检测水通道蛋白-4(AQP-4)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)m RNA和蛋白表达。结果 BBB评分及斜板实验结果显示,术后7 d、14 d、28 d,C组、D组和E组均优于B组(P0.05),E组最佳(P0.05)。术后3 d,HE染色显示,B组损伤节段内有大片出血灶,神经细胞肿胀、破坏,大量炎性细胞浸润,组织间隙增宽,水肿严重,C组、D组和E组上述病理改变改善,其中E组最明显;B组脊髓组织含水量较A组增高(P0.05),D组、E组脊髓组织含水量低于B组和C组(P0.05),E组低于D组(P0.05);B组EB含量高于A组(P0.05),C组、D组和E组EB含量均低于B组(P0.05);C组、D组和E组AQP-4、MMP-2 m RNA和蛋白表达均低于B组(P0.05),E组最低(P0.05)。结论大黄素能减轻大鼠急性脊髓损伤后的脊髓水肿,促进肢体功能康复,这可能与大黄素下调损伤后脊髓组织AQP-4和MMP-2表达,降低BSCB通透性有关。     

冷诱导RNA结合蛋白促进冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的作用北大核心CSCD

目的探讨冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对冷冻保存大鼠坐骨神经活性及同种异体移植后神经再生的影响。方法将15 mm雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经片段置于DMEM溶液中,分别在4℃、15℃、32℃预处理24 h(A组、B组、C组),设置新鲜神经组(D组)。RT-PCR和Western blotting检测CIRP m RNA和蛋白表达。将上述4组神经置于冷冻保存液中液氮保存4周,Calcein-AM/PI荧光染色、激光共聚焦显微镜观察保存后神经活细胞、死细胞情况,Western blotting检测Bax、Bcl-2蛋白表达。取冷冻保存4周的坐骨神经,37℃、5%CO2培养7 d,Western blotting检测神经生长因子(NGF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)蛋白表达;用冷冻保存4周或新鲜雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经,修复对应的雄性Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(A′组、B′组、C′组、D′组、E′组),设立同系移植新鲜组(F′组)。术后4周,免疫组化染色观察移植段神经CD+4T淋巴细胞入侵,ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、干扰素(IFN)-γ水平;术后20周,电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和运动神经传导速度(MNCV),甲苯胺蓝染色分析再生有髓神经纤维数目和髓鞘厚度,电镜观察再生神经超微结构。结果 C组神经CIRP m RNA及蛋白表达均高于A组和B组(P<0.05)。冷冻保存4周后,与A组、B组、D组相比,C组神经活细胞数量较多,Bax表达降低(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05);C组冷冻保存神经分泌NGF、GDNF表达均高于A组和B组(P<0.05)。同种异体移植术后4周,与E′组相比,C′组CD+4T淋巴细胞减少,血清IL-6、IFN-γ水平降低(P<0.05),但C′组与D′组和F′组比较无显著性差异(P>0.05)。术后20周,C′组CMAP、MNCV、再生神经轴突密度及髓鞘厚度均优于A′、B′、D′组和E′组(P<0.05)。再生神经超微结构显示,与A′组、B′组、D′组和E′组相比,C′、F′组有髓神经纤维数量多,粗细均匀,分布广泛,髓鞘厚。结论 32℃预处理可促进坐骨神经CIRP高表达,CIRP高表达对冷冻保存大鼠坐骨神经具有保护作用,能维持保存后神经的生物活性,促进同种异体移植后受体神经再生。     

参附注射液玻璃化保存的大鼠坐骨神经修复异体神经缺损研究

目的探讨参附注射液提高大鼠坐骨神经深低温玻璃化保存效果的可行性。方法 SPF级SD雄性大鼠坐骨神经分别在含有不同体积分数参附注射液(0、5%、10%、30%)的玻璃化液(A、B、C、D组)中深低温(-80℃)保存4周,透射电镜观察神经超微结构,Calcein-AM/PI双染色激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察神经生物活性,Western blotting检测Bcl-2、Bax蛋白表达。用保存后的大鼠坐骨神经修复对应Wistar雄性大鼠(A′、B′、C′、D′组)坐骨神经10 mm缺损,术后分期观察大鼠一般情况、坐骨神经功能指数(SFI),第16周行电生理检测,再生神经组织学观察。结果透射电镜观察,A、B、C、D组均存在不同程度的脱髓鞘改变,但B、C、D组轻于A组;LSCM观察,B、C、D组绿色荧光较强,红色荧光较弱,A组绿色荧光较弱,红色荧光最广;Bcl-2和Bax蛋白表达,B、C、D组与A组间,C、D组与B组间差异显著(P0.05),C、D组间差异不显著(P0.05)。移植术后各期SFI,术后16周后电生理、再生神经有髓纤维数及髓鞘厚度,均显示C′、D′组与A′、B′组间差异显著(P0.05),但A′、B′组间及C′、D′组间差异不显著(P0.05)。术后16周再生神经超微结构,A′、B′组有髓神经纤维数较少、直径较细,分布稀疏,髓鞘较薄;C′、D′组再生有髓神经纤维数量较多,分布广泛、髓鞘较厚。结论参附注射液能提高大鼠坐骨神经玻璃化保存效果,促进异体移植后受体神经再生。