2006年至2008年上海市住院腹泻患儿A组轮状病毒的分子流行病学调查

目的 分析上海地区住院腹泻患儿A组轮状病毒(RV)基因型别、流行季节及年龄分布,以了解本地区A组RV的分子流行病学动态变化特征,为婴幼儿腹泻的预防和控制提供理论依据.方法 2006年1月至2008年12月共收集来自复旦大学附属儿科医院5岁以下腹泻患儿的5176份粪便标本.抽取其中RV抗原阳性标本380份,采用套式多重RT-PCR法进行RV的基因分型.结果 2006-2008年RV腹泻主要的流行季节是10-12月份,＜3岁的患儿占全部患儿的96.8％.380份粪标本中,222份为G3型,占58.4％,41份为G9型,占10.8％.3年间G1型、G2型均少见,G混合型以G3和G9型的混合为主.2006年和2008年均以P[8]型的流行为主,分别占64.6％(53/82)和46.8％(58/124).2007年以P[4]型为主,占38.5％(67/174).P[6]和P[9]型所占比例较低,P混合型以P[8]和P[4]型的混合为主.G未分型和P未分型在3年间均呈上升趋势.P[8]G3型(20.5％)是上海地区2006-2008年间最主要的A组RV流行株,其次包括P[4]G3型及P[m]G3型.结论 2006-2008年上海地区A组RV显示了新的分子流行病学变化特征,包括主要流行型别的改变,流行型别更趋于多样化.     

荧光恒温扩增技术检测肠道病毒71型方法的建立与评价

目的利用荧光恒温扩增(SAT)技术建立一种快速可靠的肠道病毒71型(EV71)检测方法。方法通过设计特异性的EV71 RNA扩增引物及优化探针技术,使用M-MLV反转录酶及T7 RNA多聚酶对EV71 RNA进行核酸扩增,同时利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪进行实时的荧光信号收集和检测。检测复旦大学附属儿科医院儿童手足口病患儿粪便样本199例,以EV71型核酸检测试剂盒作参比方法,DNA测序为第三方验证方法,对研究数据进行Kappa一致性分析。结果 SAT技术共检测到119例EV71阳性样本,其中21例荧光探针法检测为阴性,经测序证实20例样本仍为阳性。SAT与荧光探针法检测结果的Kappa值为0.789。SAT方法的敏感性100%、特异性98.77%。结论本研究建立的EV71型RNA SAT技术具有敏感性高、特异性强、准确、快速可靠等优点,适用于临床对EV71感染的快速诊断。     

肺表面活性蛋白质A的提取和纯化

肺表面活性蛋白质Ａ（ＳＰＡ）是组Ｍｒ为（２８～３６）×１０３的亲水性糖蛋白，可增加肺表面活性物质（ＰＳ）活性，抑制肺Ⅱ型细胞对ＰＳ分泌和增加ＰＳ中磷脂摄入，对ＰＳ进入肺泡形成管鞘有关［１～２］。另外影响肺泡巨噬细胞活力，与免疫防御系统有关［３］。为了深入研究其生理功能及制备ＳＰＡ抗体，用于临床检测和诊断，我们从孕妇羊水中制备提纯ＳＰＡ。材料和方法材料和试剂羊水来自产院３７～４２孕周健康产妇，合格学水呈乳白色，无污染。试剂Ｂ－Ｄ－ＯＧＰ为ＳＩＧＭＡ公司产品，其他为国产分析纯。低分子量蛋白质标准（上…     

FTO基因SNP rs9939609, rs1421085多态性与儿童青少年肥胖及其代谢指标的相关性研究

目的 研究FTO(fat-mass and obesity associated)基因SNP rs9939609和rs1421085多态性与儿童青少年单纯性肥胖及其代谢指标的相关性。方法 以2004至2006年于复旦大学附属儿科医院内分泌门诊就诊的汉族单纯性肥胖和超重儿童青少年分别作为肥胖组和超重组;选择上海市某中学正常体重汉族学生作为正常对照组。分别测量身高和体重,计算BMI。测定血清空腹葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素(FIns)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平。计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和胰岛素敏感指数（QUICKI）。抽提外周血基因组DNA,采用Taqman-MGB探针技术检测FTO基因SNP rs9939609和rs1421085多态性,分析不同基因型与代谢指标和BMI的相关性。结果 肥胖组纳入236例,超重组纳入239例,正常对照组纳入241名。①肥胖+超重组的BMI、FPG、FIns、TG和 HOMA-IR显著高于正常对照组;②肥胖、超重和正常对照组rs9939609分型成功率分别为94.9%（224/236例）、97.9（234/239例）和95.9%（231/241名）,rs1421085分型成功率分别为92.8%（219/236例）、97.1% （232/239例）和95.4%（230/241名）。rs9939609 AA基因型频率：肥胖组为2.7%,超重组为0.4%,正常对照组为1.7%,肥胖+超重组A等位基因频率显著高于正常对照组（OR=1.437,P=0.048）;rs1421085 CC基因型频率：肥胖组为2.7%,超重组为0.9%,正常对照组为1.7%,肥胖+超重组C等位基因频率高于正常对照组,但差异无统计学意义（OR=1.388,P=0.076 0）;③rs1421085 TC +CC基因型和rs9939609 TA +AA 基因型儿童青少年的BMI显著高于TT基因型（rs9939609：P=0.000 3;rs1421085：P=0.000 5）;rs1421085 TC +CC基因型和rs9939609 TA +AA 基因型与FPG、FIns、TG、TC、HOMA-IR、QUICKI无显著相关性。结论 FTO基因SNP rs9939609和rs1421085多态性与中国汉族儿童青少年肥胖和（或）超重存在相关性。A等位基因频率远低于欧洲人群,对BMI的作用效果与欧洲人群相似,但对代谢指标影响存在显著差异。     

新生儿糖尿病致病基因分析及其对疗效的影响

14例新生儿糖尿病(neonatal diabetes mellitus)入选,比较胰岛素(n=5)和格列本脲(n=9)的疗效.扩增6例患儿KCNJ11、ABCC8、INS基因并测序.共发现2例存在ABCC8基因突变,1例KCNJ11基因突变,1例为INS基因突变,1例为6q24甲基化减低,1例突变基因不清.9例新生儿糖尿病格列本脲治疗者8例血糖控制良好(88.9%).5例采用胰岛素治疗后均失访或死亡.提示新生儿糖尿病胰岛素治疗依从性差,格列本脲可有效降低血糖.

Abstract：

Fourteen neonatal diabetes mellitus(NDM)patients were recruited. 9 patients were treated with glyburide and the other 5 with insulin. ABCC8, KCNJ11, and INS genes were sequenced in 6 of them. Gene mutations were found in 2, 1, and 1 cases in these genes, respectively. One case with 6q24 hypomethylation and another without known mutation were also found. 8 out of 9 patients treated with glyburide reached euglycemia(88.9%). The other 5 patients with insulin therapy either died or lost contact. The results suggest that glyburide therapy is effective in neonatal diabetes mellitus, while insulin therapy may contribute to poor compliance.     

2008至2011年上海单中心住院腹泻儿童轮状病毒基因型别流行特征

目的 监测并分析上海单中心住院腹泻儿童A组轮状病毒（RV）基因型别的变化特征,为RV性腹泻的防治提供基础数据和理论依据。方法 收集2008年1月至2011年12月入住复旦大学附属儿科医院<5岁的腹泻患儿粪便标本,RV抗原阳性者345份,采用套式多重RT-PCR法进行RV的基因分型。结果 ①G基因型：2008至2010年以G3型为主,检出率分别为49.2%、44.6%和78.0%;G9型的流行呈上升趋势,成为2011年最主要的流行型别（51.1%）;G1型在4年中均有检出（8%~20%）;G2型少见,G4型未检出。G混合型中,以G3+G9型为主,其次为G3+G1型,还检出4例3种G基因型的混合。②P基因型：2008、2010和2011年均以P［8］型为主,检出率分别为55.6%、60.0%和68.1%,2009年以P混合基因型（43.2%）为主;P［4］型在4年均有流行;P［6］、P［9］型少见,仅在混合感染中检出P［10］型。P混合型中,以P［8］+P［4］型为主,其次为P［8］+P［10］型。③P［8］G3型是2008至2011年最主要的RV流行株（24.3%）,其次为P［8］G9型及PmG3型。2011年P［8］G9型跃升为最主要的流行型别（40.5%）。结论 与2001至2007年相比,2008至2011年上海地区A组RV基因型出现了新的流行特点,G1型及G9型的流行呈上升趋势,G3的流行有所下降,各种混合型别多见。对RV基因型保持系统性的连续监测对RV疫苗在上海的应用是必要的。     

脂联素基因SNP276多态性与儿童青少年肥胖的相关性研究

目的研究脂联素（APM1）基因SNP276 G/T多态性与儿童青少年单纯性肥胖及其代谢指标的相关性。方法以2004至2006年于复旦大学附属儿科医院内分泌门诊就诊的单纯性肥胖或超重儿童青少年分别作为肥胖组和超重组;选择某中学正常体重学生作为正常对照组。分别测量身高和体重,计算体重指数（BMI）。测定血清空腹葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素（FIns）、三酰甘油（TG）和总胆固醇（TC）水平。计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和胰岛素敏感指数（QUICKI）。抽提外周血基因组DNA,采用Taqman-MGB探针技术检测APM1基因SNP276 G/T多态性,分析不同基因型与代谢指标和BMI间的关联性。结果肥胖组纳入227例,超重组纳入231例,正常对照组纳入216名。①肥胖＋超重组的BMI、FPG、FIns、TG和HOMA-IR均显著高于正常对照组。②基因分布频率符合Hardy-Weinberg平衡。③肥胖组、超重组和正常对照组的G等位基因频率分别为71.4%、72.5%和69.7%,GG基因型频率分别为50.2%、52.4%和45.8%,GT基因型频率分别为42.3%、40.3%和47.7%;各组差异均无统计学意义（P均〉0.05）。④SNP276 GG、GT和TT基因型的BMI、FPG、FIns、TG、TC、HOMA-IR和QUICKI差异均无统计学意义（P=0.49～0.99）。⑤肥胖＋超重组IFG儿童青少年中GG＋GT型有70例,TT型4例;正常对照组IFG儿童青少年中GG＋GT型有10例,TT型0例;两组差异无统计学意义（P=0.45）。结论APM1基因SNP276 G/T多态性与青少年儿童单纯性肥胖及其代谢指标间无显著关联性,提示该SNP位点可能存在种族特异性。     

2011至2014年上海单中心下呼吸道感染住院患儿常见病原体流行病学研究

目的 分析近3年上海一家医院下呼吸道感染(LRTI)住院患儿中呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、副流感病毒（PIV）、流感病毒（FLU）、人偏肺病毒（MV）、沙眼衣原体（CT）和肺炎支原体（MP）7种常见病原体的流行病学特征,为上海地区儿童LRTI的预防与诊治提供数据支持。 方法 收集2011年10月至2014年9月于复旦大学附属儿科医院就诊的LRTI住院患儿,取其鼻咽部抽吸物,使用直接免疫荧光法或实时荧光定量PCR技术检测上述7种呼吸道病原体,并对其流行病学特征行描述性分析。 结果 3年的呼吸道病原体总检出率为44.0%(6 301/14 334),MP的检出率最高（17.5%）,其次为RSV(13.9%）和PIV(5.6%）。男、女呼吸道病原体的总检出率差异无统计学意义（χ2=0.68,P=0.408）。0~6月龄患儿以RSV检出率最高,>2岁患儿以MP检出率最高。RSV和CT随着年龄的增长检出率显著降低,MP的检出率随着年龄增长而显著升高。RSV的检出率高峰出现在冬季,夏季少见。ADV在春夏季检出率较高,而在秋季少见。PIV和MP检出率的高峰主要出现在夏季,FLU在1月份有暴发性的流行,MV的检出高峰主要出现在每年3月份;CT全年散发,无明显季节特征。病原体混合感染的总检出率为2.9％,在7~12月龄患儿中检出率最高,其中以MP合并其他病原体感染为主,最常见为MP+RSV的混合感染。 结论 多种病原体导致上海地区儿童的LRTI,不同病原体显示出不同的流行季节、年龄分布等流行特征。     

人双埃可病毒致儿童中枢神经系统感染和脓毒症的分子流行病学

目的 检测患儿脑脊液和血浆标本中人双埃可病毒(HPeV),探讨其致儿童中枢神经系统感染和脓毒症的分子流行病学特征.方法 收集2009年1月至12月复旦大学附属儿科医院328例14岁以下患儿的脑脊液标本210份和血浆标本149份,肠道病毒检测均阴性.所有患儿均有神经系统症状或脓毒症症状.以反转录套式PCR法直接从标本中检测HPeV,进而通过基于VP3/VP1区的套式PCR扩增片段的测序结果进行基因分型.同时期收集99份健康体检儿童的血浆标本作为健康对照.结果 328例患儿中,HPeV阳性者27例,占8.2％,各个年龄段均能检测出HPeV感染,＜3个月龄组66例患儿,阳性12例,检出率最高,为18.2％.HPeV感染流行高峰为12月份,收集的48份标本中,阳性9份,达18.8％.成功分型的20份标本均为HPeV1型.同时期的99份健康对照血浆标本中未检测到HPeV.结论 HPeV是致上海地区儿童中枢神经系统感染和脓毒症的病原体,对儿童的危害应引起临床的重视,对HPeV的筛查应纳入常规的病毒检测行列.HPeV1是2009年上海地区的主要致病型.     

核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1基因K121Q多态性与儿童青少年肥胖及代谢指标的相关性研究

目的：研究核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1（ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase1,ENPP1）基因K121Q与青少年儿童肥胖及其相关代谢指标的相关性。方法：6～18岁肥胖/超重儿童青少年464例,体质量正常对照者223例,分别测量身高体质量,计算体质量指数（BMI）;测定血清空腹葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素（FIns）、三酰甘油（TG）和总胆固醇（TC）,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和敏感指数（QUICKI）。抽提外周血基因组DNA,采用Taqman-MGB探针技术检测ENPP1基因K121Q多态性。采用国际肥胖工作组BMI标准评估肥胖程度,分析基因型与生化指标和体质量指标间的关联性。结果：（1）肥胖/超重合并组的体质量指数、FPG、Fins、TG、HOMA-IR均显著高于体质量正常对照组。（2）肥胖组K等位基因频率89.4%,Q等位基因10.6%;在超重组K等位基因90.7%,Q等位基因9.3%;正常对照组K等位基因87.9%,Q等位基因为52例12.1%,3组间无显著差异（P=0.4171）。（3）不同基因型的FPG、FIns、TG、TC、HOMA-IR、QUICKI均无显著性差异。结论：ENPP1基因K121Q多态性与中国汉族青少年单纯性肥胖及其代谢指标间无显著关联性,提示该多态性位点可能不是中国儿童肥胖和代谢综合征的关键位点。