输血科开展富血小板血浆治疗的可行性探讨——附176例PRP应用的疗效分析

目的探讨输血科在当前输血医学的发展新形势下开展富血小板血浆(PRP)治疗的可行性。方法总结分析2014年1月—2017年1月本科独立完成或与临床科室配合完成的来自门诊或住院的176名接受PRP治疗患者的情况,以证明PRP治疗的有效性和安全性,结合实践重点阐释输血科开展PRP治疗的可行性、必要性和紧迫性。176例自愿接受PRP治疗的病案资料包括糖尿病慢性难愈合皮肤溃疡创面67例、整形美容配合治疗100例、膝关节损伤16例。血液采集、PRP、血小板凝胶(PG)或PG上清液的制备和质量控制均由输血科完成,糖尿病慢性难愈合皮肤溃疡创面和膝关节损伤的PRP治疗由输血科医师独立完成,整形美容配点阵激光/水光针联合PRP/PG上清治疗由输血科医师配合整形美容科医师完成。结果糖尿病慢性难愈合皮肤溃疡患者接受异体PRP治疗12周后的痊愈率36%(24/60)、显效率18%(12/60)、好转率26.67%(16/60)、无效率13.33%(8/60);美容整形科接受自体点阵激光/水光针联合PRP/PG上清液治疗后,总痊愈率99%(99/100)中痊愈60例、显效30例、有效9例、无效1例;运动损伤患者在接受自体PRP治疗后,痊愈率0、显效率25%(4/16)、有效率75%(12/16)、无效率0,总有效率100%。结论输血科有能力独立完成或配合临床科室开展PRP治疗。     

《自体富血小板血浆制备技术专家共识》解读

［摘要］　为更好地帮助读者对《自体富血小板血浆制备技术专家共识》（简称《共识》）进行理解,该文对《共识》中的重点推荐点、难点和疑惑点作了较为系统的解释或补充说明。以期为读者更全面认识、准确理解和灵活运用《共识》提供支撑,最大限度地推动该技术在输血医学领域的健康发展。     

冻干血小板在促SD大鼠急性创面愈合中的实验研究

目的建立SD大鼠急性创伤模型,探讨冻干人血小板(Freezing-dried Platelets,FDP)对SD大鼠急性创伤的促愈合作用。方法 SD大鼠60只,在每只大鼠背部脊柱两侧各剪下2个直径为1.2 cm的圆形全层皮肤。将每只大鼠背部4个创面分配到4个组:FDP组、新鲜血小板(platelet rich plasma,PRP)组、重组型人表皮生长因子(Recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)组和空白对照组(blank control,BC)。分别于造模后即刻给予FDP(0.85 m L/cm2)、PRP(0.85 m L/cm2)、rh EGF(0.5 m L/cm2)和凡士林纱布进行治疗,每间隔两天清洗伤口后更换敷料。于d5、d7、d10、d14肉眼观察、拍照,并记录创面愈合情况,计算创面愈合率,取各时间点创缘新生皮肤组织进行HE染色、Masson三色染色和CD34免疫组化三项病理学实验,并进行相关统计分析。结果肉眼观察各组大鼠创面均随治疗时间延长而趋于缩小,4个重点观测点得出的综合创面愈合率排序为PRPFDPrh EGFBC组。治疗d5的创伤愈合率相近,没有显著差异;d7,PRP组、FDP和rh EGF组的愈合率均高于BC组,差异有统计学意义(P0.05),前三组组间差异没有统计学意义(P0.05);d10时,前3组的愈合率均高于BC组,差异有统计学意义(P0.05);组间比较,PRP组创面愈合率高于FDP和rh EGF组(P0.05)。d14,组间的创面愈合率没有明显差异。3种组织细胞学观察炎性细胞浸润、胶原纤维生成、血管生成增生和再上皮化等病理结果显示:FDP与PRP同样能缩短创伤愈合炎症期、促进胶原纤维的生成、加快血管生成、促进肉芽组织生长,从而促进急性创伤组织的修复作用。结论 FDP具有与新鲜血小板相近的促进SD大鼠急性创面愈合的作用,并具有优于单一生长因子(rh EGF)的促愈合效果。     

冻干血小板保护液优化的实验研究

目的优化冻干血小板保护液,减少冻干过程对血小板的损害,有效保护其功能。方法采用3因素3水平的正交设计法,对血小板膜保护剂、血小板激活抑制剂、蛋白质类保护剂的3类成分组成的保护液进行优选。检测血小板最大聚集率、血小板活化标志PAC-1、CD62P的阳性表达率和血小板回收率,通过比较其差异,筛选出本实验的最优冻干血小板保护液。以优化保护液对血小板处理后进行冻干,并以此为实验组,与新鲜血小板和原保护液处理后冻干血小板进行比较验证,验证指标与优选指标相同,比较3者4项指标之间的差异。结果正交设计试验结果显示:血小板最大聚集率组间最高(74.33±24.01)%,血小板活化标志PAC-1和CD62P低于9组平均水平,血小板回收率高于9组平均水平。以主要体现血小板功能的血小板最大聚集率为优先指标,结合其余3项检测指标进行综合分析,在原保护液的基础上,筛选出添加了2%DMSO、第2信使调节剂、2 mmol/L维生素B6,75%的PPP保护液组为最优组合。验证实验结果显示,优化保护液组血小板最大聚集率(76.12±6.02)%,与原保护液组相比,差异有统计学意义(P0.05),与新鲜血小板组相比,差异没有统计学意义(P0.05)。最优保护液组血小板激活标志PAC-1和CD62P阳性表达率分别为(3.23±0.49)%和(36.83±8.21)%,2者与原保护液组、新鲜血小板组相比,差异无统计学意义(P0.05);最优保护液组冻干血小板复水化后血小板回收率为(85.90±2.24)%,与原保护液组相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论本实验优化的血小板保护液优于原保护液,明显提高了冻干血小板复水化后最大聚集率,能更好地保护血小板的功能,但对血小板冻干过程的保存损害问题没有得到更好的改善,有待下一步深入研究。     

短波紫外线病毒灭活技术对血小板体外功能影响的实验研究

目的研究短波紫外线病毒灭活技术处理血小板后其体外功能相关参数的变化。方法白膜法提取血小板,将血小板重悬于PPP、SSP+混合溶液中,调血小板计数约1 000×109/L。短波紫外线照射处理血小板,辐照剂量为0.220 J/cm~2。照射处理后扫描电镜观察血小板形态的变化,d1、d3、d5、d7取样检测血小板体外功能相关指标,评估短波紫外线病毒灭活技术对血小板体外功能的影响。结果扫描电镜观察到短波紫外线照射后血小板外形极不规则,伪足伸出,有激活的趋势。实验组血小板相较于对照组计数下降、MPV增加、P-LCR增加,HSR下降,差异均有统计学意义(P0.05);CCK-8法观察血小板线粒体脱氢酶的活性,实验组吸光度值稍低于对照组,d5差异有统计学意义(P0.05);实验组血小板激活标志PAC-1、CD62p,凋亡标志Annexin V阳性表达率均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);实验组血小板ROS中的超氧阴离子含量稍高于对照组,d5差异有统计学意义(P0.05)。结论短波紫外线病毒灭活技术处理血小板导致其活化、凋亡增加,HSR下降,ROS生成增加,该灭活技术对血小板体外功能有一定的影响。     

家庭支持教育对学龄前人工耳蜗植入儿童言语能力提升的影响

目的 探究家庭支持教育对学龄前人工耳蜗植入儿童言语能力提升的作用。方法 选择本院2019年2月～2022年2月收治的103例学龄前人工耳蜗植入儿童,以奇偶数字法将其分为实验组51例及对照组52例。对照组开展常规语言康复干预,实验组在常规语言康复干预基础上增加家庭支持教育。对比两组言语、听觉能力及社会、抑郁情绪的差异。结果 干预后简易版普通话早期言语感知测试（low-verbal mandarin early speech perception test,LV-MESP）评分均高于对照组（P<0.05）。干预后两组有意义听觉整合量表（meaningful auditory integration scale,MAIS）评分相较于干预前提高,且实验组评分显著高于对照组（P<0.05）。干预后实验组各项社会情绪评分均显著高于常规组（P<0.05）。干预后两组抑郁障碍自评量表（depression self-rating scale for children,DSRSC）评分低于干预前,且实验组显著低于对照组（P<0.05）。结论 家庭支持教育对学龄前人工耳蜗植入儿童听...     

血小板冻干过程对其生长因子释放量和促HUVECs增殖作用影响的实验研究

目的探讨血小板冻干过程对其释放PDGF-BB、TGF-β1、VEGF、EGF、IGF-I和FGF-b 6种生长因子及其促HUVECs增殖作用的影响。方法采用ELISA法检测冻干前新鲜PRP激活上清液和FDP激活上清液中6种生长因子的含量。用含不同浓度的FDP激活上清液、新鲜PRP激活上清液和FBS的培养基分别培养HUVECs,CCK8法检测HUVECs增殖的状态。结果 FDP上清液中TGF-β1、VEGF、EGF、IGF-I和FGF-b含量均高于新鲜PRP激活上清液,差异均有统计学意义(P0.05);而PDGF-BB含量略低于新鲜PRP激活上清液,差异无统计学意义(P0.05)。FDP激活上清液、PRP激活上清液和FBS均可促进HUVECs的增殖;随着FDP和PRP激活上清液浓度的增高,细胞增殖作用反而降低,差异有统计学意义(P0.05);在5%的浓度条件下,培养48 h,FDP激活上清液促进HUVECs增殖作用高于PRP激活上清液和FBS,差异有统计学意义(P0.05);培养24 h和72 h,FDP激活上清液、PRP激活上清液和FBS促进HUVECs增殖作用无统计学差异(P0.05)。结论 FDP具有优于新鲜PRP释放生长因子的能力;FDP激活上清液促HUVECs增殖作用优于PRP激活上清液,与FBS具有可比性。     

不同血小板浓度富血小板血浆对动物软骨细胞增殖的影响及其治疗膝骨关节炎的临床效果观察

目的探讨富血小板血浆(PRP)中不同血小板浓度(Plt)对软骨细胞增殖和膝骨关节炎治疗效果影响。方法软骨细胞增殖实验选择小鼠软骨细胞做细胞培养:将人浓缩血小板分成4个实验组,分别调整Plt(×109/L)为A组200、B组500、C组1 000、D组1 500,对照组以DMEM/F12培养基加入5%的胎牛血清;采用CCK-8检测法检测不同Plt的PRP对小鼠软骨细胞在24、48、72 h的增殖效果。临床疗效观察选取膝关节骨性关节炎120例作为研究对象,按照上述细胞增殖实验的4种Plt的PRP随机均分为A、B、C、D 4组(n=30);用EDTA抗凝无菌试管采集受试患者静脉血40 m L/(人)次,使用富浆法离心分离浓缩血小板,调整血小板达到上述4种Plt,治疗4次/例;采用Lysholm膝关节评分量表法评估不同Plt的PRP在治疗前和治疗后1、3、6个月4个时间(点)对骨性关节炎的疗效。结果软骨细胞增殖实验(OD值):对照组及A、B、C和D 4个实验组在小鼠软骨细胞培养24 h时,分别为0.64±0.01、0.77±0.03、0.84±0.01、0.87±0.02、0.88±0.13(P0.05);48 h时分别为0.86±0.01、1.03±0.10、1.29±0.06、1.32±0.01、1.40±0.04(P0.05);72 h时分别为1.18±0.07、1.58±0.03、1.79±0.08、1.90±0.04、1.92±0.02(P0.05)。其中4个实验组组间比较,24、48、72 h时B、C、D 3组均明显优于A组(P0.05),同时C、D 2组又明显优于B组(P0.05)。PRP治疗膝关节骨性关节炎疗效(膝关节功能评估以Lysholm评分表示):与治疗前比较,除A组治疗前后无明显改善(P0.05)外、B、C、D 3组治疗后1个月的评分为69.93±2.43、68.57±2.13、66.98±2.33,3个月为70.50±3.22、73.20±2.44、71.24±3.75,6个月为72.10±2.54、75.13±3.18、74.80±2.43(均为P0.05);其中组间比较,C组明显优于B组(P0.05);6个月时,C、D 2组明显优于B组(P0.05)。结论 Plt为1 000×109/L的PRP对小鼠软骨细胞增殖效果最为明显,且能获得PRP治疗人膝关节炎的满意疗效。