碱性成纤维细胞生长因子与垂体腺瘤增殖及侵袭能力的关系

利用免疫组织化学方法检测 5 1例人类垂体腺瘤标本的碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)与增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白表达。结果显示 ,在 2 9例 (5 6 9% )垂体腺瘤标本中检测到bFGF呈中等强度以上的阳性表达 ;bFGF表达水平与PCNA标记指数呈正相关 ;在无功能腺瘤中 ,bFGF的表达与肿瘤侵袭性相关 ,但在激素分泌性腺瘤中两者相关性不明显。提示bFGF可能参与了垂体腺瘤的增殖过程及部分腺瘤的侵袭过程。     

垂体腺瘤PTTG、bFGF mRNA表达与侵袭性的关系

目的：检测垂体腺瘤组织中垂体肿瘤转化基因(PTTG）、bFGF mRNA的表达，分析其与垂体腺瘤侵袭性的关系及临床意义。方法：应用逆转录PCR(RT—PCR)方法检测30例垂体腺瘤组织标本中PTTG、bFGF mRNA的表达，分析二者与垂体腺瘤侵袭性的关系。结果：侵袭性垂体腺瘤组的PTTG、mRNA表达、bFGF mRNA表达均较非侵袭性腺瘤组增高，其差异具有统计学意义。结论：垂体腺瘤侵袭性的发生与垂体肿瘤转化基因(PTTG)表达增高及其上调血管生成正调节因子bFGF并表达、促进血管生成有关，     

人源载体pHrnF9介导的凝血因子Ⅸ基因在肠上皮sw480细胞中的表达

本研究探索肠上皮细胞和人源载体pHrnFⅨ用于血友病B基因治疗的可能性。用含人凝血因子Ⅸ（human coagulation factorⅨ，hFⅨ）基因的人源载体质粒pHrnF9转染肠上皮细胞sw480，用RT-PCR检测mRNA的转录，荧光显微镜观察转染效率，ELISA和一期法检测蛋白表达及凝血活性。结果表明：转染后的细胞中有hFⅨmRNA的转录；荧光显微镜观察到48小时转染效率最高；ELISA法测得转染后24小时细胞上清中的hFⅨ蛋白量为（11．34±0．23）ng／（10^6cells·24h），第48小时hFⅨ蛋白量最高，达（29．34±1．00）ng／（10^6cells·24h），转染后72小时降为（12．45±0．15）ng）／（10^6cells·24h）。一期法结果显示转染pHrnF9的sw480细胞分泌的FⅨ有凝血活性，48小时达峰值（6．07±0、17）％／10^6cells，第72小时降至（1．81±0．06）％／10^6cells。结论：肠上皮细胞sw480转染pHrnF9质粒后可表达有凝血活性的hFⅨ，肠上皮细胞有望成为血友病B基因治疗的靶细胞。     

蛋白酶体抑制剂诱导帕金森病PINK1蛋白聚集物的形成与特征

目的研究在蛋白酶体抑制剂作用下，帕金森病PINK1蛋白聚集物的形成及其特征。方法应用PCR从胎脑cDNA文库扩增全长PINK1基因，亚克隆至增强型绿色荧光蛋白载体（pEGFP-N1），经测序证实载体构建正确。PINK1-pEGFP-N1表达载体转染非洲绿猴。肾细胞株（COS-7细胞），应用MG-132抑制蛋白酶体活性，Western blot检测PINK1蛋白表达量，荧光染色观察PINK1蛋白是否形成蛋白聚集物，免疫荧光观察构成Lewy小体的两种主要成分：泛素和α-突触核蛋白是否存在于蛋白聚集物中。结果应用MG-132诱导后PINK1蛋白表达量明显增加，PINK1蛋白形成了蛋白聚集物，泛素和α-突触核蛋白与PINK1蛋白聚集物共定位。结论在蛋白酶体抑制剂作用下，PINK1蛋白可形成蛋白聚集物，泛素和α-突触核蛋白是其组成成分。     

人源载体pHrnF9介导的凝血因子Ⅸ基因在肠上皮sw480细胞中的表达

本研究探索肠上皮细胞和人源载体pHrnFⅨ用于血友病B基因治疗的可能性。用含人凝血因子Ⅸ（human coagulation factorⅨ，hFⅨ）基因的人源载体质粒pHrnF9转染肠上皮细胞sw480，用RT-PCR检测mRNA的转录，荧光显微镜观察转染效率，ELISA和一期法检测蛋白表达及凝血活性。结果表明：转染后的细胞中有hFⅨmRNA的转录；荧光显微镜观察到48小时转染效率最高；ELISA法测得转染后24小时细胞上清中的hFⅨ蛋白量为（11．34±0．23）ng／（10^6cells·24h），第48小时hFⅨ蛋白量最高，达（29．34±1．00）ng／（10^6cells·24h），转染后72小时降为（12．45±0．15）ng）／（10^6cells·24h）。一期法结果显示转染pHrnF9的sw480细胞分泌的FⅨ有凝血活性，48小时达峰值（6．07±0、17）％／10^6cells，第72小时降至（1．81±0．06）％／10^6cells。结论：肠上皮细胞sw480转染pHrnF9质粒后可表达有凝血活性的hFⅨ，肠上皮细胞有望成为血友病B基因治疗的靶细胞。     

pEGFPN1-wtHSP22和pEGFPN1-mtHSP22载体的构建及其在人神经母细胞瘤细胞中的表达

腓骨肌萎缩症（Charcot-Marie-Tooth disease，CMT）是人类最常见的具有高度临床和遗传异质性的周围神经单基因遗传病。唐北沙等．成功定位了一个CMT2型大家系并将之命名为CMT2L，研究发现了小分子热休克蛋白22基因（HSP22）突变（423G→T，K141N）为CMT2L的致病突变。为研究HSP22的细胞内定位和生物学功能，我们运用体外基因重组技术构建pEGFPN1-^wtHSP22、pEGFPN1-^mtHSP22载体，转染SHSY5Y细胞后在激光共聚焦显微镜下观察蛋白的细胞内定位和聚集物形成情况。     

垂体腺瘤bFGF表达、血管形成与侵袭性的关系

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子 ( bFGF )表达、肿瘤血管形成在垂体腺瘤侵袭性中的意义. 方法：用免疫组化法(SABC法)检测 39例侵袭性垂体腺瘤、19例非侵袭性垂体腺瘤和4例正常垂体腺组织中 bFGF的表达,并用第Ⅷ因子相关抗原(F8-RA)免疫组化染色来计数垂体腺瘤的血管数量(微血管密度),探讨二者与肿瘤侵袭性的关系. 结果：bFGF的表达、肿瘤血管形成与垂体腺瘤的侵袭性密切相关.侵袭性垂体腺瘤bFGF表达水平、血管计数显著高于非侵袭性垂体腺瘤和正常垂体腺组织,而非侵袭性垂体腺瘤与正常腺组织间则无显著差异(t=1.469,P>0.05);侵袭性腺瘤中bFGF表达水平与肿瘤微血管数量呈正相关(r=0.361,P<0.05). 结论：bFGF可能通过促血管生成作用刺激垂体腺瘤生长与侵袭.     

pcDNA3.1F9质粒介导人凝血因子IX在肠上皮细胞中的表达

目的探索肠上皮细胞用于血友病B基因治疗的可能性。方法用已构建好的质粒载体pcDNA3.1F9,以脂质体介导法转染肠上皮细胞SW480,RT-PCR检测mRNA的转录,ELISA、一期法检测蛋白表达及凝血活性。结果转染后的细胞中有人凝血因子IX(humancoagulationfactorIX,hFIX)mRNA的转录;ELISA法测得转染后24h细胞上清中的hFIX蛋白量为(11.72±0.24)ng·106cell-1·24h-1,转染后48hhFIX蛋白量为(381.34±16.16)ng·106cell-1·24h-1。一期法结果示细胞上清中的hFIX有凝血活性,转染后48h达(45±0.85)%·106cell-1。结论肠上皮细胞SW480转染pcDNA3.1F9质粒后可表达有凝血活性的hFIX,肠上皮细胞有望成为血友病B基因治疗的靶细胞。     

碱性成纤维细胞生长因子与垂体腺瘤增殖及侵袭能力的关系

利用免疫组织化学方法检测51例人类垂体腺瘤标本的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)与增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。结果显示,在29例（56．9％）垂体腺瘤标本中检测到bFGF呈中等强度以上的阳性表达;bFGF表达水平与PCNA标记指数呈正相关,在无功能腺瘤中,bFGF的表达与肿瘤侵袭性相关,但在激素分泌性腺瘤中两者相关性不明显,提示bFGF可能参与了垂体腺瘤的增殖过程及部分腺瘤的侵袭过程。