细菌的五种鞭毛染色方法比较研究

目的比较细菌的五种鞭毛染色方法染色效果。方法用Ryu法、Ryu改良法、Blendon染色法、Fontana染色法、碱性复红法等五种不同鞭毛染色法对奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门菌、大肠埃希菌染色,参照West提出的评分方法打分。结果五种染色方法中,Blendon染色法效果最佳。鞭毛清晰,形态良好,很少脱落,背景杂质颗粒少见,背景底色浅,易于观察。其次为Ryu红法,最差为Fontana染色法。结论Blendon鞭毛染色法效果最好,值得临床推广使用。     

含结核分枝杆菌ESAT6和CFP10基因的重组腺病毒表达载体的构建

目的克隆结核分枝杆菌的ESAT-6和CFP-10基因,构建能同时表达两基因的重组腺病毒活载体,为研制能有效防治结核病的重组腺病毒活载体疫苗打下基础。方法首先利用PCR技术克隆结核分枝杆菌的ESAT-6和CFP-10基因,将两者通过IRES串连插入腺病毒转移载体中,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ESAT-6-IRES-CFP-10。该穿梭质粒转化含有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,经同源重组获得复制缺陷型重组腺病毒载体pAdeasy-1-pShuttle-CMV-ESAT-6-IRES-CFP-10。PacI酶切线性化该质粒,转染AD293细胞进行病毒包装。结果ESAT-6和CFP-10基因成功克隆,其序列与GenBank公布的一致。两者通过IRES串连插入腺病毒转移载体,获得的重组穿梭质粒经同源重组,成功获得复制缺陷型重组腺病毒质粒Adeasy-1-pShuttle-CMV-ESAT-6-IRES-CFP-10,转染该质粒的AD293细胞出现细胞病变效应。结论成功克隆了分枝杆菌的ESAT-6和CFP-10基因,构建了含IRES串连的ESAT-6和CFP-10基因的重组腺病毒,为重组腺病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。     

PCR法检测白血病患儿HCMV DNA的临床意义

收集31例白血病患儿晨尿，10例患儿EDTA抗凝血。对照组取自未患白血病且免疫功能正常的儿童，包括10例晨尿和12例EDTA抗凝血。用PCR法检测HCMVDNA。结果白血病患儿晨尿中检出2例阳性，对照组检出1例阳性，阳性检出率分别为6．5％和10％，两者之间无差异(0．75＞P＞0．5)。白血病患儿血液中，检出3例阳性，而对照组血液无1例检测为阳性，阳性检出率分别为30％和0％，两者之间有差异(0．025＜P＜0．05)。认为白血病患儿在急性期易出现HCMV活化现象，用PCR法检测HCMVDNA，可在临床表现出现前作出HCMV感染的诊断，但要注意区分活动性感染与潜伏性感染。     

牛分枝杆菌ESAT-6-CFP-10融合基因重组腺病毒载体的构建及表达

目的构建表达牛分枝杆菌的ESAT-6-CFP-10融合基因的重组腺病毒载体,为研制能有效防治牛结核病的重组腺病毒活载体疫苗打下基础。方法以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得ESAT-6和CFP-10两个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)将ESAT-6和CFP-10基因通过(G1y4Ser)3接头连接,得到融合基因。将融合基因T/A克隆后,亚克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV中,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ESAT-6-CFP-10,限制性内切酶消化、菌液PCR、序列分析验证无误后,PmeⅠ酶切,转化含有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183-AD-1感受态细胞,经同源重组获得复制缺陷型重组腺病毒载体pAd-CMV-ESAT-6-CFP-10。PacI酶切线性化的重组质粒pAd-CMV-ES-AT-6-CFP-10转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。PCR、Western blot检测包装病毒的融合基因及其表达情况。结果成功构建携带牛分枝杆菌的ESAT-6-CFP-10融合基因的重组腺病毒载体,包装病毒用PCR、Western blot检测到包装病毒的融合基因及其表达。结论本研究成功地构建携带牛分枝杆菌的ESAT-6-CFP-10融合基因的重组腺病毒,为下一步在动物体内进行免疫效果研究打下基础。     

医疗产品细胞毒性3种评价方法的比较

目的比较评价医疗产品细胞毒性的3种方法，即MTT法、活细胞计数法及形态观察法。方法用MTT法、活细胞计数法及形态观察法对19种医疗产品进行细胞毒性测试，并对样品毒性分级及作出合格与否的判断，比较这些方法之间的符合程度及在检测细胞毒性方面各自的优缺点。结果MTT法与活细胞计数法的毒性级别判断符合率为73．7％（14／19），判断样品合格与否，两者符合率为94．7％（18／19），15号样品MTT法毒性级别判为4级，但细胞形态观察法发现细胞形态正常，贴壁生长良好，结果与活细胞计数法一致。重复3次检测，仍出现这种现象。结论MTT法操作简便，人为误差小，更适于多种医疗产品的同时检测，但对于MTT检测不合格产品要结合活细胞计数法及形态观察法，作出综合判断。     

医疗卫生用品预处理对其细胞毒性评价的影响

目的研究医疗卫生用品的细胞毒性,了解样品预处理方式对其细胞毒性评价的影响.方法用活细胞计数法和形态观察法,选择不同的样品预处理方式,对9件医疗卫生用品进行细胞毒性测试,并对样品毒性分级,比较这些处理方式对其细胞毒性评价是否产生影响.结果湿布、有粉乳胶手套、骨水泥柄、医用胶、面膜不同预处理方式的细胞毒性评价存在显著性差异,其余样品不同处理方式间无差异.结论不同的样品预处理方式对其细胞毒性评价可能存在一定影响,视样品本身而定,应根据具体材料,选用恰当的处理方式或试验方法.     

小鼠IL-35基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的克隆小鼠白细胞介素-35（IL-35）基因并在大肠杆菌中表达和纯化。方法用RT-PCR方法从小鼠脾脏扩增出IL-35的两个亚基Ebi3和p35的成熟肽基因片段,采用重叠PCR法将Ebi3基因和p35基因通过（Gly4Ser）3接头连接,得到的融合基因片段先克隆于pMD19-T载体,再亚克隆到表达载体pET-30b（＋）,并转化大肠杆菌BL21（DE3）,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达,Western blot检测目的蛋白,用Ni螯合层析方法纯化表达产物。结果从小鼠脾细胞总RNA中扩增出Ebi3和p35的基因片段,重叠PCR法得到的融合基因经鉴定含预期序列;构建的重组表达载体pET-30b（＋）-IL-35在BL21（DE3）中经IPTG诱导后表达出约50kd的融合蛋白;West-ern blot检测结果显示,该融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应;经Ni螯合层析方法纯化获得单一蛋白条带。结论小鼠IL-35在大肠杆菌中表达并纯化,为进一步研究其功能及应用价值奠定了良好的基础。     

医学微生物学教学方法的探索与思考

医学微生物学是医学生必修的一门基础课程,教学内容繁杂,学科发展快,教师应始终贯彻以学生为本、教书育人的方针,优化教学内容,综合运用归纳总结、病例教学、提问以启发科研思维、以科研促教学等多种教学方法,并在教学中结合课程内容,见缝插针地引导学生培养健康向上的人生观、价值观,为社会培养出新型的具有综合素质的高级医学人才.     

酮康唑、克霉唑抗假丝酵母菌活性的研究

目的 通过对酮康唑、克霉唑进行体外抗真菌活性试验及对大鼠假丝酵母菌性阴道炎模型的抗真菌活性测定，为指导临床用药提供理论依据。方法微量稀释法测定酮康唑、克霉唑粉刺的最低抑菌浓度（MIC），用酮康唑、克霉唑泡腾片对大鼠假丝酵母菌性阴道炎模型治疗后真菌培养阴转率进行测定，并与对照组比较。结果不同剂量，不同治疗天数酮康唑粉剂、克霉唑粉剂对白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌的MIC值为2．4～9．7μg/mL，用酮康唑、克霉唑泡腾片对大鼠白假丝酵母菌性阴道炎模型治疗后，真菌培养阴转率与对照组比较，P值均小于0.05。结论白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌对酮康唑粉剂、克霉唑粉剂均敏感，不同剂量，不同治疗天数酮康唑与克霉唑泡腾片治疗大鼠白假丝酵母菌阴道炎真菌阴转率与无药对照组存在差异。     

微生物学与免疫学课程中免疫学的教学体会

微生物学与免疫学是药学类专业学生的基础课和必修课,该课程中免疫学教学存在课时少、内容抽象等问题.通过综合运用各种教学手段和方法,有效提高了学生的学习兴趣,培养了学生独立思考和解决实际问题的能力,激发了学生的学习动力.