癌胚抗原启动子控制基因靶向表达研究

目的 构建由癌胚抗原(CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的重组表达质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP.了解CEA启动子靶向驱动的含目的基因的重组质粒的效率.方法 构建重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP,以PCR,DNA测序及酶切进行鉴定.通过脂质体介导重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP体外分别转染A549细胞(CEA阳性)和16HBE(CEA阴性)细胞,进行绿色荧光蛋白检测分析基因表达的靶向性.结果 CMVE-pCEA-IRES-EGFP分别用VSP Ⅰ,VSP Ⅰ/Nhe Ⅰ酶切后电泳分别出现大小约405 bp,372 bp和4110 bp的片断,与预计各片断大小相符.以CMVE-pCEA-IRES-EGFP为模板PCR扩增得到CMV和CEA片段,分别连于T载体(pMD18-T)并测序,结果正确.嵌合启动子CMVE-pCEA能特异地驱动下游报告基因在CEA阳性肺癌细胞株绿色荧光表达阳性,而CEA阴性细胞株16HBE表达阴性.结论 成功构建了嵌合启动子CMVE-pCEA驱动的CMVE-pCEA-IRES-EGFP重组质粒,并能在转染的CEA阳性细胞株中表达,为靶向启动双基因表达载体构件提供了实验依据.     

葛根提取物对肝癌细胞增殖及细胞周期的作用

目的 :探讨中药葛根提取物的抗癌活性并试图建立一种筛选药物的方法。方法 :用MTT快速测定法及流式细胞仪分析法分析葛根提取物 (PR)对靶细胞人肝癌SMMC 772 1细胞的抗癌药效及细胞分裂周期各时象DNA变化。结果 :葛根提取物有比较强的抗癌活性 ,与阴性对照组相比差异非常显著 (P <0 .0 1) ,与丝裂霉素MMC联合用药抗癌活性显著增强 ,与单独用药组比差异非常显著 (P <0 .0 1)。流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象DNA变化显示药物作用后S期细胞明显减少 ,增殖指数 (PI)降低 ,并可诱导凋亡峰 (AP峰 )。结论 :提示葛根提取物具有一定抗癌活性 ,并为建立筛选抗癌中药的方法提供一条新途径。     

高龄患者植入心脏起搏器65例分析

目的 探讨高龄患者植入心脏起搏器的临床特点、起搏参数和手术并发症.方法 选择65例植入心脏起搏器的高龄(≥80岁)患者为高龄组;同时,随机选取65例植入心脏起搏器的老年(≥60岁)患者为老年组,分析两组患者临床症状、缓慢心律失常的类型、起搏模式的选择、起搏参数以及术中和术后并发症等.结果 植入心脏起搏器前心源性晕厥发生率高龄组22例高于老年组10例(33.8% vs 15.4%,P<0.05);高龄组并存2种心脏疾病者27例高于老年组12例(41.5% vs 18.5%,P<0.05),高龄组和老年组病窭综合征、房室传导阻滞的发生率差异无显著性(P>0.05),但高龄组合并分支阻滞20例多于老年组8例(30.8% vs 12.3%,P<0.05);两组术中测试的起搏参数、术中及术后并发症包括术中穿刺困难、气胸、严重心律失常、心跳骤停,术后囊袋血肿、破裂、切口感染难愈合、电极移位、阚值升高、膈神经刺激或腹肌刺激性收缩、皮肤压迫性坏死、感染性心内膜炎、血栓形成等差异无显著性(均P>0.05).结论 高龄患者发生缓慢心律失常时较常合并心源性晕厥,应积极植入心脏起搏器,而且植入起搏器的并发症并不增加.     

甲基化寡核苷酸灭活DKK3基因对肝癌细胞增殖的影响

目的 研究甲基化寡核苷酸灭活Dickkopf相关蛋白3(Dickkopf-related protein 3,DKK3)基因对HepG2肝癌细胞增殖的影响。 方法 采用甲基化特异性PCR法检测肝癌细胞DKK3基因启动子甲基化状态。将寡核苷酸(分别为MON组、UMON组、CON1组和CON2组)转染HepG2肝癌细胞,比较转染后DKK3基因启动子甲基化状态、细胞增殖和凋亡的差异。 结果 HepG2肝癌细胞DKK3基因启动子未检测到甲基化,Hep3B、SMMC-7721和HuH-7肝癌细胞DKK3基因启动子处于甲基化状态。MON可成功诱导其互补序列CG位点产生甲基化,而UMON、CON1和CON2寡核苷酸无法诱导甲基化。UMON组、CON1组和CON2组HepG2肝癌细胞在D0-D6吸光度、G₀/G₁期、S期、G₂/M期、增殖指数(proliferation index,PI)和凋亡率方面差异均无统计学意义(均P>0.05);MON组HepG2肝癌细胞G₀/G₁期比例和凋亡率均显著低于UMON组、CON1组和CON2组(均P<0.05),而D1-D6吸光度、S期、G₂/M期和PI均显著高于UMON组、CON1组和CON2组。 结论 甲基化寡核苷酸可成功诱导DKK3基因甲基化,导致HepG2肝癌细胞细胞增殖增加而凋亡下降。     

第二代三唑类抗真菌药物的研究进展

侵袭性真菌病的发病率和病死率逐年上升,新型抗真菌药物的研究和开发也越来越受到重视,尤其是三唑类抗真菌药物。本文综述国内外近期关于第二代三唑类抗真菌药物的研究进展,以期为未来临床真菌病的治疗及新药研发提供新的思路。     

埋藏式心脏复律除颤器在心脏性猝死一级预防中的作用

目的探讨埋藏式心脏复律除颤器（ICD）在心脏性猝死（SCD）一级预防中的作用。方法对35 例在2006~2009 年根据
2005年ACC/AHC指南植入ICD进行SCD一级预防的患者,进行平均2年的临床随访数据分析。结果（1）平均2年随访过程
中,共11例患者（31.43%）发生室性心律失常事件,室颤除颤16阵次、室速启动抗心动过速起搏（ATP）79阵次,无误放电,无一例
死亡;（2）室性心律失常事件,心肌致密化不全（NVM）发生率为100%、特发性室性心动过速（PVT）66.67%、Brugada 综合征
50%、肥厚型心肌病（HCM）25%和（DCM）16.67%;其中室颤PVT占87.5%（14 阵次）,DCM及Brugada 综合征各1 阵次;室速
PVT占82.28%（65阵次）、NVM 5阵次、HCM和Brugada综合征各4阵次和DCM患者1阵次,致心律失常右室心肌病未见室性
心律失常事件;（3）术中术后未见植入ICD相关并发症,术后均未出现恶性室性心律失常所致晕厥,生活质量明显改善。结论本
组SCD高危患者中,平均ICD 植入两年即在31.43%的患者中及时发现和纠正95 次的恶性室性心率失常事件,其中对预防
PVT、NVM和Brugada综合征的SCD最为明显,提示SCD高危人群中植入ICD进行一级预防有重要的临床价值。
     

P38丝裂原活化蛋白激酶短发夹RNA对H9C-2心肌细胞基因表达的影响

目的 探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的短发夹环RNA(shRNA)质粒对H9C-2心肌细胞增殖变化的影响并探讨其发生机制.方法 构建3种P38MAPK shRNA质粒并测序鉴定,将其转染入H9C-2心肌细胞中,应用RT-PCR和Western blotting检测心脏细胞P38MAPK mRNA和蛋白的表达.结果 P38MAPK shRNA质粒分布在心肌细胞的胞浆及细胞核中,与心肌细胞组比较,AngⅡ组和shRNA阴性组的P38MAPK mRNA和蛋白水平显著升高(P ＜0.01,P＜0.01);与AngⅡ组比较,shRNA1、shRNA2和shRNA3组的P38MAPK mRNA和蛋白水平明显降低(P ＜0.05,P＜0.05,P＜0.01).结论 P38MAPK shRNA质粒成功转染心肌细胞,P38MAPK shRNA3质粒能最有效地抑制心肌细胞P38MAPK的表达.     

中西医结合治疗儿童眼肌型重症肌无力76例

目的:探讨中西医结合治疗儿童眼肌型重症肌无力的临床疗效。方法:对照组75例采用强的松、吡啶斯的明片等综合治疗,治疗组76例在对照组基础上加服补中益气丸治疗。并随访观察1年以上。结果:治愈率治疗组100%,对照组98.67%,两组对比无显著性差异,复发率治疗组3.95%,对照组26.67%,两组对比,有显著性差异(P<0.01)。结论:中西医结合治疗儿童眼肌型重症肌无力,有很好的协同作用,具有疗效好、副作用和并发症少、复发率低等优点。     

额肌瓣悬吊术治疗儿童先天性上睑下垂的适宜的年龄探讨

目的 探讨额肌瓣悬吊术治疗儿童先天性上睑下垂的适宜年龄。方法 对39例（43眼）先天性上睑下垂额肌瓣悬吊术的临床资料进行分析。结果 1-3岁15例（16眼）,其中15眼矫正良好,1眼基本矫正;4-6岁16例（18眼）,其中16眼矫正良好,2眼基本矫正;7-12岁8例（9眼）,基本8眼矫正良好,1眼基本矫正。均无并发症发生。结论 重度先天性上睑下垂,只要全身状况良好,1岁以上即可手术。中度者学龄前手术适宜。轻度者可在12岁以上局麻下手术。     

先天性上斜肌麻痹手术治疗的年龄探讨

目的:探讨先天性上斜肌麻痹的早期手术治疗年龄。方法:回顾性总结我科7mo～7岁21例先天性上斜肌麻痹患者接受下斜肌部分切除术的手术效果。结果:本组7mo～7岁21例患儿垂直斜视及伴水平斜视和V型斜视术后均获矫正,20例代偿头位完全改善,1例部分改善,术后1wk内头位完全矫正率2岁以下为91%(10/11),2岁以上40%(4/10)。21例Bielschowsky歪头试验全部阴性,无1例并发症发生。结论:先天性上斜肌麻痹一经确诊,应及时手术。1岁内患儿有代偿头位,垂直斜视,且Bielschowsky歪头试验阳性,全身状况良好者,可即行手术矫正。