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目的分离鉴定铜绿假单胞菌噬菌体,并对其生物学特性进行研究。方法从居民生活用水下水道中分离出铜绿假单胞菌噬体,利用噬斑测定法纯化所分离的噬菌体,通过负染法电镜观察噬菌体形态及大小。观察并测定噬菌体一步生产曲线,提取噬菌体核酸并进行酶切电泳。结果利用21株铜绿假单胞菌为宿主菌,从下水道中分离出3株铜绿假单胞菌噬菌体,分别命名为PaP-c01、Pap-c02和Pap-c03。噬菌体Pap-c01能裂解6株铜绿假单胞菌,显示出较宽的噬菌谱,酶切电泳显示其基因组大小为32kb。生长曲线显示其感染宿主菌的潜伏期为30min,暴发时间为55min,裂解量为100。结论分离出的噬菌体具有较广的噬菌谱,潜伏期短,裂解量较大,为噬菌体作为生物制剂用于抗感染治疗打下了基础。 相似文献
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大肠埃希菌噬菌体的分离鉴定及其生物学特性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的通过分离鉴定大肠埃希菌噬菌体,研究其生物学特性。方法利用噬菌斑法从环境污水中分离和鉴定大肠埃希菌噬菌体,采用负染法电镜观察噬菌体的形态和大小;提取噬菌体的基因组并进行酶切电泳分析,测定噬菌体感染复数并观察其一步生长曲线。结果通过噬菌斑法分离出9株大肠埃希菌噬菌体。电镜显示,噬菌体头部呈立体对称,有一长尾。琼脂糖凝胶电泳显示,噬菌体基因组大小约30kb。生长曲线表明噬菌体感染宿主菌的潜伏期为23min,爆发时间为39min,裂解量为78。结论9株大肠埃希菌噬菌体中有6株具有较广的噬菌谱,潜伏期短,裂解量明显,为深入研究大肠埃希菌噬菌体的生物学特性及其功能提供了依据。 相似文献
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RNAi沉默STAT3基因对人前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 采用裸鼠前列腺癌模型模拟siRNA—STAT3基因治疗实验,观察siRNA—STAT3重组质粒的抗瘤疗效,Western blot法检测重组质粒对STAT3基因表达的影响,HE及Tunel染色方法观察肿瘤组织形态及细胞凋亡情况。结果 肿瘤接种后第49天重组质粒组肿瘤体积为(391±56)mm^3,盐水对照组为(1111±182)mm^3,空质粒对照组为(981±169)mm^3,与对照组相比,差异有统计学意义(P〈0.01);重组质粒抑制瘤体内STAT3及pTyr-STAT3基因表达率分别为77%及68%,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.01)。HE染色证实重组质粒组出现大片细胞核固缩、破碎等凋亡征象,Tunel染色显示癌组织出现大量细胞凋亡。结论 pSilencer1.0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤的生长,具有良好的应用前景。 相似文献
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目的:构建以柯萨奇病毒B4的1A和2A基因为靶基因并带有绿色荧光蛋白标志的可表达发夹结构的双链siRNA的表达载体pU6/double-siRNA/Neo/GFP/1A /2A。方法:选择柯萨奇病毒B4的1A和2A区基因21 bp为靶序列分别合成65 bp的互补片段并克隆到pSilencer2.1U6 Neo 和pGCsi-U6/Neo/GFP质粒中,经限制性内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳分离、回收DNA片段,及连接酶连接构建双siRNA表达质粒pU6/double-siRNA/Neo/GFP/1A/2A;将构建的载体转染Hela细胞后,荧光显微镜观察荧光的表达。结果:限制性内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳检测重组质粒pU6/double-siRNA/Neo/GFP/1A/2A,有正确的特异性片段,DNA测序也证明其具有正确序列;将该重组质粒转染入Hela细胞后,重组质粒构建成功并在真核细胞内表达GFP,表达时间可达15 d以上。结论:针对柯萨奇病毒B4的1A和2A基因的双siRNA表达载体pU6/double-siRNA/Neo/GFP/1A /2A构建成功,并可在真核细胞内持续表达15 d以上。 相似文献
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RNA干扰技术沉默STAT3对人前列腺癌细胞生长的抑制作用 总被引:12,自引:5,他引:7
目的: 探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达对人前列腺癌细胞PC3及LNCaP的生长抑制作用。 方法: 针对STAT3mRNA序列设计合成 3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pSilencer1. 0 U6 siRNA STAT3重组质粒,转染PC3及LNCaP细胞;采用Western印迹、Northern印迹等技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响;用MTT法观察重组质粒对PC3及LNCaP细胞体外生长抑制作用;用流式细胞术(FCM)及吖啶橙染色检测重组质粒诱导细胞凋亡。 结果: 成功构建pSilencer1. 0 U6 siRNA STAT3重组质粒,并成功转染PC3及LNCaP细胞;Western印迹,Northern印迹结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制STAT3基因表达,抑制率为60% ~75%;MTT及FCM结果证明上述重组质粒可显著抑制PC3及LNCaP细胞的体外生长并诱导PC3细胞凋亡。结论: pSilencer1. 0 U6 siRNA STAT3可抑制STAT3在人前列腺癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞的生长,促进其凋亡。 相似文献
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目的构建遗传稳定性良好的沙门氏菌体内诱导型表达载体。方法以克隆载体pGB2为基础,将沙门氏菌厌氧启动子PnirB和EGFP基因串联,并在其多克隆位点MCS下游引入rrnbT1T2转录终止序列,构建沙门氏菌低拷贝体内诱导型表达载体pGnirB-EGFP-rrnb,电转化入鼠伤寒沙门氏菌phoP/phoQ株,对质粒的稳定性及蛋白表达情况进行检测。结果含有低拷贝重组质粒的沙门氏菌在缺失抗生素选择压力下盲传100代后质粒稳定性高于95%,在厌氧静置72 h培养后激光共聚焦显微镜下可观察到明显绿色荧光。结论高度稳定的沙门氏菌体内诱导型表达载体构建成功,为研制以鼠伤寒沙门氏菌为活载体的新型口服疫苗奠定了基础。 相似文献
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利用siRNA技术沉默膀胱肿瘤STAT3基因及促进凋亡的机制探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
目的沉默人膀胱移行细胞癌细胞T24的STAT3基因,并探讨其对T24细胞生长抑制及诱导凋亡的作用机制。方法利用含有STAT3 mRNA的siRNA的pSilencer 3.1-siRNA-STAT3重组质粒转染T24细胞;采用Western印迹、RT-PCR等技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响;用WTT法观察重组质粒对T24细胞的体外生长抑制作用;用流式细胞术(FCM)及吖啶橙染色检测重组质粒的诱导凋亡作用。结果重组质粒成功转染T24细胞;Western印迹、RT-PCR证实重组质粒在蛋白及mRNA水平都显著抑制STAT3基因的表达水平,抑制率为59%~72%;MTT及FCM证实重组质粒可显著抑制T24细胞的体外生长并诱导细胞凋亡,抑制率及凋亡率分别为53%和17.3%。结论pSilencer 3.1-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3在人膀胱肿瘤细胞的表达,抑制肿瘤细胞的生长,促进其凋亡。 相似文献
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目的:以人减毒沙门氏菌为基因运载体,探讨其携带p53、siRNA-survivin及其共表达质粒p53/siRNA-survivin对肿瘤的靶向性及抗人前列腺癌效应,方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,分别将已构建的重组表达质粒siRNA-scramble,p53,siRNA-survivin及共表达质粒p53/siRNA-survivin转化到减毒人伤寒沙门菌Ty21a,制备成对应重组减毒沙门菌,通过灌胃及瘤内注射到前列腺癌荷瘤裸鼠体内,观察成瘤时间及瘤块大小;以携有绿色荧光蛋白siRNA-survivin的重组茵作为报告基因,流式细胞术检测其在肝、脾、肿瘤组织中靶向分布及基因呈递作用;应用RT-PCR,Western blot,及免疫组织化学染色方法检测治疗后肿瘤组织p53和Survivin基因及蛋白表达。结果:各治疗组均较对照组肿瘤生长缓慢,肿瘤体积小,共表达质粒组与单独基因治疗组比较,肿瘤体积明显缩小,抑瘤率高;荷瘤裸鼠肿瘤组织可测及survivin mRNA表达下降,p53基因表达增强,p53相关基因GRIM-19 mRNA和蛋白表达增强;FCM检测结果发现,减毒人沙门氏菌可在肝、脾及肿瘤组织中存活及表达,但以肿瘤中绿色荧光聚集明显且维持时间较长,其他脏器仅见极少的绿色荧光,结论:人减毒沙门氏菌可作为外源基因载体携带重组质粒,对前列腺癌移植瘤有明显的靶向性,其靶向介导的p53,siRNA-survivin及其表达基因p53/siRNA-survivin,对前列腺癌荷瘤裸鼠有治疗作用,共表达基因较单基因治疗效果好,具有显著的协同作用。 相似文献