荧光定量RT-PCR检测沙门氏菌方法的建立

目的建立沙门氏菌实时荧光定量PCR的快速检测方法 ,探讨该方法的可行性和应用价值。方法根据沙门氏菌fimY基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于沙门氏菌检测的定量标准品,建立实时荧光定量PCR检测沙门氏菌的方法。结果成功构建了沙门氏菌重组质粒标准品和沙门氏菌实时荧光定量PCR方法 ;通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性、敏感性、稳定性和重复性;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论沙门氏菌实时荧光定量PCR检测方法的建立,为食源性沙门氏菌污染的快速检测提供依据,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。     

免疫磁珠与荧光定量PCR联合检测乳制品中阪崎肠杆菌的实验研究

[目的]建立一种免疫磁珠吸附-荧光定量PCR(IMB-FPCR)快速检测阪崎肠杆菌的方法,探讨在乳制品污染监测及食物中毒快速诊断中的应用。[方法]根据阪崎肠杆菌rpsU-dnaG基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于金黄色色葡萄球菌检测的定量标准品,建立阪崎肠杆菌IMB-FPCR检测方法。[结果]成功构建了阪崎肠杆菌重组质粒标准品和阪崎肠杆菌IMB-FPCR方法。阪崎肠杆菌的免疫磁珠吸附试验显示磁珠对奶粉中的阪崎肠杆菌吸附率达77.7%。通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性,最低检测限为10cfu/ml的菌细胞,并具有良好的稳定性和重复性。整个检测仅需时1d。[结论]IMB-FPCR简便快速、灵敏度高及特异性强,为准确检测乳制品中阪崎肠杆菌提供了一个新的途径,可广泛应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。