淋球菌肽聚糖乙酰化对大肠杆菌溶解性转糖酶A酶切作用的影响

背景:有研究表明大肠杆菌(E.coil)肽聚糖乙酰化抑制溶解性转糖酶的酶切活性,但对淋球菌胞壁质乙酰化对该类酶的影响未见报道.目的:观察淋球菌的肽聚糖乙酰化对革兰阴性菌溶解性转糖酶家族二的酶切效果的影响.方法:运用同源重组方法敲除淋球菌的肽聚糖乙酰化基因A和B(△pacAB),制备3H标记的野生株和突变株的肽聚糖.应用分子克隆和蛋白表达纯化技术获得溶解性转糖酶A,体外测定溶解性转糖酶A对淋球菌和突变株(△pacAB)的肽聚糖酶切效果和最适酶切温度.结果与结论:溶解性转糖酶A经克隆、表达和纯化得到浓度为26.12 g/mL蛋白;氚代葡糖胺标记并纯化得到氚代淋球菌肽聚糖多聚体;溶解性转糖酶A对40%乙酰化的淋球菌FA19肽聚糖酶切效果仅为9.71%,但对去乙酰化的突变株肽聚肽的酶切效果达93.45%;溶解性转糖酶对淋球菌肽聚糖酶的最佳酶反应温度为30℃.结果提示,淋球菌的肽聚糖乙酰化抑制溶解性转糖酶蛋白的切割活性,淋球菌可能通过胞壁酸乙酰化抑制溶解性转糖酶A引起的自溶的发生.     

淋球菌肽聚糖乙酰化对大肠杆菌溶解性转糖酶A酶切作用的影响**☆

背景：有研究表明大肠杆菌(E.coli)肽聚糖乙酰化抑制溶解性转糖酶的酶切活性,但对淋球菌胞壁质乙酰化对该类酶的影响未见有报道。 目的：观察淋球菌的肽聚糖乙酰化对革兰阴性菌溶解性转糖酶家族二的酶切效果的影响。 方法：运用同源重组方法敲除淋球菌的肽聚糖乙酰化基因A和B(∆pacAB),制备3H标记的野生株和突变株的肽聚糖。应用分子克隆和蛋白表达纯化技术获得大肠杆菌溶解性转糖酶A,体外测定溶解性转糖酶A对淋球菌和突变株(∆pacAB)的肽聚糖酶切效果和最适酶切温度。 结果与结论：溶解性转糖酶A经克隆、表达和纯化得到浓度为26.12 g/mL蛋白;氚代葡糖胺标记并纯化得到氚代淋球菌肽聚糖多聚体;溶解性转糖酶A对40%乙酰化的淋球菌FA19肽聚糖酶切效果仅为9.71%,但对去乙酰化的突变株肽聚肽的酶切效果达93.45%;溶解性转糖酶对淋球菌肽聚糖酶的最佳酶反应温度为30 ℃。结果提示,淋球菌的肽聚糖乙酰化抑制溶解性转糖酶蛋白的切割活性,淋球菌可能通过胞壁酸乙酰化抑制溶解性转糖酶A引起的自溶的发生。 关键词：淋球菌;肽聚糖;肽聚糖乙酰化基因;溶解性转糖酶A;组织构建     

淋球菌溶解性转糖酶C体内功能的研究

目的研究淋球菌溶解性转糖酶C（LtgC）的体内活性和功能,及其酸催化活性位点（Asp405）。寻找新的抗淋球菌药物作用靶点。方法利用分子克隆和同源重组技术,将淋球菌体内lteC敲除,并将潜在活性位点的405位的天冬氨酸突变为甘氨酸,对细胞形态和生长特性进行观察和比对。结果LtgC影响淋球菌的生长和分裂,缺失突变株细胞表面粗糙、出现褶皱．405位天冬氨酸突变株有相同表型,两株突变株细胞均生长缓慢：结论啪影响淋球菌表面肽聚糖的切割和分裂,405位天冬氨酸作为酸性催化的活性中心,提供质子,帮助肤聚糖发挥酶切作用,因此,溶解性转糖酶C是良好的药物作用靶位点。     

中性粒细胞杀灭病原体的新途径:胞外诱捕网

中性粒细胞是天然免疫系统中到达感染部位并清除微生物的第一道免疫防线的主要成员之一。已证实中性粒细胞存在3种杀灭微生物的途径:吞噬清除病原体、分泌抗微生物蛋白颗粒和新近发现的中性粒细胞诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)。NETs由解聚的染色体网状结构和镶嵌其中的抗微生物颗粒蛋白组成,绑定并杀灭多种微生物,包括细菌、真菌、寄生虫和病毒。中性粒细胞通过释放DNA网状结构,形成抗微生物感染的物理屏障和支架结构,限制病原的活动范围,增强抗微生物蛋白的协同作用,并减少对宿主的组织损伤。     

淋球菌溶解性转糖酶C体内功能的研究

目的研究淋球菌溶解性转糖酶C(LtgC)的体内活性和功能,及其酸催化活性位点(Asp405),寻找新的抗淋球菌药物作用靶点。方法利用分子克隆和同源重组技术,将淋球菌体内ltgC敲除,并将潜在活性位点的405位的天冬氨酸突变为甘氨酸,对细胞形态和生长特性进行观察和比对。结果 LtgC影响淋球菌的生长和分裂,缺失突变株细胞表面粗糙、出现褶皱,405位天冬氨酸突变株有相同表型,两株突变株细胞均生长缓慢。结论 ltgC影响淋球菌表面肽聚糖的切割和分裂,405位天冬氨酸作为酸性催化的活性中心,提供质子,帮助肽聚糖发挥酶切作用,因此,溶解性转糖酶C是良好的药物作用靶位点。