非基因整合建立人诱导多能性干细胞方法的优化研究

诱导多能性干细胞（iPSC）技术具有临床应用前景,但iPSC的遗传稳定性和成瘤性阻碍了其可能的临床应用。非整合质粒（Episomal）方法无外源基因整合到宿主基因组上并且方法简单,适宜推广,是目前保证iPSC遗传安全性的最佳方案之一,但其诱导效率偏低,严重阻碍了其应用。本研究旨在优化Episomal方法,将脐血单个核细胞（CBMNC）重编程为诱导多能性干细胞（iPSC）,建立无基因整合的iPSC的高效生成技术体系,为以后建立疾病iPSC奠定基础。利用CBMNC,通过比较不同氧含量,诱导质粒,MNC培养方法和预刺激时间等条件对Episo—mal方法进行优化。结果表明：CBMNC采用红系培养液,培养8d,使用启动子为sFFV（spleen focus forming virus）的Episomal载体,在低氧（3％）条件下诱导,CBMNC重编程效率最高,可达到0．12％。通过分析最佳条件下供体细胞成分发现,表型为CD36＋CD71＋CD235alow的有核红细胞是重编程最主要的供体细胞来源。结论：本研究成功建立并优化出一种可推广的高效安全的,可以用于临床应用研究的iPSC诱导技术。     

血小板生成素在体内造血调控中的作用

血小板生成素(TPO)是调控巨核细胞造血和血小板生成的细胞因子,在早期造血调控中也有重要作用,它是酪氨酸激酶c-mpl受体的配体。本文综述了TPO和体内注射治疗血小板减少症、基cDNA过度表达或基因敲出的后果、对各系细胞的作用以及血清中的TPO浓度与血小板和核细胞计数的关系等的最新进展。     

用大孔明胶微载体培养Vero细胞

以明胶为原料，用悬浮成球、甲苯制孔的方法制备大孔明胶微载体。考察了表面活性剂及其配比、油水比、明胶浓度、制备方式和表面修饰等对载体性能的影响。优化了制备大孔明胶微载体的条件，制得了直径为１００－３００μｍ，孔径为１０－３０μｍ的大孔明胶微载体。     

FL在体内外造血调控中的作用

Flt-3配体(FL)是一种作用于早期造血细胞的细胞因子,它是酪氨酸激酶flt-3/flk-2受体的配体。本文综述了FL在外周血干细胞动员、体内外树突状细胞扩增、癌症免疫治疗以及造血细胞体外培养中应用的最新进展。     

大孔明胶微载体的制备

以明胶为原料，用悬浮成球、甲苯制孔的方法制备大孔明胶微载体。考察了表面活性剂及其配比、油水比、明胶浓度、制备方式和表面修饰等对载体性能的影响。优化了制备大孔明胶微载体的条件，制得了直径为１００－３００μｍ，孔径为１０－３０μｍ的大孔明胶微载体。     

影响脐血造血细胞体外培养与检测的因素

考察了分离方法、血浆（血清）、渗透压、细胞因子的保存等因素对脐血造血细胞体外培养和检测的影响。结果表明,用明胶沉降加密度梯度离心分离两步法分离比传统方法能分离到更多的单个核细胞;混合脐血血浆比胎牛血清更能支持造血细胞的生长;高渗透压对集落形成有一定影响,而低渗透压对集落形成更为有害;在３７℃下保存细胞因子,其生物活性下降最快,－３０℃冷冻保藏较好地保持其活性,解冻次数对生物活性影响不显著。     

血小板生成素在体内造血调控中的作用

本文综述了ＴＰＯ在体内注射治疗血小板减少症，其ｃＤＮＡ过度表达或基因敲出的后果，对各系细胞的作用以及血清中的ＴＰＯ浓度与血小板和巨核细胞计数的关系等的最新进展。     

血友病A基因治疗的研究进展

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SCF和IL—3对脐血造血细胞长期液体培养的影响

考察了干细胞因子（ＳＣＦ）和白介素３（ＩＬ－３）的不同浓度（５～１００ｍｇ／Ｌ）组合对不同接种密度（分别为３×１０５、６×１０５、１０×１０５ｃｅｌｓ／ｍＬ）的脐血（ＣＢ）细胞扩增和分化的影响。在５种组合下,ＣＦＵ－ＧＭ的扩增倍数都是在ＣＢ单个核细胞培养１２ｄ后达到最高（（１６．４３±２．０８）～（３７．０２±４．６９）,平均为（２５．７５±３．２６））,各组合之间相差较小;而细胞总数的扩增倍数在培养２４ｄ后达到最高（（１４．３８±２．７２）～（３５５．２６±３５．５３）倍,平均为（１０３．４５±３８．７５））,各组合之间相差很大。结果表明,在静态细胞培养过程中细胞密度较高,不利于ＣＦＵ－ＧＭ和总细胞的扩增,如保持在较低细胞密度有利于总细胞数的扩增;细胞因子的浓度对ＣＦＵ－ＧＭ的峰值影响不大,但低浓度能使总细胞数的扩增明显减少。     

Csub、BNP对急性心肌梗死患者PCI术后主要不良心血管事件的预测价值

目的 探讨血清ATP合酶C亚基（Csub）、脑钠肽（BNP）对急性心肌梗死（AMI）患者经皮冠状动脉介入（PCI）术后主要不良心血管事件（MACE）的预测价值。方法 选取2019年5月至2020年12月在玉环市人民医院行急诊PCI的59例AMI患者为研究对象,术后1年内发生MACE 15例（MACE组）,未发生MACE 44例（无MACE组）。比较有、无MACE患者临床资料,分析PCI术后发生MACE的影响因素,同时采用ROC曲线分析这些影响因素对PCI术后发生MACE的预测效能。结果 MACE组年龄、血清BNP水平均明显大于无MACE组（均P<0.05）;两组患者在性别、发病至就诊时间、左心室射血分数、呼气末二氧化碳、高血压、糖尿病、ST段抬高心肌梗死、血栓抽吸、Csub、肌钙蛋白T、D-二聚体、血肌酐、中性粒细胞与淋巴细胞计数比值、Gensini评分、冠状动脉植入支架总长度等方面比较,差异均无统计学意义（均P>0.05）。将上述P<0.05的2个因素（年龄、BNP）以及P值接近于0.05的2个因素（Csub、冠状动脉植入支架总长度）纳入Cox多因素回归分析,结果显...