分枝杆菌菌种鉴定方法及其进展

分枝杆菌及其所致疾病的基础研究、预防和治疗中,菌种鉴定具有十分重要的意义。随着分子生物学诊断技术的不断进步,分枝杆菌菌种鉴定方法得到了很快的发展。本文从细菌学、生化反应、免疫学、分子生物学等技术对分枝杆菌菌种鉴定及进展做一综述。     

509株结核分枝杆菌分离株药敏试验结果分析

目的探讨初治与复治病人结核分枝杆菌对五种抗结核药物的耐药性差异。方法将初生长两周后的培养菌落以含0.5%吐温-80的灭菌生理盐水配成10-2mg/ml的菌悬液,0.1ml接种于各含药培养基斜面,同时接种不含药培养基做对照。结果509株结核分枝杆菌总耐药率为44.4%,其中319株来自初治病人,耐药菌株90株,耐药率28.21%,190株来自复治病人,耐药菌株136株,耐药率71.58%。结论复治病人结核分枝杆菌耐药率显著高于初治病人结核分枝杆菌耐药率。经统计学分析,P<0.001。     

探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值

目的探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白desA抗原。结果 139例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为84.1%;64例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率7.81%,29例健康对照者均为阴性。特异性为92.19%。结论检测血清中结核杆菌分泌蛋白desA抗原对诊断肺结核病有较高的应用价值。     

菌阴肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变的检测

目的 应用套式PCR-DNA测序方法直接检测菌阴肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变,以期建立一种判定菌阴肺结核患者是否对利福平有无耐药性的方法.方法 采用套式PCR-DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况.同份痰标本同时做涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 112例活动性肺结核患者痰标本39例为菌阴(涂阴培阴),39例菌阴痰中套式PCR扩增18例呈阳性,产物DNA测序2例有rpoB基因突变,位点为第526发生了CAC→GAC突变和第531发生了TCG→TTG突变.20例非结核性肺部疾病患者标本套式PCR扩增均为阴性,特异性100%.结论 套式PCR-DNA测序可望为直接检测菌阴肺结核患者临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法.     

噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究

目的评价噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌对诊断结核性胸膜炎的临床应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对73例结核性胸膜炎患者．20例非结核性胸膜炎患者胸水中的结核分枝杆菌进行检测．同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果73例结核性胸膜炎胸水,噬菌体生物扩增法阳性率为49．3％（36／73）、涂片抗酸染色阳性率为2.7％（2/73）、罗氏培养阳性率为4．1％（3／73）。20例非结核性胸膜炎。噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断结核性胸膜炎的一种好方法．     

噬菌体生物扩增法对结核病临床诊断的意义

目的探讨噬菌体生物扩增法技术检测临床标本对结核病临床诊断的应用价值。方法采用噬菌体生物扩增法技术对86例活动性肺结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液,共计189份临床标本进行检测;对非结核病患者痰标本10例、胸水5例、灌洗液5例共计20份标本进行检测。同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果86例活动性结核患者痰标本、73例结核性胸膜炎患者胸水、30例肺结核患者肺泡灌洗液噬菌体生物扩增法检测阳性率分别为53．49％（46／86）、49．32％（36／73）、60．00％（18／30）;涂片抗酸染色阳性率分别为24．42％（21／86）、2．74％（2／73）、20．00％（6／30）;罗氏培养阳性率分别为44．19％（38／861、4．11％（3／73）、36．67％（11／30）。20份非结核患者标本,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性。结论噬菌体生物扩增法检测结核病标本的阳性率高于涂片法和罗氏培养,该方法敏感性高、特异性强、操作简便。对结核病临床诊断有较高的应用价值。     

噬菌体生物扩增法检测结核性胸膜炎患者胸水临床应用研究

目的 评价噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌对诊断结核性胸膜炎的临床应用价值.方法 采用噬菌体生物扩增法技术对73例结核性胸膜炎患者,20例非结核性胸膜炎患者胸水中的结核分枝杆菌进行检测.同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 73例结核性胸膜炎胸水.噬菌体生物扩增法阳性率为49.3%(36/73)、涂片抗酸染色阳性率为2.7%(2/731、罗氏培养阳性率为4.1%(3/73).20例非结核性胸膜炎,噬菌体生物扩增法、涂片抗酸染色、罗氏培养都未检出阳性.结论 噬菌体生物扩增法检测胸水中结核分枝杆菌只需2天时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断结核性胸膜炎的一种好方法 .     

探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值

目的 探讨检测结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值.方法 应用酶联免疫吸附试验检测血清中的结核杆菌分泌蛋白desA抗原.结果 139例活动性肺结核患者血清结核抗原的阳性检出率为84.1%:64.例非结核性肺部疾病组结核抗原阳性率7.81%,29例健康对照者均为阴性.特异性为92.19%.结论 检测血清中结核杆菌分泌蛋白desA抗原对诊断肺结核病有较高的应用价值.     

PCR反向点杂交技术快速鉴定BALF中分枝杆菌菌种的应用研究

目的探讨PCR-反向点杂交技术(PCR-RDBHA)快速鉴定支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid BALF)标本中分枝杆菌菌种的临床应用价值。方法对临床306例活动性肺结核患者、疑似非结核分枝杆菌感染肺病患者BALF标本采用PCR-反向点杂交技术和传统的改良罗氏培养法进行分枝杆菌菌种鉴定。结果 306例BALF标本PCR反向点杂交技术检测出分枝杆菌127例,阳性率为41.5%(127/306),其中结核分枝杆菌复合群(MTC)108例,占分枝杆菌的85.0%(108/127),非结核分枝杆菌(NTM)19例,占分枝杆菌的15.0%(19/127)。NTM中,6例脓肿分枝杆菌,10例胞内分枝杆菌,2例戈登分枝杆菌,1例瘰疬分枝杆菌;传统的改良罗氏培养法检测出分枝杆菌101例,阳性率33.0%(101/306),经菌种的初步鉴定,其中MTC89例,占分枝杆菌的88.1%(89/101),NTM12例,占分枝杆的11.9%(12/101)。结论 PCR反向点杂交技术能够快速鉴定BALF中分枝杆菌菌种,该方法简便、结果准确,具有良好的临床应用价值。     

联合检测CEA、ADA、LDH在鉴别胸腔积液性质上的临床价值

目的探讨结核性和癌性胸腔积液的实验室鉴别诊断。方法将住院患者新鲜抽取的胸腔积液离心沉淀后取上清液分别采用磁酶免法、酶速率法、速率法测定其CEA、ADA、LDH的含量。同法检测其血清CEA、ADA、LDH含量。结果254例胸腔积液中,188例结核性胸腔积液胸水CEA、LDH、ADA与66例癌性胸腔积液比较差异有显著性。结核性胸腔积液患者胸水CEA含量显著低于癌性胸腔积液（P〈0．001）,ADA、LDH含量显著高于癌性胸腔积液（P〈0．001,P〈0．01）;结核性胸腔积液患者胸水LDH、ADA与血清LDH、ADA的比值显著高于癌性胸腔积液患者（P〈0．01）,而胸水CEA与血清CEA的比值则显著低于癌性胸腔积液患者（P〈0．01）。结论癌性胸腔积液的CEA、ADA、LDH的结果与结核性胸腔积液CEA、ADA、LDH的结果差异显著,可通过联合检测胸腔积液中CEA、ADA、LDH辅助判断胸腔积液的性质。