骨桥蛋白通过内质网应激诱导C2C12肌细胞胰岛素抵抗

目的:探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对C2C12肌细胞胰岛素抵抗的影响及其可能的机制。方法:低血清培养辅以胰岛素处理诱导C2C12成肌细胞分化为C2C12肌细胞,蛋白免疫印迹检测蛋白质的表达,离心法分离细胞膜,葡萄糖摄取试剂盒定量葡萄糖摄取。结果:(1)骨桥蛋白以剂量依赖和时间依赖方式抑制胰岛素刺激的蛋白激酶B(Akt)的磷酸化,并抑制胰岛素所致的葡萄糖转运体4(Glut4)膜位移和葡萄糖的摄取;而特异性的抗OPN受体CD44抗体预处理可逆转上述变化。(2)OPN可诱导C2C12肌细胞的内质网应激,并促进c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化。(3)内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)可降低OPN所增加的JNK磷酸化,恢复胰岛素刺激所致的Glut4的膜位移以及葡萄糖摄取。结论:骨桥蛋白通过诱导C2C12肌细胞内质网应激导致胰岛素抵抗。本研究为揭示骨桥蛋白在胰岛素抵抗和糖尿病中的作用提供了新的实验依据和理论解释。     

浅谈医学本科生如何参加科研实验

大学教育在国家创新人才培养体系中占有十分重要的位置，实施本科生科学研究是培养创新人才的一项有利尝试和重要措施。笔者参加了《武汉大学2006年大学生科研立项》项目申请和实验研究的全过程，通过参加实验的感受和体会，结合实际分析医学本科生参与科研实验的重要性和优越性，提出参与活动中应遵循的基本原则。     

黄芪多糖对2型糖尿病大鼠肝脏CHOP表达的影响

目的:探讨黄芪多糖(APS)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏内质网应激标志蛋白CHOP表达的影响。方法:雄性SPF级SD大鼠44只,随机分为:空白对照组(C组)、单纯APS灌胃对照组(CA组)、T2DM模型组(T2DM组)、T2DM+APS治疗组(T2DM+APS组)。定期监测各组动物体重(BW)、随机血糖(随机BG)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(Fins)水平、口服葡萄糖耐量试验(OGTT),计算胰岛素抵抗指数(HO-MA-IR);用Westernblot法检测各组动物肝组织CHOP的表达水平。结果:T2DM组大鼠BW、随机BG、FBG、Fins、HOMA-IR均显著高于C组,同时伴OGTT异常(P0.01);T2DM+APS组大鼠BW、随机BG、FBG、HOMA-IR较T2DM组显著下降(P0.01),OGTT各时点BG较T2DM组均显著降低(P0.01);肝组织CHOP表达水平在T2DM组显著高于C组(P0.01),T2DM+APS组表达水平明显低于T2DM组(P0.05)。C组和CA组比较各项指标无显著性差异。结论:APS可显著降低T2DM大鼠血糖和改善胰岛素抵抗,其机制可能与APS减弱T2DM大鼠肝组织内质网应激蛋白CHOP表达有关。     

下肢动脉血栓的机械性祛栓结合药物溶栓治疗

目的：研究OASIS导管流变溶栓和Amplatz血栓消融导管（Amplatz Thrombectomy Device，ATD）浸软溶栓结合基因重组型人组织纤溶酶原激活剂（recombinant human tissue-type plasminogen activator, rt-PA）或尿激酶（UK）药物溶栓治疗下肢动脉血栓形成的安全性和临床疗效。材料与方法：对18例下肢动脉血栓形成的患者实施急诊OASIS导管流变溶栓（12例）或ATD导管浸软溶栓（6例）术，对远端小血管残留血栓给予rt-PA溶栓2例，UK溶栓7例，对4例5处髂股动脉狭窄段采取经皮球囊扩张（Percutaneous TransLuminal Angioplasty, PTA）或支架成形辅助治疗。其中髂动脉3例，股动脉13例，腘动脉1例，股动脉、腘动脉、胫前胫后动脉及足部动脉广泛血栓形成1例。结果：18例机械性祛栓技术实施成功率100%，其中14例术中处理后立即完全再通；4例术后留置导管继续溶栓3～5天达到完全再通。其中4例5处动脉狭窄段采用球囊扩张或置入支架后狭窄段的血管腔平均复通率95%，临床表现好转率100%。全部病例均经DSA、B超及临床随访１～45个月，动脉均保持通畅。无血管穿孔并发症和截肢病例，溶栓过程中出现消化道出血1例。结论：采用OASIS导管和ATD导管机械性祛栓结合rt-PA或UK药物溶栓治疗能够快速地祛除下肢动脉血栓，安全性高，临床疗效显著。用PTA和支架辅助治疗可有效地解除动脉狭窄，防止血栓再形成，避免截肢。     

泛素蛋白酶系统通过稳定PPARγ调节脂肪细胞分化

目的:探讨泛素蛋白酶系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)在体外脂肪细胞分化中的作用。方法:常规方法诱导前脂肪细胞分化为脂肪细胞,Western blot检测蛋白质表达,免疫共沉淀检查蛋白质间结合,油红O染色检测脂肪细胞中的脂质,RT-PCR检测mRNA表达。结果:UPS抑制剂硼替佐米可抑制3T3-L1前脂肪细胞分化为脂肪细胞,表现为细胞内脂质含量降低以及脂肪细胞标志蛋白mRNA表达的降低。蛋白激酶G激动剂西地那非可激活UPS,并增强脂肪细胞的分化。抑制UPS可降低热休克蛋白90(HSP90)和过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)间的结合;同时降低细胞可溶性组分中HSP90和PPARγ的表达,增强其在不可溶性组分中的表达。HSP90特异性的N末端抑制剂格尔德霉素可抑制西地那非促进的PPARγ表达和脂肪细胞的分化。结论:泛素蛋白酶系统通过HSP90调节PPARγ的表达,从而影响脂肪细胞的分化。     

脂联素通过激活PP2A减轻H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞损伤及tau蛋白过度磷酸化

目的:观察脂联素(adiponectin)对H2O2诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞活力及tau蛋白磷酸化的影响并探讨其作用机制。方法:采用MTT法并观察细胞形态,检测脂联素对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞活力损伤的影响;应用Western blotting观察脂联素对tau蛋白磷酸化及蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)和糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)活性的影响。结果:脂联素减轻了H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤(P0.01)。脂联素上调了H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的PP2A活性,明显减轻此时tau的异常过度磷酸化(P0.01)。PP2A抑制剂冈田酸阻断了脂联素的保护作用(P0.01)。脂联素同时使H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的GSK-3β磷酸化水平上升(P0.01)。结论:脂联素减轻H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤及tau蛋白异常过度磷酸化,其机制可能与激活PP2A并抑制GSK-3β信号途径有关。     

全反式维甲酸通过DOK1/PPARγ信号通路抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及可能机制。方法:MCF-7细胞培养于含10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素的DMEM培养液,蛋白免疫印迹检测蛋白质的表达,MTT法和溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法测定细胞增殖,TUNEL法测定细胞凋亡,携带目标基因shRNA的慢病毒用于沉默目标基因,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性采用商品化的试剂盒测定。结果:ATRA处理可抑制MCF-7细胞的增殖,促进其凋亡;同时,ATRA以时间依赖方式刺激停靠蛋白1(DOK1)的表达。沉默DOK1可降低ATRA对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。此外,DOK1基因沉默可抑制PPARγ的表达和活性。而PPARγ选择性抑制剂GW9662可减轻ATRA对MCF-7细胞增殖的抑制和对细胞凋亡的促进作用。结论:ATRA通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡而抑制MCF-7细胞的生存,这一作用经DOK1激活的PPARγ介导。     

PKA介导的血管扩张刺激磷蛋白磷酸化对细胞迁移的影响及其调控机制

目的论证不同程度和不同形式的剪切应力的改变可以引起不同程度的动脉粥样硬化病变以及阐明体内异常剪切应力对血管壁Caveolin-1和VEGFR-2表达的调节作用。方法给予26只新西兰兔右颈总动脉硅胶管套环后雌雄均等分为2组,对照组(给予正常饮食)和高脂组(2%的高胆固醇饮食),9周后处死动物,0周和第9周收集血清测量总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和甘油三酯;采集标本,苏丹Ⅳ和HE染色观察颈总动脉动脉粥样硬化斑块面积;RT-PCR、....     

花色苷对氧化型低密度脂蛋白诱导Raw264.7细胞损伤基因表达谱的影响

目的通过原代培养SD大鼠的乳鼠心肌细胞建立过氧化氢心肌细胞氧应激损伤模型,观察硫化氢对氧应激所致心肌细胞细胞损伤的影响,并以PI3K/Akt信号传导通路为研究对象探讨其可能作用机制。方法采用酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养的心肌细胞进行鉴定,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。选用培养至3-4天的细胞,用过氧化氢建立细胞损伤模型,细胞损伤前用硫化氢与LY294002进行预处理。观察心肌细胞形?...     

功能性胰岛细胞瘤的影像学诊断及对比

胰岛细胞肿瘤在内分泌肿瘤中少见,由于60%具有功能性,临床症状出现早,手术切除效果良好,因此术前定性、定位诊断非常重要.收集我院2006～2008年经手术与病理证实的功能性胰岛细胞瘤5例,对其CT、MRI表现进行回顾性分析及对比,并结合相关文献,探讨胰岛细胞瘤的影像学诊断特点及CT、MRI在本病中的应用价值.