慢病毒载体整合位点检测方法的系统适应性对照品初步研究

目的评估8E5细胞和CD19-CAR-Jurkat细胞作为慢病毒载体整合位点检测方法的系统适应性对照品的可行性。方法选择8E5细胞和CD19-CAR-Jurkat细胞, 通过有限稀释法挑选单克隆;建立数字PCR法检测8E5细胞内HIV-1的拷贝数和CD19-CAR-Jurkat细胞内CAR的拷贝数;采用高通量测序技术(全基因组重测序法、改良的基因组测序法和探针杂交捕获法)对8E5细胞和CD19-CAR-Jurkat细胞的整合位点进行检测, 并采用光学基因组图谱技术(optical genome mapping, OGM)对整合位点进行确认。结果经有限稀释法, 挑选出3个8E5细胞克隆和6个CD19-CAR-Jurkat细胞克隆。通过数字PCR及流式细胞术检测基因拷贝数, 确定8E5-D8和CD19-CAR-Jurkat 2-6作为候选细胞, 并扩增冻存。数字PCR检测结果显示, 8E5-D8细胞含有约1拷贝/细胞, CD19-CAR-Jurkat 2-6细胞含有约13拷贝/细胞;高通量测序结果显示, 8E5-D8细胞有1个整合位点, CD19-CAR-Jurkat 2-6细胞有13个整...     

干细胞临床研究质量复核中发现的问题及初步分析

自2015年《干细胞临床研究管理办法(试行)》颁布以来,中国食品药品检定研究院生物制品检定所细胞资源保藏研究中心承接了大量的干细胞临床研究细胞制剂质量复核工作,在与干细胞制剂研发机构技术沟通、资料审阅过程中发现了若干在细胞制备工艺、制剂质量标准中存在的问题,在质量复核中也发现在干细胞安全性和干细胞特性检测方面存在多项不...     

新生大鼠低氧缺血性脑损伤对脑组织病理形态和神经营养因子的影响

目的改进新生大鼠低氧缺血性脑损伤(HIBI)模型的制作方法,观察低氧缺血对脑组织病理形态和神经营养因子的影响。方法大鼠随机分为空白对照组(n=5)、假手术组(n=8)和HIBI模型组(n=19), HIBI模型制作中省去了经典Rice法中的麻醉步骤和动物手术后休息时间,观察HIBI后大鼠体重增长情况,行为能力表现以及脑组织病理形态学改变;比较HIBI 制模后3 d假手术组及HIBI组鼠脑匀浆beta-NGF和human-NT3的变化。结果(1)HIBI模型组体重增长明显落后于空白对照组和假手术组(P<0.01);(2)HIBI组全部出现不同程度的行为异常:84%翻身不能,63%肌肉颤动和/或头颤,抽搐者占42%,死亡率为21%。制模后3 d HIBI模型组大鼠的行为障碍和异常运动的发生率均明显低于制模当日(P <0.01);(3)HE染色可见HIBI模型组大鼠左侧大脑半球神经元损伤及神经胶质细胞增生;(4)制模后3 d鼠脑匀浆human-NT3含量较假手术组增加(P<0.05);β-NGF含量无明显变化。结论制作的新生大鼠HIBI模型更符合临床新生儿HIBI的自然病程。HIBI早期神经营养因子表达增加在神经保护机制中发挥重要作用。     

犬骨髓基质干细胞源性血管内皮样细胞的诱导分化及细胞特征鉴定

目的采用血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导犬骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs),探讨BMSCs向内皮细胞(endothelial cells,ECs)分化的潜能和内皮细胞的特征性鉴定方法。方法采集犬髂骨骨髓15～20 mL,全骨髓10%FBS DMEM培养液进行原代培养。将第2代纯化的BMSCs细胞悬液接种于含VEGF、bFGF的DMEM/F12培养液(细胞接种密度为1×106.mL-1)体外诱导培养。对细胞形态特征进行观察,对诱导分化的细胞行CD31、vWF、VEGFR-2荧光免疫蛋白检测。结果原代培养的BMSCs形态呈长梭形或不规则形,呈均匀分布生长。诱导分化后的细胞光镜下单层融合生长,呈铺路石样形态;电镜下细胞呈多边形,可见特征性的Weibel-Palade小体;经成血管内皮细胞诱导培养7～14 d后,BMSCs诱导分化细胞CD31、vWF和VEGFR-2的表达呈阳性。结论犬BMSCs易于体外分离培养及扩增,经VEGF、bFGF体外定向诱导后的细胞具有血管内皮细胞的特征且细胞纯度高、数量大。     

重庆市1991-2002年儿童寄生虫病住院情况调查

寄生虫病是严重危害我国儿童健康和发育的一个公共卫生问题。为了解儿童寄生虫病情况，作者对重庆市3所甲级医院1991～2002年0～15岁儿童寄生虫病住院病历资料进行了统计分析，结果报告如下。     

重庆市 1991～2002年儿童寄生虫病住院情况调查

寄生虫病是严重危害我国儿童健康和发育的一个公共卫生问题。为了解儿童寄生虫病情况,作者对重庆市3所甲级医院1991~2002年0~15岁儿童寄生虫病住院病历资料进行了统计分析,结果报告如下。1资料与方法1.1资料来源及整理资料来源于重庆市儿童医院、西南医院、重庆医科大学附属一院等综合性医院。对1991~2002年0~15岁儿童住院病历和住院清单进行筛查,收集确诊的寄生虫病病例资料,包括寄生虫病病种、流行病学史、住院时间及费用、儿童的基本情况等。1.2资料分析根据所收集的病例资料,分析重庆市住院儿童寄生虫病构成、发病的时间分布、地区分布…     

固本止咳中药对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺功能及呼吸道分泌sIgA的影响

目的:观察固本止咳中药对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠肺功能及呼吸道分泌分泌型免疫球蛋白(sIgA)的影响。探讨固本止咳中药治疗COPD的作用机制。方法:采用鼻腔滴入脂多糖(LPS)加熏香烟的方法建立COPD小鼠模型,实验分为空白对照组、模型对照组、固本止咳中药组;运用HE染色、电镜对形态学进行观察,评价COPD小鼠模型;使用动物肺功能仪分析系统检测小鼠肺功能;应用ELISA方法检测小鼠气道sIgA分泌水平。结果:COPD小鼠模型形态学结果符合COPD临床病理形态学改变;肺功能实验显示FEV0.1、FEV0.2、FEF25-75、PEF模型对照组较空白对照组显著性降低(P0.05),固本止咳中药组较模型对照组显著性增高(P0.05);气道sIgA分泌水平模型组较空白对照组显著性降低(P0.05),固本止咳中药组较模型对照组显著性升高(P0.05)。结论:固本止咳中药对COPD模型小鼠小气道功能及局部黏膜状态有一定的改善作用。     

神经干细胞向多巴胺能神经元分化机制的研究进展

帕金森病是中脑黑质的多巴胺能神经元缺失引起的慢性中枢神经系统功能失调。目前,应用神经干细胞在体内外分化成多巴胺能神经元是帕金森病细胞替代治疗的重要途径。本文综合近十年来的研究进展,对神经干细胞向多巴胺能神经元分化过程中重要的分子机制、信号通路以及外界影响因素进行综述。     

家庭医生精准履约 卫生院蜕变成省级标杆

基层医疗机构实行家庭医生签约服务已有数年,为解决签约服务质量不高甚至签而不约的问题,淄博市淄川区黑旺卫生院提出家庭医生预约入户服务理念,创新实施“精准履约”服务模式,有效解决签而不约、履约服务不到位的问题,让国家的基本公共卫生服务和家庭医生签约服务有效覆盖辖区居民,促进医卫融合发展,提升卫生院服务能力。