孕期尼古丁暴露致成年子代大鼠中枢对血管紧张素II的高反应性

目的 探讨孕期尼古丁暴露后,子代大鼠中枢对血管紧张素II（AngII）的反应性。方法 对孕期尼古丁暴露的子代大鼠（n =7）脑室内注射AngII、洛沙坦(Los)和PD123319（PD）后,观察尼古丁子代（尼古丁组）平均动脉压（MAP）、血气与正常大鼠子代（对照组,n =7）之间的差异,并检测下丘脑前区（AHA）c-Fos表达,AngII受体1a（AT1aR）、AT1bR和AT2R mRNA的变化,以及AHA区AT1R、AT2R蛋白表达水平。结果 尼古丁组基础MAP与对照组无差异,但脑室内注射 AngII后,尼古丁组大鼠MAP高于对照组［（120.36±6.23） mmHg （109.87±6.86）mmHg,P <0.05］,AHA区的c-Fos表达也明显强于对照组（25.8±2.91 比6.42±1.52,P <0.05）,而Los预处理后,两组MAP无明显变化,但PD预处理后,尼古丁组MAP仍高于对照组。并且尼古丁组AHA区的AT1aR mRNA高于对照组（1.23±0.05 比 1.00, P <0.05）,AT1R蛋白表达也高于对照组（0.581±0.06 比 0.353±0.05,P <0.05）。结论 孕期尼古丁暴露可导致子代大鼠AHA区AT1aR mRNA及AT1R蛋白高于对照组,可能导致中枢对AngII的反应性增强。     

人胚胎生殖细胞体外培养条件优化及细胞移植实验研究

目的:优化人胚胎生殖细胞(EG细胞)的体外培养体系,并将生长状态良好的传代的人EG细胞移植用于大鼠心肌梗死模型的治疗。探讨人胚胎生殖细胞进行异种移植对大鼠心肌梗死的治疗机制。方法:取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,用添加和不添加细胞因子的两种培养体系对比进行组织块原代及传代培养,选取生长情况良好的传至第4代的人EG细胞,移植到急性心肌梗死大鼠的梗死心肌周围,分别于移植后1天、1、2、4周处死大鼠,以鼠抗人细胞核抗体MAB1281作为示踪剂,通过免疫组化方法检测移植细胞的分布。结果:在培养液中添加LIF和b-FGF后原代及传代培养的人EG细胞生长旺盛,形成集落更早,传到第4代形成的集落体积变化不大:移植组人EG细胞在移植后1天、1周、2周、4周均可以在心梗区域观察到MAB1281阳性细胞。结论:添加LIF和b-FGF的培养体系是更高效的人EG细胞培养体系。人EG细胞可异种移植,人EG细胞在大鼠心肌梗死处由心外膜层逐渐向心肌层迁移。     

低氧对小鼠胚胎干细胞诱导分化成心肌细胞的影响

目的探讨在胚胎干细胞诱导分化过程的不同阶段进行低氧处理对分化心肌细胞的影响。方法建立胚胎干细胞向心肌细胞诱导分化的实验方法,在分化过程的不同阶段采取低氧（氧浓度为4%）处理,并设立常氧组（约为20%）作为对照,用免疫荧光鉴定分化后的心肌细胞,以流式细胞术检测低氧对分化心肌细胞的增殖、分化、凋亡的影响。结果分化细胞经免疫荧光检测显示,部分细胞呈α辅肌动蛋白阳性（红色）、心肌肌钙蛋白I阳性（绿色）;分化细胞经流式检测显示,与常氧组相比,悬滴低氧组α-actinin阳性细胞和cTnI阳性细胞的比率分别提高了12.55%（P〈0.01）和6.11%（P〈0.05）,悬浮低氧组凋亡比率与常氧组相比明显提高（P〈0.01）,悬滴低氧组处于S期的细胞比率与常氧组相比明显降低（P〈0.01）。结论在胚胎干细胞向心肌细胞的定向诱导分化过程中,采用悬滴阶段低氧处理,使心肌特异性蛋白阳性细胞比率提高,细胞凋亡率稳定,细胞增殖能力因细胞分化成熟而有所降低,为低氧处理的最佳方案。     

参麦体外诱导人胚胎生殖细胞向心肌细胞分化

目的:探讨参麦对人胚胎生殖细胞(hEGC)向心肌细胞诱导分化的作用.方法:取5～10周人胚胎生殖腺嵴,进行组织块体外培养,用直接悬浮法使hEGC形成拟胚体(EBs),用不同浓度参麦的培养基对其进行诱导分化,然后取不同时间的细胞做免疫细胞化学显色,鉴定细胞的心肌特异转录因子GATA-4和心肌肌钙蛋白-T(cTnT)表达情况.结果:参麦诱导hEGC分化为心肌细胞的最佳浓度为1g/L,诱导第3周时分化率达57 0%±3 25%,显著高于不添加任何诱导剂的对照组.诱导后细胞形态变成梭形,3周细胞突起相互连接成条索状,且排列方向趋于一致;诱导后第3天即开始出现GATA-4弱表达,第3周时表达最强;诱导后2周,细胞内开始表达cTnT,3周强阳性表达,4周表达明显增强.结论:参麦能够促进hEGC向心肌细胞分化,从而得以建立一种体外诱导hEGC分化为心肌细胞的方法.     

大鼠心肌梗死模型的建立

目的 探讨大鼠心肌梗死动物模型的构建方法.方法 用4%水合氯醛麻醉SD大鼠,缝扎左冠状动脉前降支,阻断冠状动脉血流,造成心肌梗死,形成与临床相似的病理生理过程.结果 大鼠术后20 min,心电图肢体导联ST段弓背向上抬高,出现病理性Q波.组织切片镜下观察病变区心肌细胞排列紊乱、疏松,细胞核固缩、碎裂.结论 该心肌梗死动物模型构建方法 简单,创伤轻,成功率高,结果可靠.     

人胚胎生殖干细胞移植对大鼠心肌梗死的影响

目的:探讨直接注射移植人胚胎生殖干细胞对大鼠心肌梗死的影响.方法:缝扎SD大鼠左冠状动脉前降支,建立心肌梗死模型.取5～10周人胚胎生殖腺嵴,组织块体外培养,生物学鉴定为人胚胎生殖干细胞(hEG).将其直接注射于大鼠急性心肌梗死边缘.于移植后1 d、1、2、4周处死大鼠,免疫组织化学方法观察心肌特异转录因子GATA-4和抗人细胞核抗体MAB1281在移植细胞的表达.结果:免疫组织化学显示移植组MAB1281检测阳性,GATA-4在移植细胞阳性表达.结论:hEG细胞直接注射移植大鼠心肌梗死处,细胞能存活并呈现向心肌细胞分化的表现,显示出正常心肌细胞的光镜结构.     

46例新生儿先天愚型的临床实验研究

对新生儿采用外周血染色体检查及核型分析研究，发现先天愚型46例，旨在揭示新生儿染色体异常与孕妇生育染色体异常患儿的高危因素的相关性。     

低氧环境下骨髓间充质干细胞中血管内皮生长因子的表达

背景：作为种子细胞来源的骨髓间充质干细胞移植后能否在相对缺氧的体内环境下生存,是移植成功与否的重要环节。因此研究体外低氧环境下骨髓间充质干细胞的生长状态,可以为体内细胞移植提供实验依据。目的：观察体外低氧环境对大鼠骨髓间充质干细胞生长及血管内皮生长因子表达的影响。方法：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,光镜观察细胞的形态;取第3代骨髓间充质干细胞,按氧浓度分为两组,分别在常氧条件下（体积分数为21%氧气）和低氧条件下（体积分数为3%氧气）培养72 h。用CCK-8法和流式细胞术检测两组细胞的增殖情况,Western-blot印迹法检测常氧组和低氧组细胞中缺氧诱导因子1α与血管内皮生长因子蛋白的表达。结果与结论：①成功分离和培养了骨髓间充质干细胞,光镜下细胞呈长梭形,形态均一。②CCK-8法结果显示各时间点低氧组的细胞数目均高于常氧组,在36,48 h时活力增加显著（P〈0.05）。③流式细胞术结果显示,与常氧组比较,低氧组处于S期的细胞数量增加,且细胞增殖指数也显著增加（P〈0.05）。④Western-blot印迹法结果显示,常氧组细胞缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子蛋白仅有少量的表达,而低氧组两蛋白表达量均呈时间依赖性上调（P〈0.05）。以上结果说明低氧可诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞的增殖,又上调了缺氧诱导因子1α与血管内皮生长因子蛋白的表达,随着低氧时间的延长呈升高趋势。     

人胚胎生殖细胞移植大鼠急性心肌梗死区的存活及分化

目的 观察人胚胎生殖细胞移植于大鼠急性心肌梗死区后的存活率和增殖分化能力,探讨人胚胎生殖细胞异种异体移植的可行性.方法 取5～9周人胚胎生殖脊细胞,分离、体外培养获得胚胎生殖细胞;用SD大鼠建立心肌梗死模型,分为对照组、移植组.分别在移植后1 d和1、2、4周处死大鼠,以抗人细胞核抗体MAB1281作为示踪剂,观察转录因子Nkx-2.5在移植大鼠心脏组织的阳性表达;分析人胚胎生殖细胞在宿主体内转化为心肌细胞的能力.结果 成功建立大鼠心肌梗死模型;移植组心肌梗死区抗人细胞核抗体MAB1281和转录因子Nkx-2.5均呈阳性表达,对照组均为阴性表达.结论 人胚胎生殖细胞植入心肌组织后,不仅在心肌内存活而且表现出向心肌细胞分化的特性.     

人胚胎生殖细胞移植于梗死心肌后不同时期心肌特异转录因子GATA-4的表达

目的:探讨人胚胎生殖细胞(hEGCs)移植入急性心肌梗死大鼠心肌组织后,移植细胞早期心肌特异转录因子GATA-4的表达。方法:取5~10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,进行人EG细胞的组织块原代及传代培养,以传四代的人EG细胞为移植细胞。40只SD大鼠随机分为两组,移植组将获得的人EG细胞移植到急性心肌梗死大鼠的梗死心肌边缘;对照组用同样的方法给急性心肌梗死大鼠注入PBS。于移植后1天,1、2、4周处死大鼠,用免疫组化方法检测心肌特异转录因子GATA-4在移植细胞的表达。结果:移植后1天,1、2、4周移植组均有移植细胞稳定存活,GATA-4的表达在移植1天时呈弱阳性,1周及2周时呈阳性,4周时强阳性;对照组均未检测出移植细胞及心肌细胞转录因子。结论:随着移植时间的延长,移植细胞GATA-4表达呈增强趋势,移植后4周表达强度最大。