基因芯片快速HLA-DR52组分型

目的 用基因芯片对HLA-DR52组快速分型。方法 根据中国汉族人群常见的HLA-DRB位点及其基因多态性的独特序列，设计特异性的寡核苷酸分型探针，制成寡核苷酸芯片。通过组间特异引物扩增基因组DNA，扩增中用荧光标记，扩增标记后的产物与芯片的探针杂交，通过杂交产生的荧光信号确定样品的基因亚型。83份样本分别用基因分型芯片和序列特异性引物聚合酶链反应技术(PCR-SSP)对HLA-DR52组分型。结果PCR-SSP分型DR52组57个位点中，经芯片分型有2个无DR52组位点，3个PCR-SSP分型为DR52组纯合子，芯片为DR52组杂合子，1个PCR-SSP分型为非DR52组纯合子，芯片分型为含有1个DR52组位点的杂合子。结论 基因芯片能对HLA-DR52组快速、准确的分型，比PCR-SSP能更多的检出DR52组位点，特别是能将纯合子进一步分型，适合临床应用。     

寡核苷酸DNA芯片用于ABO血型基因分型的研究

目的 对寡核苷酸芯片用于ABO血型基因分型的技术进行研究。方法 常规的酚／氯仿法提取标准血样基因组DNA，在ABO座位的外显子6和7区域各设计一对引物，经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针，将探针固定在APS－PDC法制作的DNA芯片上，用标记的PCR产物与之杂交，扫描仪对杂交结果进行扫描，Imagene软件对杂交图象进行分析。结果 本实验共检测了100份已知血型血样的ABO基因型，结果证明本实验研制的ABO基因分型芯片快速、准确、灵敏。结论 寡核苷酸DNA芯片用于ABO的基因分型与其他方法相比更具有灵敏、直观、高通量和集成化的优势。     

HLA-DR位点的基因芯片分型与临床应用

目的：建立一种新型的HLA－DR位点的基因分型方法，为HLA－DR的基因分型提供一个较新的思路。方法：利用基因芯片技术HLA不同基因亚型的独特序列设计探讨，制成分型芯片；待检测样品经PCR反应标记上荧光之后，与芯片进行杂交，根据杂交产生的荧光信号值分析确定样品DR位点的基因亚型，将这一方法应用于70份标准DNA和200份医院移植供受者的HLA－DR基因分型并将部分样品进行基因测序。结果：检测结果表明HLA－DR基因分型芯片可准确分辨出DR位点等位基因30大类，耗时3h 。结论：基因芯片用HLA－DR的基因分型，分辨率高，特异性强，重复性好，操作简便，对比常规的PCR－SSP和PCR－SSO方法，HLA－DR基因芯片方法更为直观，并具有集成化优势。可以在一张芯片上同时检测HLAⅠ类的A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用和骨髓库，脐血库的建立。     

人类白细胞抗原-A基因芯片分型研究

目的 探索人类白细胞抗原-A（HLA-A）基因芯片分型，为器官移植临床配型服务。方法 根据中国汉族南方人常见的HLA-A位点基因及其多态性的独特序列，设计并合成48条特异性的寡核苷酸分型探针，将其点在玻片上，制成芯片。基因组DNA通过组间特异性引物扩增，并用荧光素Cy5标记。标记后的产物与结合在芯片上的探针进行杂交，通过荧光扫描仪获得杂交产生的荧光信号值，再经过计算机软件自动分析，确定样品的HLA-A基因亚型。用该方法对120份样本进行HLA-A基因分型。结果 120份待检样本，其中6份因PER无产物，不能分型。1份信号杂乱，不能分型。其余113份样本分型成功。实际检出A抗原特异性结果为A2（含A203）：56；A11（含A1101）：52；A24：33；Al：8；A30（含A3001）：7；A33：21；A26：1；A29：2；A31：3；A68：2；A3：9；A32：1。未检出A＊3002基因型。整个检测耗时约4．5h。芯片检测的重复率为100％。结论 HLA-A基因芯片是一种理想的分型方法，具有特异性高、重复性好、操作简便、所需样本量少、结果判读容易、一次可作多份样本的优点，适合临床器官移植配型应用。     

HLA-DRB1基因芯片与PCR-SSP分型的比较

目的：比较基因芯片和PCR-SSP用于汉族南方人群HLA-DRB1基因分型的结果，评价分型芯片的准确性。方法：77份待分型样本，分别用等位基因特异的PCR-SSP和基因分型芯片对DRB1分型。芯片分型通过组间特异引物扩增基因组DNA，扩增用荧光标记。扩增标记后的产物与分型芯片的探针杂交，通过杂交产生的荧光信号确定样品的HLA-DRB1基因亚型，比较两种方法分型所获得的结果，不吻合的样本全部经第三方验证或测序。结果：77份样本，两种方法分型全部成功。分型结果的吻合率为93％。不吻合样本6份，其中SSP定型纯合子4份，芯片分型全部为杂合子。经第三方验证，证实芯片对纯合子和杂合子的分型全部正确。另外2份不吻合的样本经测序，证实SSP分型错误1份，芯片分型错误1份。芯片的重复率为96％。结论：基因芯片是一种理想的分型方法，具有特异性高、重复性好、操作简便、所需样本量少、一次可作多份样本的优点。     

基因芯片与血清学方法用于120份供、受者 HLA-A分型的比较

目的 比较基因芯片和血清学方法用于汉族的移植供、受者白细胞抗原Ⅰ类A抗原（HLA—A）分型的准确性和临床实用性。方法 采集供、受者的外周血共120份,再将每份血样分为2部分,分别采用血清学和基因芯片方法检测HLA—A抗原分型,对两种方法分型结果不同的样本,采用序列特异引物聚合酶链反应技术（PCR-SSP）检验。通过比较分型结果和操作方法,评价两种方法的准确性和临床实用性。结果 血清学分型总耗时3h,基因芯片分型总耗时4．5～5h,共有112份样本分型成功,其中两种方法结果一致的有91份,不一致的有21份。经验证,基因芯片分型错误2份,总误差率为2％;血清学分型错误19份,其中5份抗原误差,14份空白误差,总误差率为17％。结论 基因芯片分型准确性明显优于血清学,随着芯片性能的不断完善,将来可能完全取代血清学方法,并具有广阔的应用前景。     

HLAⅠ类抗原的基因芯片分型技术研究

目的：采用DNA芯片技术进行汉族人群HLAⅠ类抗原A、B位点的DNA分型研究，并实现将A、B位点的DNA分型集中于一张芯片上，同时完成。方法：根据HLAⅠ类抗原A、B位点不同基因亚型的独特序列设计探针，制成分型芯片；待检测样品经PER反应标记上荧光之后，与探针在芯片上进行杂交，通过对杂交产生的荧光信号值进行分析，确定样品的HLA-A、B基因亚型。将这一方法应用于220份样本的HLAⅠ类DNA分型并将部分样品进行基因测序。结果：所有样本的HLAⅠ类基因芯片分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，80份样本的重复率为100％，总耗时2．5h。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出A位点等位基因20个，B位点等位基因41个，实际检出汉族人群A抗原特异性13个、B抗原特异性32个。结论：基因芯片用于HLAⅠ类A、B分型技术可行，其分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便快速、结果直观，可以在一张芯片上同时检测HLA-A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用。     

应用基因芯片技术进行HLA-A抗原DNA分型

血清学方法是HLA A位点的经典分型方法[1 ] 。血清学之间的交叉反应,尤其是A1 9分裂子之间较强的交叉反应以及淋巴细胞膜抗原的弱表达,常常使分型出现技术上的困难和判断误差,因此HLA A位点的基因分型成为必然趋势。我们在成功研制了DR位点基因分型芯片的基础上[2 ] ,研制了HLA A位点的基因分型芯片并进行了临床验证和应用,现报告如下。材料和方法1　DNA样本　标准DNA包括HLA A 2 0大类,由上海血液中心提供;1 2 0份临床样本由上海市第一人民医院提供。2　引物和分型探针　在HLA A座位的外显子2区域和外显子3区域各设计一对引物,…     

DNA芯片技术检测HLA-DR1,DR51组基因型

目的 采用DNA芯片技术对HLA—DRl，DR51组基因分型。方法 根据编码HLA—DR1，DR51组抗原等位基因序列设计特异分型探针，制作DNA分型芯片。通过组间特异引物扩增基因组相应区段DNA，扩增中用Cy5-dCTP荧光标记，扩增标记后的产物与芯片探针杂交，通过杂交产生的荧光信号及分布格局确定样品基因亚型。分型结果用标准DNA和PCR—SSO验证。结果130份样本共检出HLA-DR1，DR51组位点34个，包括18个：DR15，8个DR16，6个：DR10，2个DR1，无假阳性或假阴性，准确率和重复率均达100％。检测总耗时约3．5h。结论 DNA芯片用于HLA-DR1、DR51组基因分型具有高分辨度、高特异性和简单快速的优点，适于器官移植临床应用。     

基因芯片在人白细胞抗原A19组基因快速分型中的应用研究

目的　建立基因芯片快速检测人白细胞抗原A1 9(HLA A1 9)分型方法。方法　利用基因芯片技术 ,根据HLA A位点不同基因亚型的独特序列设计探针 ,制成分型芯片 ;待检测样品经聚合酶链反应 (PCR)标记上荧光之后 ,与芯片进行杂交 ,根据杂交产生的荧光信号值 ,分析确定样品A位点的基因亚型。对 1 2 0份移植供受者的HLA A基因分型 ,并对 1 1份样品作基因测序。结果　仅用 2 5h ,HLA A1 9基因分型芯片可准确分辨出A1 9抗原 9大类 (A2 90 1、A2 9XX、A30 0 1、A30 0 6、A30XX、A31、A32、A34和A74 )。结论　HLA A1 9组基因芯片分型方法 ,分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便、结果直观 ,适于临床应用