外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA实时定量PCR检测与体征及血细胞计数的相关性

目的 定量检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌DNA含量，研究其与体征及皿细胞计数之间的相关性，并比较不同检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异。方法 以实时定量PCR（RQ-PCR）定量检测40份健康人静脉血标本，确定临床阳性检测限。31例发热患者共72份血标本同时进行常规细菌培养及大肠埃希菌DNA定量检测，比较两种检测方法对血中大肠埃希菌的阳性检出率的差异，两个取血时间点间大肠埃希菌DNA含量的变化，并计算大肠埃希菌DNA含量与体温、心率、白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间的相关性。结果 RQ-PCR定量检测大肠埃希菌DNA阳性率为52．78％（38／72），显著高于细菌培养阳性率2．78％（2／72）（P=0．000）。同一患者两个时间点血标本检测结果显示，静脉血中大肠埃希菌DNA在2～6小时内的升降变化达10～20倍。血中大肠埃希菌DNA含量与体温和心率之间均显著相关（P=0．000），相关程度中度密切（，值分别为0．565和0．546），与白细胞计数、中性粒细胞及淋巴细胞百分比之间无显著相关关系。结论 RQ-PCR检测外科发热患者静脉血中大肠埃希菌阳性率远高于血培养。血中大肠埃希菌DNA拷贝数变化速度较快。血细胞计数不能很好反映血中大肠埃希菌的含量，而体温心率的影响因素较多，因此RQ-PCR能更及时准确反映大肠埃希菌血症的严重程度，有助于对肠屏障损伤导致肠道细菌移位的动态程度或后果进行评估。     

肠外营养预混配方与全合一配液配方的临床应用调查

目的 了解国内住院患者全合一肠外营养液与预混肠外营养液的配方特点。方法 收集国内6家不同地区医院的配制中心因不同疾病住院患者的肠外营养处方,统计营养素供给量、总液体量、非蛋白质热卡、总氮量、热氮比、糖脂比等指标,并与预混营养液相比较。结果 全合一营养液处方中营养素的供给量能够满足患者基本营养需要,不同能最级别的预混营养液基本能够满足大多数住院患者的营养需要。全合一营养液处方中总氮量基本能够满足患者营养需要,但热氮比[(180～250):1]、糖脂比(0.56 ～1.26)与推荐值[(100 ～ 150):1,1.0]差距较大,而3种不同能量级别的预混营养液中的热氮比(167)、糖脂比(0.8)更为理想。结论 全合一营养液和预混营养液各有优缺点,能满足多数住院患者疾病治疗的需要。全合一营养液处方应多考虑营养素分配比例的问题。     

实时定量PCR检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及临床应用

目的建立实时定量PCR（RQ-PCR）快速检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及进行初步临床应用。方法基于烟曲霉多拷贝基因ITSl-5．8S基因设计引物和TaqMan探针,用QIAamp^DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA,建立20μlRQ-PCR反应体系,对含有不同载量烟曲霉基因组的模拟人全血标本和66份外科发热患者全血标本进行烟曲霉基因组的定量检测。结果检测限为10^-1基因组／μl上机待测液（即约78CFU／ml全血）;检测特异度和灵敏度分别为94．25％和99．04％,阳性预告值和阴性预告值分别为97．63％和97．62％;测定结果的平均相对误差为（3．67±13．19）％;批内及批间平均重复性变异系数分别为（12．38±1．53）％和（16．27±2．72）％;人血标本中烟曲霉基因组平均回收率为（107．81±25．92）％,回收率平均变异系数为（26．24±5．62）％。66份外科发热患者血标本中未检测出烟曲霉基因组。结论RQ-PCR可以快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中烟曲霉基因组的载量,且有着较好的准确度与精密度。本研究外科发热患者血中未检测到烟曲霉基因组。     

乳腺癌化疗患者外周置人中心静脉导管相关上肢静脉血栓形成的临床诊疗

目的探讨乳腺癌化疗患者外周置人中心静脉导管（PICC）相关上肢静脉血栓形成的临床诊疗。方法回顾性分析北京协和医院2011至2012年938例乳腺癌化疗患者中,PICC相关有症状上肢静脉血栓形成的发生率、诊断和治疗。结果10例乳腺癌患者出现PICC相关有症状上肢静脉血栓,发生率为1．1％（10/938）,每1000个导管留置日中的血栓例数为0．11,共携带导管1035d,置管后血栓发生中位时间23．5（4～176）d,9例患者采用低分子肝素抗凝,中位抗凝时间为14（3～50）d,5例患者抗凝后继续使用导管,所有患者均无肺栓塞发生。结论PICC相关上肢静脉血栓形成在乳腺癌化疗患者中发生率低,早期诊断及治疗后,仍可取得较好的临床结局。     

实时定量PCR检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及临床应用

目的 建立实时定量PCR(RQ-PCR)快速检测人全血标本中烟曲霉基因组载量的方法及进行初步临床应用.方法 基于烟曲霉多拷贝基因ITS1-5.8S基因设计引物和TaqMan探针,用QIAamp(R)DNA Blood Mini Kit提取烟曲霉基因组DNA,建立20μl RQ-PCR反应体系,对含有不同载量烟曲霉基因组的模拟人全血标本和66份外科发热患者全血标本进行烟曲霉基因组的定量检测.结果 检测限为10-1基因组/μl上机待测液(即约78 CFU/ml全血);检测特异度和灵敏度分别为94.25%和99.04%,阳性预告值和阴件预告值分别为97.63%和97.62%;测定结果的平均相对误差为(3.67±13.19)%;批内及批间平均重复性变异系数分别为(12.38±1.53)%和(16.27±2.72)%;人血标本中烟曲霉基因组平均回收率为(107.81±25.92)%,回收率平均变异系数为(26.24±5.62)%.66份外科发热患者血标本中未检测出烟曲霉基因组.结论 RQ-PCR可以快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中烟曲霉基因组的载量,且有着较好的准确度与精密度.本研究外科发热患者血中未检测到烟曲霉基因组.

Abstract：

Objective To establish a real-time quantitative polymerase chain reaction (RQ-PCR) assay for fast detection of Aspergillus fumigatus genome in human whole blood samples and explore its clinical application.Methods The primers and the TaqMan-probe were designed on the basis of the multi-copy ITS1-5. 8S region of the rDNA of Aspergillus fumigatus. The Aspergillus fumigatus genomic DNA were extracted with QIAamp(R) DNA Blood Mini Kit.A 20 μl RQ-PCR amplification system was established, and the simulated blood samples containing various given load of Aspergillus fumigatus genome and the 66 whole blood samples of the surgical febrile patients were examined. Results The detection limit of the RQ-PCR instrument is 10-1 genomes/μl DNA sample,namely 78 CFU/ml whole blood. The specificity and the sensitivity were 94. 25% and 99. 04% respectively; and the positive predictive value and negative predictive value were 97. 63% and 97. 62% respectively. The average relative error of the quantitative results was (3. 67 ±13. 19)%, and the intra- and the inter-assay average coefficients of variation were (12.38 ± 1. 53)% and (16. 27 ±2. 72)% , respectively. The average recovery rate of Aspergillus fumigatus genomic DNA in human whole blood samples was (107. 81 ±25. 92)% , and the average coefficient of variation of the average recovery rate was (26. 24 ± 5.62) % . No Aspergillus fumigatus genomic DNA was detected among the 66 blood samples of the surgical febrile patients. Conclusions The RQ-PCR assay for fast quantitative detection of Aspergillus fumigatus genome in human whole blood samples is of high sensitivity, specificity,accuracy and precision. The Aspergillus fumigatus genome was not detected in this group of surgical febrile patients.     

多重实时定量PCR同时检测人全血中大肠杆菌与白念珠菌基因方法的建立

目的 建立多重实时定量PCR (MRQ-PCR)同时快速检测血中大肠杆菌与白念珠菌DNA的方法,以评估肠屏障损伤可能导致的移位微生物的种类和程度并提供针对性用药的建议.方法 选择大肠杆菌β-右旋半乳糖苷酶基因作为检测大肠杆菌的靶基因设计引物和探针,选择白念珠菌ITS2基因设计引物和探针.采用QIAamp(R) DNA Blood Mini Kit试剂盒提取大肠杆菌与白念珠菌基因组DNA;建立25 μl TaqMan探针MRQ-PCR反应体系;对18份模拟血标本及10份外科发热患者临床标本进行MRQ-PCR检测.结果 引物和探针特异性好,大肠杆菌与白念珠菌标准曲线相关系数分别在0.994～0.999和0.994～0.998,扩增效率分别为0.894～1.022和0.905 ～1.028.标准样品检测限分别为大肠杆菌13.9拷贝/μl和白念珠菌0.8 cfu/μl,两种菌的检测灵敏度分别为100％和99.69％,特异度分别为100％和94.73％,标准品中大肠杆菌与白念珠菌特异基因平均回收率分别为(101.89±5.69)％和(103.74±4.64)％,两种菌基因检测的批内变异系数分别为(13.14±10.27)％和(19.18±8.54)％,批间变异系数分别为(14.35 ±9.34)％和(18.31 ±10.25)％.全血标本中大肠杆菌与白念珠菌特异基因的检出限分别为12 455.2拷贝/ml和800.3 cfu/ml,平均回收率分别为(111.60±11.06)％和(99.96 ±6.16)％,两种菌基因检测的批内变异系数分别为(11.02±5.65)％和(8.14±7.29)％,平均批间变异系数分别为(12.88±7.59)％和(18.62±9.14)％.结论 多重实时定量PCR可以同时快速、灵敏、特异地定量检测人全血标本中大肠杆菌与白念珠菌基因,准确度高、重复性好、节省血标本用量及检测成本、总检测时间缩短,在临床全血标本的真菌与细菌快速鉴别检测、抗微生物药物的针对性应用及疗效评估、肠屏障损伤后果及疗效的评估中有较实用的推广前景.     

高龄重症急性胆囊炎术后综合营养治疗一例

1 临床资料 患者,男,83岁.无明显诱因突发腹痛1 d,伴烦躁、发热,恶心、呕吐,触诊腹部肌紧张,压痛、反跳痛明显,考虑急性腹膜炎可能,于2009年3月6日急诊入院.     

衰弱对住院老年冠心病患者短期预后的影响:前瞻性队列研究

目的 探讨衰弱对住院老年冠心病患者短期预后的影响.方法 前瞻性收集并分析2017年12月至2018年11月在北京协和医院住院治疗的老年冠心病患者临床资料.根据是否合并衰弱,将患者分为衰弱组和非衰弱组.对两组患者随访,终点事件包括非常规就诊、主要不良心脑血管事件(major adverse cardiac and cer...     

通用真菌引物和探针检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法

目的 建立实时定量PCR(RQ-PCR)以真菌通用引物和探针快速准确检测人全血标本中侵袭性真菌DNA载量的方法,并与细菌相鉴别及进行初步临床应用.方法 选择临床常见的真菌基因组多拷贝基因5.8S rDNA作为靶基因设计特异性通用真菌引物和TaqMan探针,采用QIAamp(R)血液DNA小提试剂盒提取多种致病真菌基因组DNA,建立20μl RQ-PCR反应体系,对含有不同载量致病真菌的模拟人全血标本和71份外科发热患者全血标本进行侵袭性真菌基因组的定量检测.结果 本方法的特异性良好,检测限为101拷贝/μl上机待测液(即约105拷贝/ml全血);检测灵敏度和特异度分别为95.5％和97.6％,阳性预告值和阴性预告值分别为98.7％和92.0％;标准曲线R2在0.9931～ 0.9977;批内及批间平均变异系数分别为(10.4±4.0)％和(27.9±2.0)％;人血标本中真菌基因组DNA平均回收率为(91.0±7.6)％,相对回收率平均变异系数为(14.9±4.0)％.71份外科发热患者血标本中未检测出侵袭性真菌基因组.结论 RQ-PCR可以借通用真菌引物和TaqMan探针快速、特异、灵敏地定量检测人血标本中侵袭性真菌DNA的载量并可与细菌相鉴别,且有着较好的准确度与精密度.外科发热患者血中侵袭性真菌基因组的存在率可能很低.     

实时定量PCR快速检测外科发热患者血中白念珠菌载量的方法

目的 建立实时定量PCR(RQ-PCR)快速检测血中自念珠菌(Gandiad albicans)载量的方法,并对可能存在肠屏障损伤和肠道菌移位的外科发热患者标本进行检测.方法 基于白念珠菌基因组单拷贝基因NAG1设计引物和探针;构建并制备质粒做标准品;用QIAamp(R) DNA Blood Mini Kit试剂盒提取白念珠菌基因组DNA;建立20μl TaqMan探针RQ-PCR反应体系;对74份外科发热患者临床标本进行定量检测.结果 引物和探针特异性好;标准曲线R2 值0.9918～0.9985,扩增效率0.88～1.027,检测限为100 拷贝/μl上机检测液(即约1.1×103 cfu/ml全血),仪器检测灵敏度为97.46%,特异度为100%,平均准确性为(99.64±2.08)%,批内及批间重复性的平均变异系数分别为(14.76±2.64)%和(17.85±3.53)%;血标本中白念珠菌基因组平均提取效率为(88.60±5.73)%,提取效率平均变异系数为(11.70±5.36)%;标本于-20℃存放3、6个月后和0时间点定量结果比较,差异无显著性(P=0.267);74份外科发热患者血中白念珠菌的阳性率为2.7%,最高含量约为4.42×103 cfu/ml.结论 RQ-PCR可以快速、灵敏、特异地定量检测血标本中白念珠菌,重复性好,适用于临床日常检验.少数外科发热患者周围血中存在白念珠菌.