大鼠骨髓间充质干细胞体外分离、纯化与培养适宜条件的筛选

目的:为获得大量、高纯度的骨髓间充质干细胞,筛选体外分离、纯化和培养的适宜条件。方法:实验于2006-08/2007-07在解放军兰州军区兰州总医院进行。①实验材料:2月龄SD大鼠,雄性,体质量(100±20)g,由解放军兰州军区兰州总医院实验动物科提供。②实验方法:分别采用全骨髓法(贴壁筛选法)和密度梯度离心法分离和纯化大鼠骨髓间充质干细胞。将采用密度梯度离心法获得的单个核细胞按1×107,1×108,1.5×108,2×108,1×109,2×109L-1的接种密度分别分成1～6组,接种在24孔板内,每组接种6孔。比较细胞出现伸展时间、原代培养时间。于细胞接种后第1,2,3,4,5,6天进行首次换液。将换下的部分细胞置于新的培养皿中进行培养,至少培养3d,观察是否还有新的贴壁细胞出现,以确定首次换液时间。观察体积分数为0.10,0.12,0.15,0.18,0.20血清对原代及传代后细胞生长的影响,比较不同浓度血清中细胞数量、集落形成率。集落形成率=集落数目/接种细胞数目×100%。采用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞细胞周期。选取第5代扩增的骨髓间充质干细胞,接近完全融合后进行成骨和成脂肪诱导培养。诱导剂分别为:10nmol/L地塞米松、0.05nmol/L抗坏血酸及10nmol/Lβ-甘油磷酸钠;1μmol/L地塞米松、0.5mmol/LIBMX、0.01mmol/L人胰岛素、0.01mmol/L吲哚美辛。并设未加诱导剂培养液培养的骨髓间充质干细胞对照。③实验评估:采用碱粒酶测定成骨诱导后细胞,采用油红O染色鉴定成脂肪诱导后细胞。结果:①细胞出现伸展时间、原代培养时间:密度梯度离心法培养细胞出现伸展时间与全骨髓法相比,差异无显著性意义。密度梯度离心法原代培养时间较全骨髓法长[(9.41±1.11),(14.73±2.86)d,P<0.05]。②不同接种密度对密度梯度离心法所获细胞生长影响:1×109L-1组细胞出现伸展时间及原代培养细胞融合时间较早。1×107L-1组培养20d内不能传代。③首次换液时间对细胞生长的影响:第5天开始在换下的液体中,很少有再贴壁的细胞出现。因此首次换液时间应为第5天。④不同体积分数血清对细胞生长的影响:在其他条件相同的前提下,骨髓间充质干细胞在含体积分数为0.12胎牛血清中细胞集落形成率最高。⑤成骨及成脂诱导:成骨诱导的骨髓间充质干细胞经碱粒酶测定,结果钙化结节呈蓝色。成脂诱导的骨髓间充质干细胞经油红O染色,苏木精-伊红复染后胞内脂滴呈桔红色,核呈蓝色。结论:采用密度梯度离心法分离纯化的骨髓间充质干细胞以1×109L-1密度接种,在含体积分数为0.12胎牛血清的MEM培养基中培养,生长状况良好,增殖速度快。     

白细胞介素1基因-31C/T多态性与重庆地区胃幽门螺杆菌感染的关系

目的了解白细胞介素（IL）1β-31C／T多态性在重庆地区慢性胃炎患者中的分布情况,探讨IL-1β基因多态性与重庆地区胃幽门螺杆菌感染的关系。方法收集重庆地区168例慢性胃炎患者及150例健康时照人群的外周血标本,提取DNA,用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法（PCR-RFLP,）检测IL-β—31C／T多态性基因及基因型频率情况,采用快速尿素酶法检测胃组织的幽门螺杆菌感染情况,比较慢性胃炎患者组和健康时照组31C／T基因及基因型频率的分布差异以及慢性胃炎IL-1β-31C／T不同基因型患者幽门螺杆菌感染率。结果IL-1β-31T等位基因在慢性胃炎和健康时照组的分布频率分别为52．6％和48．1％,慢性胃炎组略高于健康时照组,但差异无统计学意义（P＞0．05）;慢性胃炎患者组中,IL-1β-31T／T、-31C／T及-31C／C基因型胃幽门螺杆菌感染率分别为92．00％、90．67％及79．07％．IL-1β-31T／T纯舍子型和T／C杂合子的胃幽门螺杆菌感染率显著高于-31C／C基因型（P＜0．05）。结论 IL-1β-31T等位基因增加胃幽门螺杆菌感染的风险性,IL-1β-31T／T基因型可能与重庆地区胃幽门螺杆菌感染发生风险有关。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外成脂分化能力的实验研究

目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞体外成脂分化能力与传代次数的关系。方法:用全骨髓培养法,分离骨髓间充质干细胞,加含有地塞米松、胰岛素、3-异丁基-1甲基黄嘌呤、吲哚美辛诱导剂的培养液进行诱导,诱导第10天进行细胞形态学观察和油红O染色鉴定,并进行光密度值测定。结果:随着传代次数增加,油红O染色细胞计数值与光密度值均下降。结论:大鼠MSCs成脂能力随传代次数增加而降低。     

鼻唇沟皮瓣修复鼻部皮肤软组织缺损的临床观察

目的:探讨鼻唇沟皮瓣修复鼻部皮肤软组织缺损的方法。方法:选取2015年10月-2018年4月收治的36例鼻部皮肤软组织缺损患者,皮肤软组织缺损面积(2.68±2.23)cm~2。按鼻部亚单位和鼻部皮肤软组织缺损的形状、大小、深度及部位,分别在鼻唇沟设计"风筝"皮瓣(9例)、改良菱形皮瓣(19例)、旋转皮瓣(6例)、局部皮瓣(2例)修复,全部创面与皮瓣匹配良好。结果:36例患者中有29例评价为优;5例为良;2例为一般;0例为差,总有效率为94.4%。本组病例皮瓣100%成活,伤口均一期愈合,术后随访3个月～1年,切口瘢痕不明显,外形良好,患者对面部形态及美学效果满意,肿瘤患者未发现局部复发。结论:应用鼻唇沟皮瓣修复鼻部皮肤软组织缺损方法简单,效果满意。     

改良Dufoumental菱形皮瓣结合美学原理修复面部皮肤缺损

目的:研究改良Dufoumental菱形皮瓣修复面部皮肤软组织缺损的临床效果。方法:应用改良Dufoumental菱形皮瓣修复面部皮肤缺损,63例患者均为面部肿物切除后圆形或类圆形组织缺损,修复术前皮肤缺损面积为(2.68±1.81)cm~2,在缺损周围设计改良Dufoumental菱形皮瓣,转移并缝合固定。结果:皮瓣均全部成活,切口一期愈合,术后随访1个月～3年,创面无明显瘢痕,效果满意。结论:改良Dufoumental菱形皮瓣修复面部缺损效果满意、可靠。     

A-T皮瓣在眼周皮肤缺损修复中的应用

目的:探讨A-T皮瓣修复眼周皮肤缺损的临床效果。方法:本组28例患者眼周肿物手术切除后均行A-T皮瓣修复缺损。在肿物周围设计A-T皮瓣,切除肿物组织的同时将缺损创面修剪成等腰三角形,底边线向两侧延长,在延长线上至三角形尖端点面积分离皮瓣,将两侧皮瓣向中间推进游离闭合缺损,如果张力大可在延长线下两边各设计一个等边三角形切除。结果:全部患者A-T皮瓣均成活,创面一期愈合,无并发症发生,无明显瘢痕遗留,美容效果满意。结论:应用A-T皮瓣修复眼周皮肤缺损简单可行,效果满意。     

骨髓间充质干细胞在整形外科的应用前景

颜面萎缩、小乳症、凹陷畸形等严重影响患者容貌,脂肪移植为纠正上述畸形,改善患者容貌与外形提供了手段。但是至今无论是脂肪注射移植,还是脂肪块移植均由于成活率低达不到理想的效果。所以许多天然的、人工合成的以及复合材料被用作填充材料,但这些材料仍有一定的缺陷,如异物     

埋线提升术相关并发症的meta分析

目的探讨埋线提升术在面部年轻化治疗中相关并发症的发生率。方法检索中国知网、维普中文科技期刊全文数据库、万方数据、中国生物医学文献数据库、PubMed、Cochrane Library及Embase数据库中采用埋线提升术进行面部年轻化治疗的相关文献。各数据库检索时间均为建库至2022年4月20日。制定纳入标准和排除标准, 纳入符合标准的相关研究。由2名研究者独立进行文献筛选和资料提取;采用STROBE声明中针对横断面研究的规范要求进行质量评分, 总分0～22分, 评分>11分认为是高质量研究。采用Stata16.0软件进行埋线提升术相关并发症发生率的meta分析。采用Egger检验及绘制漏斗图评估文献的发表偏倚。结果最终纳入33篇文献进行meta分析, 包含8 919例患者。28篇文献的质量评分>11分, 其余5篇均为11分, 文献的整体质量尚可。meta分析中涉及的结局指标包括感觉异常、感染、面部不对称、面神经损伤、轻度凹凸不平或轮廓不规则、术后过敏、术后血肿、疼痛、线材外露或可见、淤青、肿胀等11个指标。各结局指标的并发症发生率分别为:感觉异常(1%)、感染(0)、面部不...     

不同方法分离的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性和成脂分化能力的比较

目的：通过比较密度梯度离心和贴壁筛选两种方法所获MSCs的增殖活性和成脂分化能力，探索MSCs体外分离和纯化的较好方法。方法：应用密度梯度离心和贴壁筛选两种方法分离纯化骨髓MSCs，并通过MTT法检测其增殖活性，用第三代MSCs进行成脂诱导，以观察两种方法所获MSCs的成脂分化能力。结果：密度梯度离心法所获MSCs纯度高，呈纺缍形或小三角形，增殖快，约7～10天融合；贴壁筛选法分离的原代细胞中红细胞。破骨细胞等杂质细胞较多，增殖速度相对较慢，且经数次传代仍有较多杂质细胞存在，经成脂诱导后，两种方法所获MSCs表现出相似的成脂能力，油红O染色细胞计数值与光密度值比较两组无显著差异（P值〉0．05）。结论：密度梯度离心法是体外分离和纯化MSCs较好的方法，所获细胞增殖活性高，与贴壁筛选法所获MSCs具有相似的成脂分化能力。