UPLC-MS/MS测定人痰液中异烟肼、吡嗪酰胺和左氧氟沙星的浓度

目的建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时检测痰液中3种药物异烟肼(isoniazid,INH)、左氧氟沙星(levofloxacin,LFX)和吡嗪酰胺(pyrazinamide,PZA)浓度的方法,冒在为实现临床个体化用药提供帮助。方法痰液样品离心后经甲醇/乙腈蛋白沉淀法预处理后进样液质联用仪进行分析。实验采用的流动相A为含0.1%甲酸的水溶液,流动相B为含0.1%甲酸的乙腈;流速0.35mL·min^-1;采用ACQUITY UPLAC HSS T31.8μm column(2.1mm×100mm,Waters公司)分离;采用电喷零电离源,采用多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式对待测物进行正离子扫描检测。此外,本试验盲态收集5例患者的痰液,用该法进行定量分析。结果测得痰液中INH、PZA和LFX分别在48~6000 ng·mL^-1(r=0.9988)、480~60000 ng·mL^-1(r=0.9993)、120~15000 ng·mL^-1(r=0.9995)内表现出良好的线性关系。INH、PZA和LFX 3种药物的日内和日间精密度均低于15%,且3种药物的提取回收率均处于97.21%~107.80%之间。7例受试者体内均检测到药物INH,质量浓度分别为44.74、120.1、301.5、481、595.5、1220及1570 ng·mL^-1;PZA的质量浓度分别为104.2、6273.34和3185 ng·mL^-1;1例受试者检出LFX,质量浓度为199.86 ng·mL^-1。结论本试验建立了痰液中INH、PZA及LFX的检测方法,具有灵敏度高、测定结果准确、快速等诸多优点,可以应用于临床治疗药物的监测。     

肺结核临床治愈后残留空洞的诊断再评价

目的 探讨对初治肺结核临床治愈后残留空洞的诊断再评价.方法 收集2003年1月至2007年6月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心和武汉市结核病防治所对初治痰菌阳性肺结核在完成短程化疗后痰菌阴转、达到临床治愈、但x线胸片检查仍残留空洞的67例患者进行支气管肺泡灌洗(BAL)和经皮肺穿刺活检(PLB),对肺结核合并疾病的诊断进行再评价.结果 67例患者BAL证实结核杆菌阴性,经过知情同意后,其中的59例患者进行了PLB 62例次,发现肺癌2例次(鳞癌1例,腺癌1例),真菌感染5例次(曲霉菌2例、隐球菌2例、白色念珠菌1例)、结核分枝杆菌阳性5例次、细菌培养阳性3例次(铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、产酸克雷伯菌各1例次).结论 即使在肺结核诊断成立并且治疗有效,对肺结核合并疾病的诊断也应该受到高度重视,临床治愈后若残留空洞,仍有必要对诊断进行评价,以免延误肺结核合并的肿瘤和感染性疾病的诊断,必要时需进行BAL或PLB明确诊断.     

上海地区224例早期新型甲型H1N1型流感病例临床特征、治疗及预后回顾性分析

目的 回顾性分析上海地区早期新型甲型H1N1型流感病例的临床特点、治疗及预后.方法 以上海市公共卫生临床中心收治的224例新型A/H1N1型流感患者为研究对象,分析患者基本信息、临床症状与体征、实验室及影像学检查、病程、抗病毒治疗后新型A/H1N1病毒核酸转阴时间及住院时间等.结果 （1）男女性别比为1.1∶1,63.8%的患者年龄分布在18～40岁之间;（2）临床表现以发热、咳嗽、咽部充血,中性粒细胞和C反应蛋白（CRP）升高为特征,且男性白细胞和CRP水平显著高于女性[分别为（6.71±2.45）× 10^9/L比（5.74±2.10）× 10^9/L,F=10.063,P=0.002;（16.32±18.27）mg/L比（12.05±11.44）mg/L,F=4.026,P=0.046];（3）女性血清前白蛋白（PA）水平显著低于男性[（244.80±76.05）mg/L比（272.06±93.51）mg/L,F=5.800,P=0.017];（4）经CT确诊为肺炎者占21.9%;（5）治疗后血清CRP水平显著降低[（3.81±4.93）mg/L比（10.80±12.92）mg/L,F=6.709,P=0.013];CD3、CD4及CD8水平显著升高[分别为（1449.46±446.71）个/μl比（700.50±307.46）个/μl,F=57.940,P=0.000;（762.69±255.66）个/μl比（370.08±157.62）个/μl,F=47.587,P=0.000;（592.38±238.24）个/μl比（288.88±164.98）个/μl,F=34.409,P=0.000];（6）新型A/H1N1型流感病程（3.9±1.4）d,治疗后病毒mRNA转阴时间为（3.8±1.3）d,住院时间（5.0±1.7）d.结论 （1）新型A/H1N1型流感临床以发热、咳嗽、咽部充血、CRP和中性粒细胞升高为特征;（2）新型A/H1N1型流感病毒具有多器官分布特性,可影响肝脏合成PA及机体的免疫功能;（3）早期新型A/H1N1型流感临床症状较轻、病程短,奥司他韦疗效肯定,预后良好.     

CFP10-ESAT6融合蛋白用于结核分枝杆菌感染诊断ELISA方法的初步研究

目的 制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白,探讨CFP10-ESAT6融合蛋白在结核分枝杆菌免疫诊断中的应用价值。方法 PCR扩增得到CFP-10、ESAT6基因片断,将其先后克隆入pET-28a表达载体。优化表达条件、用镍亲和层析的方法纯化带His标签的重组CFP10-ESAT6融合蛋白(rCFP10-ESAT6)。制备兔多克隆抗体,建立rCFP10-ESAT6为抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以健康者血清为对照,检测170例结核患者血清的抗体。结果 重组质粒 pET28a-CFP10-ESAT6靶基因测序结果与预计设计完全一致。融合蛋白在E.coli BL21(DE3)工程菌中均为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的40%。利用金属螯合亲和层析直接纯化重组蛋白,纯度达到95%以上。Western blot分析表明,重组蛋白能与结核患者血清发生特异性免疫结合反应,与健康者血清不发生反应。CFP10-ESAT6的兔多克隆抗体的效价为1∶8 000,CFP10-ESAT6作为包被抗原的检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA最佳包被浓度为0.002 μg/mL,患者血清的最佳稀释度为1∶500。检测结果与临床诊断的符合率,ELISPOT>ELISA(rCFP10-ESAT6)>ELISA(kit)。结论 CFP10-ESAT6融合蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性,有可能成为结核病免疫学诊断的特异抗原,对结核的诊断具有重要参考价值。     

肺结核合并肺隐球菌病8例分析

以往报道认为肺隐球菌病(pulmonary cryptococ-cosis)多发生在免疫功能低下或缺陷患者,病情重、预后差,近年来在免疫力正常的患者中该病报道增多^[1]。肺隐球菌病被误诊为肺结核时有可见^[2],肺结核合并肺隐球菌病的报道却不多见,临床医生在诊断肺结核之后,对合并的肺隐球菌病认识不足或重视程度不够,常常导致肺结核合并肺隐球菌病的诊断延误^[3],本文报道肺结核合并肺隐球菌病8例。     

19例先天性结核病患儿临床特征分析并文献复习

目的分析先天性结核病患儿的临床特点,并结合文献探讨先天性结核病的诊治要点。方法搜集2012年1月至2019年9月期间在上海市公共卫生临床中心结核科住院的6月龄以内的19例先天性结核病患儿的病历资料,包括发病年龄、临床表现、影像学及实验室检查资料、治疗及转归等信息,并结合文献复习进行归纳总结。结果 19例先天性结核病患儿中,男10例(52.6%),女9例(47.4%),年龄3～60d,中位数(四分位数)为53(30,60)d;发病时间最短为出生后1d,最长为出生后45d,平均发病时间为(19.3±13.1)d。10例(52.6%)患儿为急性血行播散性肺结核,9例(47.4%)为原发性肺结核;9例(47.4%)患儿有发热症状,8例(42.1%)有呼吸困难、发绀症状。9例(47.4%)患儿结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测结果阳性,6例(31.6%)患儿胃液抗酸染色涂片及培养阳性;17例患儿行胃液GeneXpert MTB/RIF检查,7例(41.2%)阳性。10例(52.6%)患儿胸部CT扫描显示为双肺弥漫性粟粒状影,8例(42.1%)为局部斑片状影伴肺门淋巴结肿大,1例(5...     

生物制剂在结核病免疫治疗中的应用

［摘要］近年来，结核病的免疫治疗取得了一定的进展。结核病免疫治疗的适应对象主要为初、复治结核病并发免疫功能低下者，重症肺结核，耐药和耐多药结核病等。目前常用的生物制剂有母牛分枝杆菌菌苗、草分枝杆菌菌苗、卡介菌多糖核酸、转移因子、胸腺素、白细胞介素 2等，介绍了这些生物制剂在结核病免疫治疗中的作用机制、使用方法、不良反应、注意事项、临床疗效、应用前景等。     

环介导等温扩增技术用于结核病诊断的价值评估

目的 评估环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)在诊断结核病中的应用价值.方法 以疑似活动性结核患者为研究对象.前瞻性收集患者临床标本,分装后进行荧光涂片显微镜镜检、BACTEC MGIT 960液体培养、MTB GeneXpert(Xpert)和L...     

成人非囊性纤维化性支气管扩张的诊治进展

支气管扩张是慢性气道损伤引起支气管管壁肌肉和弹力支撑组织破坏所导致的一组支气管不可逆性扩张.其发病率在3.9/10万到52/10万左右,不发达国家发病率相对较高.在我国,支气管扩张被当做气道的一般化脓性炎症来治疗,但其病因、发病机制、针对性的治疗手段均研究甚少.文中结合目前的文献及2010年英国胸科学会的支气管扩张诊治指南,对非囊性纤维化性支气管扩张的诊治最新进展作简要述评。     

T细胞斑点试验联合隐球菌乳胶凝集试验对肺结核合并肺隐球菌病诊断的初步研究

目的 评价结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验(TB ELISPOT)和乳胶凝集试验(LA)联合检测对肺结核合并肺隐球菌病的诊断价值. 方法 选择2006年3月-2008年9月我中心呼吸科收治的疑诊肺结核合并肺隐球菌病患者76例,均同时作TB ELISPOT、LA检测和肺组织病理检查.结果 76例患者中,经病原学和病理学确诊为肺隐球菌病15例,肺结核22例,其中肺结核合并肺隐球菌病8例.经检测LA的灵敏度和特异度均为100%,TB ELISPOT的灵敏度和特异度分别为91%和94.4%,8例肺结核合并肺隐球菌病患者LA和TB ELISPOT均为阳性.结论 LA和TB ELISPOT联合检测对肺结核合并肺隐球菌病具有诊断价值.