脑缺血大鼠尾壳核神经元型一氧化氮合酶免疫阳性神经元的细胞构筑

目的:观察大鼠尾壳核一氧化氮合酶神经元的分布,以及脑缺血后其免疫阳性神经元细胞构筑学的变化。方法:实验于2004/2005在南方医科大学和暨南大学进行。取36只SD大鼠随机分为对照组和脑缺血组,每组18只。脑缺血组用双侧颈总动脉阻塞法建立脑缺血模型,对照组行假手术,不结扎颈总动脉。分别于造模后3,7,30d处死动物取材,每个时间点6只。ABC法显示神经元型一氧化氮合酶神经元,图像分析系统测尾壳核阳性神经元数目和大小(神经元以>25μm为大型,25～15μm为中型,<15μm为小型)。结果:经补充后36只大鼠进入结果分析。①神经元型一氧化氮合酶阳性神经元大小和分布不均一,尾壳核背外侧胞体相对较小,数目较多,而腹内侧体积虽大,但较稀疏。②神经元型一氧化氮合酶阳性神经元数目:对照组各时间点无明显变化,脑缺血组缺血后7,30d显著低于对照组(P<0.01)。③神经元型一氧化氮合酶阳性神经元大小:对照组以中型细胞为主,其次为小型神经元,大型细胞少,三类神经元在不同的时期比例恒定。脑缺血组在缺血后3和7d,中小型神经元变化较明显,其中大型和中型神经元逐渐下降,在缺血30d时中型神经元比例显著低于对照组和缺血后3,7d(P<0.01),而小型神经元比例显著高于对照组和缺血后3,7d(P<0.01)。结论:脑缺血后尾壳核神经元型一氧化氮合酶阳性神经元减少,而且中型细胞减少为主,小型细胞所占比例相对增多。     

不同离心介质对小鼠胰岛分离结果影响研究

胰岛移植治疗糖尿病推广中的首要问题是如何获得多量、高活力和高纯度的胰岛.离心介质的选择是影响胰岛分离结果的重要因素之一[1].该研究旨在比较Ficoll和Dextran两种离心介质对小鼠胰岛分离结果的影响.     

大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶神经元的分布和超微结构特征

目的 观察大鼠纹状体神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫阳性神经元的分布以及阳性神经元的超微结构特征.方法 取健康成年SD大鼠,ABC法显示nNOS免疫阳性神经元,包埋前染色方法对阳性细胞进行免疫电镜观察.结果 光镜下,nNOS免疫阳性细胞呈棕褐色,胞体及突起清晰,纹状体外侧区阳性细胞较多,内侧区较少.各区内阳性细胞以中、小型细胞为主,且大多数为中型细胞,小型细胞次之,大型细胞最少.透射电镜观察nNOS阳性神经元核大,胞浆少,呈中间神经元的特征;阳性颗粒呈黑色斑块样,在胞体内,可见小的阳性物质分布于胞核周围或者细胞膜内侧均无膜样结构包裹,大的团块样阳性物质主要存在于胞浆,有清晰的单层膜样结构包裹,亦可见部分无膜样结构包裹的大的阳性物质;在树突和轴突集中的部位亦可见免疫阳性物质,但并不在突起终末的囊泡内;脑组织内微血管壁旁的免疫阳性终末较多见,其突起毗邻血管外膜.结论 大鼠纹状体nNOS免疫阳性神经元以中、小型细胞为主,符合中间神经元的特征,nNOS阳性物质分布于胞质和突起,大块物质多有膜性结构包裹,小块和部分大块阳性物质以及位于轴树突内的无膜性结构包裹,这可能与其功能状态有关.     

小鼠胚胎胰腺移植治疗糖尿病

背景：胚胎胰腺组织具有来源广泛，细胞增殖分化能力强，低免疫排斥性等优点。 目的：探索小鼠胚胎胰腺组织的分离技术，观察其对糖尿病模型小鼠的血糖调节作用。 方法：体视显微镜下分离E11.5~E16.5 C57BL/6小鼠胰腺组织。链唑霉素诱导雄性C57BL/6小鼠建立糖尿病模型，随机分为2组：移植组模型小鼠肾被膜下移植5个E16.5胰腺组织，假手术组模型小鼠肾被膜下注入0.05 mL RPMI1640培养液。移植组小鼠血糖水平≤11.2 mmol/L后，利用IPGTT和IPITT方法检测移植后胚胎胰腺组织的内分泌功能，并摘除移植物观察血糖变化。 结果与结论：体视显微镜下可分离出较完整的E11.5~E16.5小鼠胰腺组织，≤ E12.5 d小鼠胚胎胰腺组织的形态和颜色均难以与周围组织分辨，需根据其与毗邻脏器的关系仔细辨别；> E12.5 d的小鼠胚胎胰腺已初具形态，颜色略发白。组织学和ELISA分别显示胚胎胰腺组织可表达并分泌胰岛素，其表达强度随发育时间逐渐增加。E16.5小鼠胰腺组织移植能有效地控制受体的血糖水平，使受体的体质量和糖耐量恢复正常；胚胎胰腺在受体的肾被膜下可生长发育，摘除的移植物胰岛素和胰高血糖素的表达均较移植前增强。说明胚胎胰腺组织可能成为治疗糖尿病的种子来源。     

小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性和相关基因的表达

目的:观察小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性并检测其相关基因的表达。方法:实验于2005-02/06在暨南大学医学院中心实验室进行。①取妊娠13.5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞,用添加碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行体外培养,取培养3d的神经球接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶,用含血清的培养基诱导分化。②免疫细胞化学检测细胞表面抗原。③四甲基偶氮唑盐法绘制生长曲线。④流式细胞术检测细胞周期。⑤反转录-聚合酶链反应和免疫细胞化学技术对神经干细胞进行鉴定。结果:①胚胎神经干细胞及其分化细胞的抗原表达:血清诱导8h,分化细胞中(8.9±5.6)%细胞呈Tubulin阳性,(87.5±7.4)%细胞胞浆呈胶质纤维酸性蛋白阳性表达。未诱导细胞近100%呈巢蛋白阳性,仅有极少数细胞Tubulin阳性或胶质纤维酸性蛋白阳性。②胚胎神经干细胞的细胞周期:从小鼠胚胎大脑获取的神经干细胞3d左右进入指数生长期;原代培养细胞83.8%处于静止期/DNA合成前期。③原代与传代细胞均表达巢蛋白mRNA,聚集形成的神经球巢蛋白阳性。血清诱导4h胚胎神经干细胞开始转录神经元相关基因Tau和胶质细胞相关基因胶质纤维酸性蛋白。结论:从小鼠胚胎大脑可成功分离获得大量胚胎神经干细胞,并在含碱性成纤维细胞生长因子的条件培养基中迅速增殖,血清诱导下分化生成神经元和星型胶质细胞。     

小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性和相关基因的表达

目的：观察小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性并检测其相关基因的表达。方法：实验于2005—02／06在暨南大学医学院中心实验室进行。①取妊娠13．5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞，用添加碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行体外培养，取培养3d的神经球接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶，用含血清的培养基诱导分化。②免疫细胞化学检测细胞表面抗原。（爹四甲基偶氮唑盐法绘制生长曲线。④流式细胞术检测细胞周期。⑤反转录-聚合酶链反应和免疫细胞化学技术对神经干细胞进行鉴定。结果：①胚胎神经干细胞及其分化细胞的抗原表达：血清诱导8h，分化细胞中（8．9&;#177;5．6）％细胞呈Tubulin阳性，（87．5&;#177;7．4）％细胞胞浆呈胶质纤维酸性蛋白阳性表达。未诱导细胞近100％呈巢蛋白阳性，仅有极少数细胞Tubulin阳性或胶质纤维酸性蛋白阳性。②胚胎神经干细胞的细胞周期：从小鼠胚胎大脑获取的神经干细胞3d左右进入指数生长期；原代培养细胞83．8％处于静止期／DNA合成前期。③原代与传代细胞均表达巢蛋白mRNA，聚集形成的神经球巢蛋白阳性。血清诱导4h胚胎神经干细胞开始转录神经元相关基因Tau和胶质细胞相关基因胶质纤维酸性蛋白。结论：从小鼠胚胎大脑可成功分离获得大量胚胎神经干细胞．并在含碱性成纤维细胞生长因子的条件培养基中迅速增殖，血清诱导下分化生成神经元和星型胶质细胞。     

小鼠胚胎胰腺移植治疗糖尿病

背景：胚胎胰腺组织具有来源广泛,β细胞增殖分化能力强,低免疫排斥性等优点。目的：探索小鼠胚胎胰腺组织的分离技术,观察其对糖尿病模型小鼠的血糖调节作用。方法：体视显微镜下分离E11.5~E16.5C57BL/6小鼠胰腺组织。链唑霉素诱导雄性C57BL/6小鼠建立糖尿病模型,随机分为2组：移植组模型小鼠肾被膜下移植5个E16.5胰腺组织,假手术组模型小鼠肾被膜下注入0.05mLRPMI1640培养液。移植组小鼠血糖水平≤11.2mmol/L后,利用IPGTT和IPITT方法检测移植后胚胎胰腺组织的内分泌功能,并摘除移植物观察血糖变化。结果与结论：体视显微镜下可分离出较完整的E11.5~E16.5小鼠胰腺组织,≤E12.5d小鼠胚胎胰腺组织的形态和颜色均难以与周围组织分辨,需根据其与毗邻脏器的关系仔细辨别;〉E12.5d的小鼠胚胎胰腺已初具形态,颜色略发白。组织学和ELISA分别显示胚胎胰腺组织可表达并分泌胰岛素,其表达强度随发育时间逐渐增加。E16.5小鼠胰腺组织移植能有效地控制受体的血糖水平,使受体的体质量和糖耐量恢复正常;胚胎胰腺在受体的肾被膜下可生长发育,摘除的移植物胰岛素和胰高血糖素的表达均较移植前增强。说明胚胎胰腺组织可能成为治疗糖尿病的种子来源。     

脑缺血大鼠尾壳核神经元型一氧化氮合酶免疫阳性神经元的细胞构筑

目的：观察大鼠尾壳核一氧化氮合酶神经元的分布，以及脑缺血后其免疫阳性神经元细胞构筑学的变化。 方法：实验于2004／2005在南方医科大学和暨南大学进行。取36只SD大鼠随机分为对照组和脑缺血组，每组18只。脑缺血组用双侧颈总动脉阻塞法建立脑缺血模型，对照组行假手术，不结扎颈总动脉。分别于造模后3，7，30d处死动物取材，每个时间点6只。ABC法显示神经元型一氧化氮合酶神经元，图像分析系统测尾壳核阳性神经元数目和大小（神经元以〉25μm为大型，25～15μm为中型，〈15μm为小型）。 结果：经补充后36只大鼠进入结果分析。④神经元型一氧化氮合酶阳性神经元大小和分布不均一，尾壳核背外侧胞体相对较小，数目较多，而腹内侧体积虽大，但较稀疏。②神经元型一氧化氮合酶阳性神经元数目：对照组各时间点无明显变化，脑缺血组缺血后7，30d显著低于对照组（P〈0．01）。③神经元型一氧化氮合酶阳性神经元大小：对照组以中型细胞为主，其次为小型神经元，大型细胞少，三类神经元在不同的时期比例恒定。脑缺血组在缺血后3和7d，中小型神经元变化较明显，其中大型和中型神经元逐渐下降，在缺血30d时中型神经元比例显著低于对照组和缺血后3，7d（P〈0．01），而小型神经元比例显著高于对照组和缺血后3，7d（P〈0．01）。 结论：脑缺血后尾壳核神经元型一氧化氮合酶阳性神经元减少，而且中型细胞减少为主，小型细胞所占比例相对增多。     

小鼠胚胎胰腺移植治疗糖尿病

背景：胚胎胰腺组织具有来源广泛,细胞增殖分化能力强,低免疫排斥性等优点。 目的：探索小鼠胚胎胰腺组织的分离技术,观察其对糖尿病模型小鼠的血糖调节作用。 方法：体视显微镜下分离E11.5~E16.5 C57BL/6小鼠胰腺组织。链唑霉素诱导雄性C57BL/6小鼠建立糖尿病模型,随机分为2组：移植组模型小鼠肾被膜下移植5个E16.5胰腺组织,假手术组模型小鼠肾被膜下注入0.05 mL RPMI1640培养液。移植组小鼠血糖水平≤11.2 mmol/L后,利用IPGTT和IPITT方法检测移植后胚胎胰腺组织的内分泌功能,并摘除移植物观察血糖变化。 结果与结论：体视显微镜下可分离出较完整的E11.5~E16.5小鼠胰腺组织,≤ E12.5 d小鼠胚胎胰腺组织的形态和颜色均难以与周围组织分辨,需根据其与毗邻脏器的关系仔细辨别;> E12.5 d的小鼠胚胎胰腺已初具形态,颜色略发白。组织学和ELISA分别显示胚胎胰腺组织可表达并分泌胰岛素,其表达强度随发育时间逐渐增加。E16.5小鼠胰腺组织移植能有效地控制受体的血糖水平,使受体的体质量和糖耐量恢复正常;胚胎胰腺在受体的肾被膜下可生长发育,摘除的移植物胰岛素和胰高血糖素的表达均较移植前增强。说明胚胎胰腺组织可能成为治疗糖尿病的种子来源。     

小鼠胚胎胰腺移植治疗糖尿病(英文)

背景:胚胎胰腺组织具有来源广泛,β细胞增殖分化能力强,低免疫排斥性等优点。目的:探索小鼠胚胎胰腺组织的分离技术,观察其对糖尿病模型小鼠的血糖调节作用。方法:体视显微镜下分离E11.5~E16.5C57BL/6小鼠胰腺组织。链唑霉素诱导雄性C57BL/6小鼠建立糖尿病模型,随机分为2组:移植组模型小鼠肾被膜下移植5个E16.5胰腺组织,假手术组模型小鼠肾被膜下注入0.05mLRPMI1640培养液。移植组小鼠血糖水平≤11.2mmol/L后,利用IPGTT和IPITT方法检测移植后胚胎胰腺组织的内分泌功能,并摘除移植物观察血糖变化。结果与结论:体视显微镜下可分离出较完整的E11.5~E16.5小鼠胰腺组织,≤E12.5d小鼠胚胎胰腺组织的形态和颜色均难以与周围组织分辨,需根据其与毗邻脏器的关系仔细辨别;>E12.5d的小鼠胚胎胰腺已初具形态,颜色略发白。组织学和ELISA分别显示胚胎胰腺组织可表达并分泌胰岛素,其表达强度随发育时间逐渐增加。E16.5小鼠胰腺组织移植能有效地控制受体的血糖水平,使受体的体质量和糖耐量恢复正常;胚胎胰腺在受体的肾被膜下可生长发育,摘除的移植物胰岛素和胰高血糖素的表达均较移植前增强。说明胚胎胰腺组织可能成为治疗糖尿病的种子来源。