3种血小板生成的关键因子共转染人骨髓基质细胞的研究

目的构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,并观察其在共转染的人骨髓基质细胞中的表达情况。方法应用基因重组技术,构建TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体,在脂质体介导下将其导入体外培养的人骨髓基质细胞内,24 h后观察TPO、IL-6、IL-11瞬时表达情况、蛋白含量及表达,并与未转染组、空载体转染组做对比。结果 1)酶切及测序结果均可证实TPO-pEGFP-N1、IL-6-pcDNA3.1(+)、IL-11-pcDNA3.1(-)3个真核表达载体的正确性。2)细胞转染24 h后,荧光显微镜下可观察到pEGFP-N1的表达,25%细胞发出绿色荧光;免疫细胞化学染色检测出IL-6及IL-11转染后能在细胞内表达。3)转染48 h后,Western blot检测出骨髓基质细胞内TPO、IL-6及IL-11的蛋白表达量。结论 TPO、IL-6、IL-11这3个基因可共转染人骨髓基质细胞,并在细胞内有效表达。     

体外构建人巨核祖细胞/胃癌细胞融合体生成血小板的研究

目的构建脐血巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体产生功能性血小板。方法免疫磁珠分选人脐带血CD34+细胞,通过RPMI1640培养基体外静态培养,加入定向分化因子TPO、FL、IL-3、IL-6产生巨核祖细胞;复苏胃癌SGC7901细胞;采用聚乙二醇(PEG)化学融合法制备巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体,HAT筛选系统分选融合细胞,继续培养;流式细胞仪检测培养孔上层液中类血小板颗粒表面CD41、CD62p表达,血小板聚集试验、粘附试验检测血小板功能,瑞氏染色观察颗粒形态。结果免疫磁珠分选的CD34+细胞培养7 d可增殖80倍,与胃癌SGC7901细胞株经PEG化学融合法融合成巨核祖细胞/胃癌细胞,融合率为(36.91±1.08)%;融合细胞培养10 d可增殖4倍,产生(6.1±1.21)×106/ml的类血小板颗粒;瑞氏染色后观察,其形态与正常血小板相似。类血小板颗粒表达血小板特异性标志CD41及血小板活化后标志CD62p,与正常血小板比较,CD62p在类血小板颗粒中表达略降低:正常血小板(74.11±1.71)%、类血小板颗粒(71.04±1.64)%;CD41表达明显降低:正常血小板(88.83±3.26)%、类血小板颗粒(72.51±2.79)%(t=6.59,P<0.05);聚集试验表明具有正常血小板相似的聚集功能;血小板粘附试验:正常血小板(40.43±1.63%)、类血小板颗粒(35.53±4.06%)。结论通过PEG细胞化学融合法构建的脐带血巨核祖细胞/胃癌SGC7901细胞融合体能产生功能性血小板。     

冠心病心功能不全患者高敏C-反应蛋白变化

目的分析血清高敏C-反应蛋白(high-sensitivity c-reactive protein,Hs-CRP)在冠心病心功能不全患者中的变化及意义.方法随机选取冠心病(coronary heart diease,CHD)心功能不全患者129例,其中心功能Ⅱ级60例,Ⅲ级39例,Ⅳ级30例,30例体检健康者做对照,测定血清中高敏C-反应蛋白浓度.结果冠心病心功能不全患者血清中Hs-CRP含量明显高于正常对照组(P<0.01),冠心病心功能不全组间比较相差均非常显著(P<0.01).结论血清Hs-CRP浓度与冠心病心功能不全密切相关,可作为观察冠心病患者心功能变化的指标.     

红细胞系造血调控的研究进展

红细胞是血液的重要组成部分,具有运输氧气到机体各种组织和细胞的重要生理功能。在胚胎与胎儿期,造血依次由卵黄囊、肝、脾和骨髓完成,出生后,骨髓成为主要的造血场所。红细胞生成经历了骨髓多能干细胞向红系分化以及红系祖细胞的继续分化和发育成熟等过程。多能干细胞分化为多能髓     

慢性乙型肝炎HBVPreS1-Ag和HBVDNA对比分析

本文就乙肝病毒前S1抗原(HBVPreS1-Ag)检测与HBVDNA二者之间的关系进行探讨,报告如下。1材料与方法1.1标本来源:2005~2006年本院门诊及住院患者慢性乙型肝炎血清标本358份。1.2试剂:HBVPreS1-Ag试剂盒由上海复星生物技术有限公司提供。应用双抗夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)。