性别差异对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的影响

目的探讨性别差异对脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白- 2(MD-2)基因表达的影响。方法以脂多糖(LPS)按5 mg/kg体重由大鼠腹腔注射制作脓毒症动物模型,注射后2 h留取肝脏组织检测TLR4、MD-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达,同时测定各组大鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及雌二醇含量。结果正常雌雄性大鼠肝脏组织均可表达少量TLR4、MD-2、TNF-α基因,其中雌性组分别为0．175±0．034、0．211±0．044、0．201±0．068; 雄性组分别为0．205±0．061、0．243±0．049、0．243±0．063,两组数据差异无统计学意义(P> 0．05),但LPS刺激后雌性大鼠肝脏组织上述指标分别为0．615±0．089、0．708±0．181、0．730± 0．118,血浆中ALT含量为(81．07±10．72)U／L;雄性组分别为0．723±0．091、1．123±0．272、 0．881±0．156,ALT含量为(106．39±14．21)U／L,雌性组各项指标均明显低于雄性大鼠(P< 0．05)。相关分析表明雌性及雄性脓毒症大鼠肝脏组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0．05)。结论 LPS刺激后大鼠肝脏组织TLR4、MD-2及 TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠肝脏组织损伤较雄性轻。     

雄激素对糖皮质激素所致大鼠骨骼肌萎缩的治疗作用

目的 研究睾酮对地塞米松所致大鼠骨骼肌萎缩的治疗作用以及与胰岛素样生长因子1(IGF-1)表达的关系.方法 40只雌性SD大鼠随机均分为对照组、地塞米松组、睾酮组、睾酮 地塞米松组,每日检测大鼠体重,末次给药24h后处死动物,冻存血浆标本,分离腓肠肌、称重并冻存.采用定量PCR检测腓肠肌中IGF-1 mRNA的表达,ELISA法检测血浆中IGF-1蛋白水平.结果 睾酮可减轻地塞米松所致的大鼠体重与骨骼肌重量降低(P＜0.01),拮抗地塞米松引起的骨骼肌中IGF-1 mRNA水平下降(P＜0.01),但对血浆中IGF-1蛋白水平无明显影响.结论 睾酮可减轻地塞米松所致的大鼠骨骼肌萎缩,对骨骼肌中IGF-1表达的调控可能是雄激素治疗作用的机制之一.     

蛋白酶体抑制剂在烫伤脓毒症大鼠肺脏炎症反应中的作用

目的研究干预泛素-蛋白酶体途径对烫伤脓毒症大鼠肺脏核因子-(?)B(NF-(?)B)活化、肿瘤坏死因子-α的产生以及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响。方法采用30%TBSAⅢ度烫伤加内毒素攻击大鼠为模型模拟临床烫伤脓毒症,72只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烫伤脓毒症组、烫伤脓毒症 蛋白酶体抑制剂N-Acetyl-leucinyl-leucinyl-norleucinal(ALLN)组、烫伤脓毒症 NF-(?)B抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(Pyrrolidine Dithiocarbamate．PDTC)组,采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)分析肺脏NF-(?)B活性,采用酶联免疫吸附试验检测肺脏TNF-α的变化,采用分光光度法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)的活性。结果肺组织NF-(?)B活性于伤后1h明显增强达到高峰(P＜0．01),伤后2h仍保持较高的活化水平,之后呈逐渐下降趋势。PDTC可明显降低其在伤后1h和2h的活性(P＜0．01),而ALLN可明显降低其在伤后1h的活性(P＜0．01)。PDTC两种抑制剂均可明显降低伤后2h肺组织TNF-α产生,明显降低伤后2h和6h肺组织MPO的活力(P＜0．01)。结论蛋白酶体抑制剂可降低烫伤脓毒症大鼠肺组织NF-(?)B的活性。降低肺组织的炎症反应。     

TNF-α对大鼠Leydig细胞的作用及机制研究

目的观察TNF-α对睾丸细胞功能的影响并探讨其可能机制。方法通过Percoll不连续密度梯度分离获取大鼠Leydig细胞进行原代培养。HE染色进行细胞形态学观察。Leydig细胞培养48h后在培养液中分别加入不同浓度的大鼠TNF-α,使其终浓度达到0.1、1、10、100ng/ml,分别在培养的第1、2、3、4天取上清,通过放免法测定上清液中睾酮的含量,应用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞术与丫啶橙(AO)染色检测及观察Leydig细胞凋亡情况。结果原代细胞通过提纯后的细胞纯度可达70%~80%。HE染色后可见细胞胞质含量丰富,含有分泌颗粒,胞核圆。TNF-α在0.1~100ng/ml浓度范围内能呈剂量依赖的方式抑制Leydig细胞睾酮的基础分泌。0.1、1、10、100ng/mlTNF-α作用24h后,对Leydig细胞睾酮分泌量的抑制率分别为22.03%、34.98%、52.95%、74.83%。各组Leydig细胞睾酮的分泌量随时间延长呈减少的趋势,但除100ng/ml组外,其他各组各时间点比较差异无统计学意义。高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组具有抑制Leydig细胞增殖和促进其凋亡作用,其增殖抑制率分别达到38.35%±4.17%、76.35%±8.65%,而凋亡率分别为13.23%±1.11%、26.43%±5.82%,与对照组比较有统计学意义(P<0.01)。AO染色见高浓度TNF-α(10、100ng/ml)组出现明显的细胞凋亡。结论TNF-α对Leydig细胞睾酮的基础分泌具有抑制作用,在较高浓度时该作用可能与其抑制Leydig细胞增殖并促进细胞凋亡有相关。     

烧伤、冲击伤及烧冲复合伤后大鼠早期血清中性粒细胞弹性蛋白酶的变化及意义

Objective To explore the early changes in serum neutrophil elastase(NE) in rats with burn.blast injury or combined bum-blast injury and its significance.Methors A total of 176 male Spragne Dawley rats were randomly divided into four groups:control(C),burn(BU),blast injury(BL) and burn-blast combined injury(BB).Rats in C group were not injured.Animals in BU group were subjected to 25% TBSA full-thickness burn on back with 94℃ water for 12 seconds;Animals in BL group were inflicted with moderate blast injury with 5g 8701 compressed dynamite stick as the explosion source 75 cm away while left chest facing the explosive source;Rats in BB group were burned immediately after the blot injury similarly as in BL group.During the first 24 h post-injury,animals in BU and BB groups received intraperitoneal bronchoalveolar lavage fluid(BALF),water content of lung tissue and NE content in serum were determined at 0 h(C group),3 h,6 h,12 h,1 d,2 d,3 d,7 d post-injury.Results Protein concentration in BALF,water content of lung tissue and NE content in serum in SD rats of the injured groups were significantly higher than those in C group(P＜0.01 or P＜0.05),peaked within 2 d post-injury,especially at 2 d post-injury(NE content in serum:BU group,319.85±19.50,ng/ml;BL group,467.43±31.64 ng/ml;BB group,626.00±26.38 ng/ml vs.C group,78.53±25.10 ng/ml).Overall,protein concentration in BALF.water content of lung tissue and NE content in serum in BB group were significantly higher than BU and BL groups(P＜0.01 or P＜0.05).Correlation analysis showed that within 3 d post-injury.a significant positive correlation was found between the protein concentration in BALF,water content of lung tissue and NE content in serum(r=0.7910,0.8078,P＜0.05) in BU group.NE content in serum and protein concentration in BALF were significantly positively correlated in BB group(r=0.8672,P＜0.05).Conclusion NE may play an important role in early lung injury of burn or blast injury,especially in combined bum-blast injury.     

泛素-蛋白酶体途径在烧伤脓毒症大鼠肝脏NF-κB活化中的作用研究

目的　研究泛素 蛋白酶体途径对烧伤脓毒症大鼠肝脏NF κB的活性和IκB α含量以及肝脏TNF α表达的影响。方法　采用 30 %TBSAⅢ度烫伤加内毒素攻击大鼠为模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 0只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 蛋白酶体抑制剂ALLN处理组、烧伤脓毒症 NF κB抑制剂PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,采用免疫印迹方法检测肝脏IκB α表达 ,采用酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α的变化。结果　NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ,IκB α表达先减少后逐渐恢复 ,应用泛素系统抑制剂可以抑制IκB α在肝脏中的降解 ,而采用蛋白酶体抑制剂和NF κB抑制剂均可降低肝脏NF κB的活性和减少TNF α的释放。结论　表明烫伤脓毒症大鼠肝脏NF κB活性明显增强 ,而干预泛素 蛋白酶体途径可通过抑制IκB α降解实现对肝脏中NF κB活性的调控。     

NF-κB在烧伤脓毒症大鼠肝损伤中的作用

目的　研究NF κB在烧伤脓毒症大鼠急性肝损害中的作用。方法　采用 30 %Ⅲ度烫伤加内毒素攻击大鼠模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 3只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 +NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC)组、单纯PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,免疫印迹 (Westernblotting)法检测肝脏IκB α表达 ,酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α含量的变化。结果　NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ;IκB α表达先减少 (P <0 0 5 )后逐渐恢复 ;NF κB抑制剂PDTC可以降低NF κB的活性和减少TNF α的释放 ,同时明显降低血清ALT、AST含量。结论　抑制NF κB活性有助于减轻烧伤脓毒症时肝脏的急性损害。     

负压创面疗法应用于深Ⅱ度烧伤创面的临床观察

目的研究负压创面疗法（NPWT）对于深Ⅱ度烧伤创面的治疗作用。方法采用NPWT治疗19例患者,共22个深Ⅱ度烧伤创面。观察坏死组织清除情况,记录伤后10、14、21、28d创面愈合率和创面完全愈合时间。结果NPWT治疗后,观察的22个创面中有18个创面的坏死组织被全部清除,其余4个创面表面坏死组织被部分清除。创面愈合率在伤后10、14、21、28d分别为（444-27）％,（69±28）％,（90±13）％,（100±0）％。创面完全愈合时间为（20．1±4．9）d,1个创面最后通过手术封闭,其余创面均通过换药愈合。结论NPWT具有加速深Ⅱ度创面愈合的作用,对坏死组织有效地清除可能是其重要机制之一。     

激光微孔猪脱细胞真皮基质制备及创面移植的观察

目的 制备激光微孔猪脱细胞真皮基质（PADM），寻找其与自体刃厚皮复合移植的最佳孔间距。方法 采用胰蛋白酶法制备PADM，用激光加工机打孔，制备孔间距为0．8、1．0、1．2、1．5mm的激光微孔PADM。在144只SD大鼠背部制作全层皮肤缺损创面，分为微孔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组，依次采用前述4种孔间距的激光微孔 PADM＋自体刃厚皮移植；网状组采用网状PADM＋自体刃厚皮移植；对照组单纯移植自体刃厚皮。每组24只大鼠。观察移植后2、4、6周各组创面愈合情况，计算移植物成活率和创面收缩率，并行组织学观察。结果 移植后2、4周，微孔Ⅰ、Ⅱ组移植物成活率均低于对照组（P〈0．05），但与网状组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；移植后6周，微孔Ⅰ、Ⅱ组成活率明显高于网状组（P〈0．05）。移植后4、6周微孔Ⅰ、Ⅱ组创面收缩率较对照组显著降低（P〈0．05），移植后6周[（16．0±2．6）％、（15．1±2．4）％]明显低于网状组[（19．3±2．4）％，P〈0．05]。组织学观察见各微孔组上皮化良好，胶原纤维排列整齐，基底膜结构完整。结论 孔间距为0．8mm或1．0mm的激光微孔PADM与自体刃厚皮复合移植可提高创面修复质量，其中孔间距1．0mm效果最佳。     

胰岛素强化治疗对严重烫伤大鼠血清凋亡配体的作用

目的 了解大鼠严重烫伤后血清凋亡相关配体的变化及胰岛素强化治疗的作用.方法 将150只Wistar大鼠随机分为假伤组、烫伤组和治疗组.烫伤组和治疗组烫伤后立即腹腔注射等渗盐水40 mL/kg复苏;治疗组伤后24 h皮下注射胰岛素0.25 U/100 g,以后每12小时注射1次,共注射5 d.第1～5天的剂量分别为0.25、0.50、0.75、1.00、1.25 U/100 g,将大鼠血糖控制在3～6 mmol/L.假伤组浸入37℃温水假伤后不进行液体复苏.于伤后1、4、7、10、14 d抽取各组大鼠腹主动脉血,采用酶联免疫吸附测定法检测血清TNF-α、可溶性Fas配体(sFasL)、可溶性Fas受体(sFas);放射免疫法检测血清胰岛素水平.结果 烫伤组大鼠伤后1 d血清TNF-α水平[(30.9±8.7)ng/L]即达高峰,与假伤组[(12.7±2.8)ng/L]和治疗组[(16.8±4.7)ng/L]比较,差异有统计学意义(P<0.01),以后逐渐下降;治疗组大鼠伤后血清TNF-α水平虽然有所上升,但在伤后7 d内明显低于烫伤组(P<0.01).烫伤组、治疗组大鼠血清sFasL分别在伤后7～14 d和4～10 d高于假伤组(P<0.05),此后逐渐恢复至正常水平.伤后4～10 d治疗组sFas水平明显高于烫伤组及假伤组(P<0.05).伤后7、10 d烫伤组大鼠血清sFasL与sFas比值高于假伤组,而治疗组则在伤后7 d低于烫伤组(P<0.05),伤后14 d 2组均接近正常水平.烫伤组大鼠血清胰岛素水平在伤后4～10d低于假伤组(P<0.05).治疗组从伤后第1天起血清胰岛素水平即显著升高,伤后4 d[(327±15)μU/mL]达高峰,并显著高于假伤组[(42±15)μU/mL,P<0.01]和烫伤组[(28±10)μU/mL,P<0.01],随着治疗的进行,该指标逐渐恢复到正常水平.结论 胰岛素可能通过调节凋亡配体的分泌而抑制烧伤后细胞凋亡.