可溶性CD40配体对HL-60细胞增殖影响及其机制探讨

目的 Survivin和IL-8在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)等多种恶性肿瘤中高表达,与白血病的治疗效果及预后密切相关.本研究分析可溶性CD40配体(soluble CD40L,sCD40L)对人白血病HL-60细胞增殖的影响,探讨其可能作用机制.方法 2、4和6 μg/mL 3组不同浓度的sCD40L作用HL-60细胞24、48和72 h,采用MTT法检测sCD40L孵育HL-60细胞体外增殖的影响;通过RT-PCR检测sCD40L对HL-60细胞Survivin mRNA表达的影响;采用ELISA测定sCD40L对HL-60细胞分泌IL-8的影响.结果 sCD40L 3组不同浓度(2、4和6μg/mL)均能显著抑制HL-60细胞增殖,并呈剂量依赖关系,不同浓度之间差异有统计学意义,F＝ 150.076,P＜0.05;不同时间之间差异有统计学意义,F＝ 358.969,P＜0.05.在24、48和72 h,以作用48 h时抑制效果最明显.RT-PCR检测结果显示,以6.00 μg/mL的sCD40L作用时SurvivinmRNA表达量最低,时间以作用48 h时HL-60细胞中SurvivinmRNA表达量最低,其表达量为89.7±6.2,与As2 O3阳性对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05.ELISA检测结果显示,以6.00 μg/mL的sCD40L作用时IL-8表达量最低,时间以作用48 h时HL-60细胞中IL-8表达量最低,其表达量为380.2±29.5,与As2 O3阳性对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05.结论 sCD40L在体外能够明显抑制HL-60细胞增殖,具有浓度依赖性,且与作用时间有关.sCD40L抑制HL-60细胞增殖与Survivin及IL-8表达相关,并可能与其下调有关.     

可溶性CD40配体对白血病THP-1细胞的影响及机制

目的分析可溶性CD40配体(sCD40L)对人白血病急性单核细胞白血病细胞(THP)-1细胞凋亡、周期的作用及B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、半胱天冬酶(caspase)-3表达的影响。方法流式细胞术(FCM)检测白血病HL-60细胞凋亡、周期,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测sCD40L处理THP-1细胞后Bcl-2及caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果sCD40L处理THP-1细胞48 h后,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低,caspase-3 mRNA和蛋白表达显著增高(P0.05)。诱导细胞的凋亡,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 sCD40L在体外能够诱导细胞凋亡,阻滞THP-1细胞在G0/G1期,其可能机制是通过下调Bcl-2及激活caspase-3而实现。     

可溶性CD40配体通过长链非编码RNA linc00239对THP-1细胞生物学行为的影响

目的：探讨CD40配体(CD40L)通过长链非编码RNA (lncRNA)linc00239对人单核细胞白血病THP-1细胞生物学行为的影响,阐明其可能的作用机制。方法：构建linc00239过表达载体(pcDNA-linc00239)和干扰载体(sh-linc00239),转染至THP-1细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测转染效率。THP-1细胞分为对照组、空载体(vector)组、pcDNA-linc00239组、sh-linc00239组、 vector+CD40L组、 pcDNA-linc00239+CD40L组和sh-linc00239+CD40L组。RT-qPCR法检测各组细胞中linc00239表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,RT-qPCR法和Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2关联X蛋白(Bax) mRNA和蛋白表达水平,Western blotting法检测各组细胞中蛋白激酶B (AKT)和磷酸化AKT (p-AKT)蛋白表达水平并...     

大型公立医院在基层卫生人才培养中的作用实践:以遵义医学院附属医院为例

以遵义医学院附属医院为例,通过查阅相关资料及现场调研等方式了解贵州省基层卫生人才现状,客观全面分析其基层医疗卫生人才数量、质量、结构及培训需求等,按照长远发展与当前需求相结合的原则,根据新医改对公立医院的要求,结合医院实际开展的住院医师及全科医师规范化培训、基层骨干医师培训及县级医院院长管理培训、对口帮扶、医院托管帮扶、双向转诊帮扶等多种方式的培训工作,以探索大型公立医院在基层卫生人才培养中的作用,取得了显著效果,为提升贵州省基层医疗卫生服务效能做了一些贡献。     

显微数码互动实验室在血液形态工作人员内部比对中的应用

目的探讨显微数码互动实验室在血液形态工作人员内部比对中的应用价值。方法以检验科血液室10例工作人员为研究对象,均分类5张不同的骨髓片,分别采用普通显微镜独自分类和使用显微数码互动实验室集体分类,比较2种方法的检测结果,并讨论2种比对方法的优缺点。结果利用显微数码互动实验室进行血液形态工作人员比对方法比常规独自分类进行比对更客观,更能反映血液形态工作人员的真实水平。结论显微数码互动实验室在血液形态工作人员内部的比对具有重要的临床作用,值得在血液室推广与应用。     

可溶性CD40配体对K562细胞增殖及生存素mRNA和IL-8表达的影响

目的探究可溶性CD40配体(s CD40L)对人白血病K562细胞增殖、生存素(survivin)m RNA表达和白介素8(IL-8)表达水平的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测s CD40L对K562细胞增殖的影响,通过RT-PCR检测survivin m RNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IL-8表达情况。结果不同浓度的s CD40L(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/m L)对K562细胞增殖均有抑制作用,且可降低survivin m RNA及IL-8的表达水平;s CD40L细胞组细胞增殖抑制率高于K562细胞组,survivin m RNA及IL-8表达水平均低于K562细胞组,差异均有统计学意义(P<0.05),且呈剂量-时间依赖性。结论 s CD40L在体外能够明显抑制K562细胞增殖,具有剂量-时间依赖性,s CD40L抑制K562细胞增殖可能与survivin m RNA及IL-8表达水平下调相关。     

尾静脉注射THP-1细胞构建急性髓系白血病NOD/SCID小鼠模型及其鉴定

目的:应用THP-1细胞构建NOD/SCID小鼠白血病模型。方法:将18只3-4周龄的雌性NOD/SCID小鼠,随机分为对照、模型A和模型B 3组(每组6只)。接种前连续2 d每只小鼠给予腹腔注射环磷酰胺2 mg/(kg·d),预处理后于24 h内接种细胞。模型组分别经尾静脉接种对数生长期THP-1细胞悬液1×10^7/只(A组)、5×106/只(B组),对照组鼠尾静脉注射等剂量生理盐水。观察一般情况,预处理前、接种细胞后7、14、21和28 d及处死时进行血常规检测、外周血白细胞分类,濒死前处死取材,组织切片病理检查。结果:模型组小鼠分别于接种细胞d 7和d 10开始出现竖毛、萎靡少动等现象,与对照组比较,模型A和B 2组小鼠体重于接种细胞21 d后明显下降(P<0.01),建模28 d后模型组白细胞数明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),其中以接种1×10^7/只的模型A组最为显著。病理组织切片结果提示,模型组小鼠脾脏均可见白血病细胞弥漫性浸润。免疫组织化学结果提示,白血病细胞抗人CD13结果阳性,证实模型建立成功。结论:NOD/SCID小鼠经腹腔注射CTX预处理后,每只小鼠尾静脉注射THP-1细胞1×10^7或5×10^6个均可成功构建急性髓系白血病动物模型,符合急性髓系白血病的生物学特点,高浓度成瘤更快。