以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对NCI-H446细胞生物学特性的影响

背景与目的:miRNAs是一类小分子RNA,参与转录后调控.前期研究结果显示,hsa-miR-491-3p在肺痛和肾痛组织中高表达,目前鲜见其功能研究的报道.本研宄旨在探讨以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生物学特性的影响.方法:合成以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸和随机对照序列,转染NCI-H446细胞.实验分4组:空白对照组(组1)、空白转染组(组2) ⑺婊?对照组(组3)和反义寡核苷酸组(组4).用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,Hoechst33258染色检测细胞核的形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化,划痕实验检测细胞的迁移能力.结果:转染反义寡核苷酸后细胞生长受到抑制,最佳作用浓度为0.5 μmol/L.Hoechst33258染色各组的凋亡率分别为(6.67±0.58)%、(7.00±1.00)%、(6.67±1.53)%和(26.33±1.53)%,组4的凋亡率明显高于前3组,差异有统计学意义(P<0.001).流式细胞仪检测各组的凋亡率分别为(2.44±0.60)%、(2.59±0.85)%、(2.62±1.11)%和(5.22±0.40)%,组4的凋亡率明显高于前3组,差异有统计学意义(P<0.01),且G1期细胞增多,S期细胞减少.划痕实验显示各组细胞24 h的迁移距离分别为(196.88±39.13)、(163.06±21.28)、(225.49±23.42)和(77.41±6.07)μ m,组4细胞的迁移距离小于前3组(P<0.05),迁移能力减弱.结论:以hsa-miR-491-3p为靶标的反义寡核苷酸能够抑制NCI-H446细胞增殖,诱导其凋亡,并降低其侵袭能力.     

PCR-HRM分析筛查成骨不全一家系患儿基因突变

【摘要】目的 采用PCR-高分辨率熔解曲线（HRM）分析筛查成骨不全（OI）一家系患儿（先证者）COL1A1基因突变位点,探讨其基因型与临床表型的联系。方法对先证者进行家族史及临床资料的调查,采集先证者、家属及 50名正常对照者血液标本,应用PCR-HRM分析筛查先证者及正常对照者COL1A1基因突变,基因测序确证突变位点。结果先证者COL1A1基因17外显子筛查结果异常,其熔解温度（Tm）值比正常对照者Tm值低约0.4℃。先证者与正常对照者的标准熔解曲线及差异熔解曲线均有明显差异。测序结果为c.1138G>A,突变导致380位氨基酸由甘氨酸（Gly）变成丝氨酸（Ser）：p.（Gly380Ser）,为错义突变。先证者父亲、祖母均具有相同突变位点。先证者母亲及正常对照者基因测序结果无此突变。该突变在中国人群中未见报道。该家系遗传特征为常染色体显性遗传,先证者临床诊断为Ⅳ型OI,临床表型较严重。结论PCR-HRM分析是有效的OI基因筛查新方法。COL1A1基因 c.1138G>A突变在中国人群中为新发现的突变位点。α螺旋结构域Gly被替换可能导致较严重的临床表型。 COL1A1     

高敏化学发光法在输血患者梅毒筛查中的应用评价

目的评价高敏化学发光法(high sensitivity chemiluminescence enzyme immunoassay,HISCL)在骨科输血患者梅毒特异性抗体检测中的应用价值。方法收集本院住院及门诊患者应用HISCL和明胶颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination,TPPA)两种方法检测的样本,分析两种方法检测结果的符合率。对两种方法结果不一致的样本采用免疫印迹法(Recombinant immunoblot assay,RIBA)进行确认。采用标准血清盘进行梅毒特异性抗体血清敏感性试验。结果 HISCL法与TPPA法的阴性符合率为100%,阳性符合率97.56%,总符合率99.29%;HISCL检测结果COI值与TPPA法效价相关性分析,r=0.959,P<0.05,表明二者密切相关;以TPPA方法为确证标准,评价HISC L法的灵敏度、特异性、阳性预测值,阴性预测值分别为97.56%、100%、100%、99.01%;对两种方法检测结果不符合的6例样本采用重组免疫印迹试验(RIBA)进行确认,结果表明HISCL法与RIBA法结果的符合率(4/6)高于TPPA法(1/6);通过血清盘检测,二种方法对梅毒抗体检测的灵敏度、特异性一致。而TPPA方法相对而言操作繁琐、耗时长、结果的判读易受主观因素影响,HISCL法则是全自动检测,每个测试只需要17min就可完成。结论 HISCL与TPPA两种方法在梅毒特异性抗体筛查上性能相近,HISCL法更加适合于患者手术及输血前的快速筛查。     

血清RF、 anti-CCP及14-3-3η蛋白联合检测对类风湿关节炎的诊断价值

目的 评价血清抗环瓜氨酸肽抗体 （anti-CCP）、 类风湿因子 （RF） 及14-3-3η蛋白联合检测对类风湿关节炎 （RA） 的诊断价值。方法 选取RA患者94例作为RA组， 年龄、 性别相匹配的疾病对照组和健康对照组各40例。采用酶联免疫吸附试验检测所有受试者的血清14-3-3η和anti-CCP， 散射免疫比浊法检测RF水平。将以上3个指标分别进行串联和并联试验， 采用敏感度、 特异度、 阳性预测值、 阴性预测值、 准确度及约登指数 （YI） 分析各试验方案对RA的诊断效能。结果 在anti-CCP、 RF及14-3-3η蛋白3个指标中， anti-CCP的准确度 （87.4%）、 YI （0.753） 最高， 同时敏感度 （84.0%） 也最高， 是最好的RA诊断指标； 双项目检测方案中， anti-CCP与RF并联的准确度 （87.4%） 和 YI （0.742） 最高， 同时敏感度 （90.4%） 也较高， 是较为理想的组合； 三项目检测方案中，［（14-3-3η+anti-CCP） /RF］、［（14-3-3η+RF） /anti-CCP］、［（14-3-3η/RF） +anti-CCP］ 和 ［（14-3-3η+anti-CCP） / （14-3-3η+RF） / （anti-CCP+RF）］ 的准确度 （87.4%、 87.9%、 87.4%、 87.9%） 及YI （0.745、 0.756、 0.757、 0.760） 在联合检测方案中较高， 而 ［（14-3-3η+anti- CCP） /RF］、［（14-3-3η+RF） /anti-CCP］ 和 ［（14-3-3η+anti-CCP） / （14-3-3η+RF） / （anti-CCP+RF）］ 的敏感度 （88.3%、 89.4%、 87.2%） 较 ［（14-3-3η/RF） +anti-CCP］ 的敏感度 （81.9%） 高， 是较为理想的组合。结论 在anti-CCP、 RF及14- 3-3η蛋白3个指标中， anti-CCP准确度、 YI和敏感度最高。联合检测方案 ［（14-3-3η+ anti-CCP） /RF］、［（14-3-3η+ RF） /anti-CCP］、［（14-3-3η+anti-CCP） / （14-3-3η+RF） / （anti-CCP+RF）］ 的准确度和YI较高， 兼有较高的敏感度。