腺病毒介导的热休克蛋白70对脑缺血缺氧大鼠保护作用的研究

热休克蛋白(HSP)是生命体在高温、发热、缺血、缺氧、病毒感染以及炎症等不良环境因素作用下所产生的一组蛋白质,能保护机体或细胞不受或少受伤害,这一反应过程称为热休克反应[J].研究证明,采用基因工程技术诱导HSP70高效表达对心、肺、肠等器官的损伤有保护作用[2-4].本课题组前期成功构建了携带HSP70编码基因的重组腺病毒表达载体,并在体外研究中观察到其对神经细胞的缺血缺氧损伤具有保护作用[5].在此基础上,本研究中将重组腺病毒载体通过尾静脉注入脑缺血缺氧大鼠体内,观察重组腺病毒介导的外源性HSP70表达对脑缺血缺氧大鼠的保护效应,有望为脑缺血缺氧的防治提供可行性的基因治疗途径.     

外源性白蛋白输注对早期急性呼吸窘迫综合征肺毛细血管蛋白渗漏的影响

目的 初步探讨急性期急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者补充外源性白蛋白对血清白蛋白(Alb)水平的影响,及血清Alb水平与肺毛细血管蛋白渗漏严重程度的相关性.方法 将60例急性期ARDS患者按入院先后顺序随机分为两组,每组30例.治疗组患者于确诊后1 d给予人血白蛋白20 g/d静脉输注,连续3 d,其他治疗方案与对照组相同.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者治疗前后血清Alb和C-反应蛋白(CRP)水平;并于ARDS诊断第3日进行支气管肺泡灌洗,采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中Alb水平.比较两组患者治疗前后血清Alb及CRP水平,分析毛细血管蛋白渗漏程度与血清Alb水平的相关性.结果 与对照组比较,治疗组患者治疗后血清Alb水平(g/L)明显升高(30.86±3.05 比 28.01±2.19),CRP水平(mg/L)明显降低(65.98±31.80 比 86.00±25.41),差异均有统计学意义(均P＜0.05).治疗组患者BALF中Alb水平(g/L)明显低于对照组(1.504±0.495比1.790±0.389,P＜0.05).血清Alb水平与BALF中Alb水平呈显著负相关(r=-0.701,P＜0.05).结论 早期给予ARDS患者外源性白蛋白输注,可以有效维持患者血清Alb水平,遏制蛋白从肺毛细血管漏出.     

改进传代诱导法高效诱导人胚胎干细胞定向分化为内胚层细胞

目的 比较不同诱导方法将人类胚胎干细胞(hESCs)诱导分化为纯度较高的人类内胚层细胞的分化效率,探寻最佳的分化体系.方法 用两种不同诱导方法培养人类胚胎干细胞(hESCs)H9细胞株,第1组采用最新改进的体外传代诱导方法,用IV型胶原酶消化成团的hESCs为单个hESC细胞后,使用含有100 ng/ml的胚胎干细胞诱...     

外源性白蛋白输注治疗急性呼吸窘迫综合征临床观察

急性呼吸窘迫综合征( acute respiratory distress syndrome,ARDS)是由全身炎症反应综合征所致,以肺毛细血管渗漏为主要病理生理特征的综合征.ARDS患者多伴发低蛋白血症,对于危重病患者而言,低蛋白血症是一个潜在的、独立的不良预后指标[1].临床上,常采用输注外源性白蛋白来纠正患者的低蛋白血症.我们通过对急性期ARDS患者输注外源性人血白蛋白,观察患者血清和支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)中白蛋白水平的变化,并观察两组患者治疗前后的各项临床指标及患者的预后,从而指导外源性白蛋白在急性期ARDS患者中的应用.     

腺病毒介导HSP70对大鼠缺血低氧脑组织保护作用

目的探讨外源性热休克蛋白70(HSP70)表达对脑缺血低氧模型大鼠脑组织保护作用。方法小鼠尾静脉注射携带全长HSP70基因vAd-HSP70,采用RT-PCR方法分别检测注射24、487、2 h后脑组织HSP70mRNA的转录水平。大鼠随机分为缺血低氧组(HI组)、vAd-HSP70静脉注射转染缺血低氧组(vAd-HSP70组,静脉注射转染vAd-HSP70的48 h后予缺血低氧处理)和正常对照组(NC组),各25只。用免疫组织化学技术对各组2、24、487、2 h及7 d脑组织中HSP70蛋白表达进行检测。结果小鼠尾静脉注射含HSP70重组腺病毒后可检测到HSP70基因的有效表达,且在注射48 h后表达水平最高,与247、2 h比较有显著性(F=18.58,P<0.05)。缺血低氧后大鼠脑组织中HSP70的水平增高,在缺血低氧后24 h达高峰,并在24~48 h内维持较高水平,以后逐渐下降。vAd-HSP70组HSP70各时间点的表达水平均高于HI组,在2、48、72 h差异有显著意义(F=85.36~866.67,q=6.71~88.43,P<0.05)。病理学检测显示HI组大鼠脑组织有较严重的缺血损伤性改变,vAd-HSP70组大鼠脑组织损伤较轻。结论外源性HSP70可在大鼠脑组织有效表达,并可减轻脑缺血低氧后病理损伤,对大鼠缺血低氧性脑损伤具有保护作用。     

腺病毒介导HSP70对大鼠缺血低氧脑组织保护作用

目的探讨外源性热休克蛋白70（HSP70）表达对脑缺血低氧模型大鼠脑组织保护作用。方法小鼠尾静脉注射携带全长HSP70基因vAd-HSP70,采用RT-PCR方法分别检测注射24、487、2 h后脑组织HSP70mRNA的转录水平。大鼠随机分为缺血低氧组（HI组）、vAd-HSP70静脉注射转染缺血低氧组（vAd-HSP70组,静脉注射转染vAd-HSP70的48 h后予缺血低氧处理）和正常对照组（NC组）,各25只。用免疫组织化学技术对各组2、24、487、2 h及7 d脑组织中HSP70蛋白表达进行检测。结果小鼠尾静脉注射含HSP70重组腺病毒后可检测到HSP70基因的有效表达,且在注射48 h后表达水平最高,与247、2 h比较有显著性（F=18.58,P〈0.05）。缺血低氧后大鼠脑组织中HSP70的水平增高,在缺血低氧后24 h达高峰,并在24~48 h内维持较高水平,以后逐渐下降。vAd-HSP70组HSP70各时间点的表达水平均高于HI组,在2、48、72 h差异有显著意义（F=85.36~866.67,q=6.71~88.43,P〈0.05）。病理学检测显示HI组大鼠脑组织有较严重的缺血损伤性改变,vAd-HSP70组大鼠脑组织损伤较轻。结论外源性HSP70可在大鼠脑组织有效表达,并可减轻脑缺血低氧后病理损伤,对大鼠缺血低氧性脑损伤具有保护作用。     

生肌玉红膏对血栓性脉管炎大鼠血管平滑肌细胞凋亡、炎性因子表达的影响及机制

目的 探究生肌玉红膏对血栓性脉管炎大鼠血管平滑肌细胞凋亡、炎性因子表达的影响及机制。方法取40只大鼠,随机分为正常组、模型组、血管内皮祖细胞(EPC)干预组、生肌玉红膏组,每组10只,除正常组外,均建立血栓性脉管炎模型,正常组与模型组尾静脉每天1次输注1 mL生理盐水,EPC干预组输注数量为5×10⁵个EPC细胞后创面外敷生肌玉红膏,生肌玉红膏组创面外敷生肌玉红膏。将EPC细胞培养后观察细胞形态,检测IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-β₁表达,采用免疫荧光法检测CD34、CD133,TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡率,免疫印迹法检测内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达。结果 模型组大鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-β₁水平及平滑肌细胞数高于正常组(P均<0.05),EPC干预组以上指标均低于模型组(P均<0.05),生肌玉红膏组以上指标均高于EPC干预组(P均<0.05)。模型组大鼠血管组织中CD34、CD133及血管组织中VEGF、bFGF蛋白表达低...     

腺病毒介导的热休克蛋白70表达对神经元氧化应激损伤的保护作用

目的探讨重组腺病毒介导的HSP70表达对过氧化氢（H2O2）诱导的神经元和胶质细胞损伤的保护作用。方法用携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70感染体外培养的神经元和胶质细胞,RT-PCR、West-ern blotting检测靶细胞中外源性HSP70的表达。vAd-HSP70感染组、vAd-GFP感染组和未感染组细胞经0.5 mmol/L的H2O2处理后,MTT检测细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒检测细胞培养上清液中LDH活力,透射电镜观察细胞超微结构变化。结果vAd-HSP70感染组的细胞可检测到外源性HSP70基因表达。H2O2处理后,vAd-HSP70感染组细胞活力较其他组明显增强（P〈0.01）,vAd-HSP70感染组、vAd-GFP感染组、未感染组细胞培养上清液中LDH活力分别为（976&#177;106）、（1 332&#177;197）、（1 380&#177;121）,差异有统计学意义（P〈0.01）。电镜结果显示,vAd-HSP70感染组细胞膜较vAd-GFP感染组和未感染组完整清晰,无明显线粒体肿胀及细胞核溶解等不可逆损伤情况。结论腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗H2O2损伤,具有明确的细胞保护作用。     

不同时期外源性清蛋白输入对ARDS小鼠肺血管通透性的影响

目的研究急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠液体复苏时给予外源性清蛋白对肺血管通透性和含水量的影响。方法 144只昆明种小鼠,随机分为正常对照组和致伤组,致伤组分为未治疗组、体积分数0.1清蛋白治疗组、体积分数0.2清蛋白治疗组。采用脂多糖(LPS)15mg/kg腹腔注射制备小鼠模型,应用改良伊文思蓝渗出法测定模型制备后4、8、16、24h各组肺组织伊文思蓝渗出量及肺湿质量/干质量(W/D)比值的变化。结果各致伤组小鼠各时间点肺组织伊文思蓝渗出量与正常对照组比较差异均有显著性(F=2 124.232～8 642.934,q=64.601～176.626,P<0.05)。各致伤组小鼠各时间点肺W/D比值与正常对照组比较,差异均有显著性(F=32.434～173.547,q=9.601～27.651,P<0.05)。与未治疗组和体积分数0.1清蛋白治疗组比较,体积分数0.2清蛋白治疗组肺W/D比值明显减小(q=2.865～9.897,P<0.01)。结论体积分数0.2清蛋白能降低ARDS小鼠早期肺含水量,不增加肺血管通透性,有助于ARDS早期的治疗。