小鼠巨细胞病毒感染Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞

巨细胞病毒（ＣＭＶ）在人群中感染普遍,尤其对宿宿主免疫功能低下者危害更甚。ＣＭＶ的致病除因病毒增殖直接影响寄生的宿主外,还可能存在病毒感染后引起宿主免疫病理学改变的机制［１］。单核一巨噬细胞是抗原递呈细胞,亦为多种病毒的靶细胞。单核一巨噬细胞对病毒诱...     

人巨细胞病毒特异性T淋巴细胞检测的研究进展

人巨细胞病毒 (HCMV)是疱疹病毒的一种 ,在不同人群中的感染率为 5 0 %～ 90 %。初次感染后 ,在宿主免疫的控制下潜伏于骨髓等细胞中。当免疫功能受损时 (移植、获得性免疫缺陷综合征、肿瘤等 ) ,潜伏的病毒易被激活 ,严重者可引起致死性肺炎、肝炎[1] 。大量研究表明 ,特异性细胞免疫对HCMV感染的控制和疾病的恢复起重要作用 ,尤其是CD8+ T对控制HCMV感染更为重要[1,2 ] 。Cwynarski等[3 ] 研究发现 ,HCMV潜伏感染期 ,如特异性CD8+ T在免疫正常者中为 0 4～ 0 8× 10 7/L ;而肾移植受者为≥ 1× 10 7/L时 ,均可阻止病毒的激活…     

早期监测人巨细胞病毒激活感染的两种检测方法的比较

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)的低基质磷酸化蛋白 (pp6 5 )抗原血症检测与荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)方法 ,对不同人群中HCMV活动性感染的检测价值。方法　用 2种方法对从不同人群 (共 10 6例 )中收集的 2 0 4份血标本进行平行检测比较。结果　HCMVpp6 5抗原血症与血浆中HCMVDNA检测结果的一致性为 84 .8% ,相关性很高 (r=0 .86 1) ;与外周血多形核细胞 (PMNLs)中HCMVDNA检测结果的一致性为 79.8%。6例骨髓移植患者有 5例均在术后 30～ 5 0d间出现HCMVDNA拷贝数增加 ,同一时间PMNLs中HCMVDNA的拷贝数高于血浆 (81 7% )。免疫状况不同群体间HCMV激活程度不同 ,但无论有无免疫能力 ,有症状HCMV感染者HCMVDNA拷贝数平均值(7.71× 10 3 /ml)与HCMVpp6 5抗原阳染细胞数平均值 (10 4个 / 2× 10 5)均大于无症状HCMV感染者(1 5 3× 10 2 /ml;2 7个 / 2× 10 5)。结论　FQ PCR方法对监测低水平HCMV复制更为敏感 ,但HCMVpp6 5抗原血症检测对HCMV病的预测以及对抗HCMV药 (更昔洛韦 )的敏感性均高于DNA检测。两种方法的联合应用对监测HCMV活动性感染、临床疗效及预后更加客观、准确     

三株抗人巨细胞病毒pp65蛋白单克隆抗体的鉴定和应用

目的 制备抗HCMVpp65蛋白的单克隆抗体(简称单抗),并对其进行相关研究.方法 以重组表达的HCMVpp65蛋白为抗原,运用杂交瘤技术制备单抗,对获得的单抗进行Ig亚型、特异性、效价和亲和常数的鉴定与测定,并以免疫荧光检测法与进口同类产品进行比较.结果 获得3株针对HCMVpp65蛋白的单抗,即B6、G12、2B12;Ig亚型依次为IgG1κ型、IgG1κ型、IgMκ型;亲和常数依次为3.6×107 L/mol、3.8×107 L/mol、3.1×108 L/mol;免疫印迹试验结果表明,3株单抗都与HCMVpp65蛋白特异性的结合,除2B12外,B6、G12与EB病毒(EBV)、单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ、HSVⅡ均无交叉反应;与进口单抗平行检测140份临床标本,结果一致(r=1.00,P＞0.05).结论 成功获得3株稳定分泌抗HCMVpp65蛋白的杂交瘤细胞株,所产生的抗体特异性和亲和力较理想,为HCMVpp65蛋白抗原血症检测国产化试剂盒的研制奠定了基础.     

泌尿生殖道沙眼衣原体检测方法的评价

目的：泌尿生殖道沙眼衣原体的检测方法有多种,要求明确何种方法最适合于临床应用,方法：以聚合酶链反应（PCR）技术,免疫层析法（（ICA）和直接免疫荧光法（DFA）,分别对健康对照组和临床病人组的 泌尿生殖道分泌进行检测。结果：三种方法的结果经多类别多评估者的Kappa分析（P＜0．05）具统计学上的一致性,结论从操作的简便性,结果判断的客观性,ICA法最适于临床标本的应用。     

流式细胞术检测分析人巨细胞病毒核酸疫苗诱导宿主细胞免疫效应

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)pp65核酸疫苗对宿主细胞免疫功能的诱导效应。方法用自行构建的含HCMVpp65基因的重组质粒免疫小鼠,用流式细胞仪检测免疫小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化以及CD8 T细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4的情况,并以四甲基偶氮唑盐(MTT)增殖试验作补充验证。结果接种重组质粒组与仅接种空质粒或生理盐水对照组小鼠的免疫效应不同,表现为CD8 T细胞百分率增加(P<0.05),分泌细胞因子IFN-γ和IL-4的CD8 T细胞百分率亦增高(P<0.05),两者的平均荧光强度值增高更为显著(P<0.05)。免疫小鼠的脾脏T细胞经HCMVpp65蛋白刺激后,实验组的刺激指数(SI)较对照组明显增高(P<0.05)。结论HCMVpp65核酸疫苗接种可诱导宿主的细胞免疫反应,倾向于表现为细胞毒性T细胞(Tc)1和Tc2的混合应答以及脾脏T细胞的增殖效应。     

小鼠巨细胞病毒模型的建立

目的为了探讨巨细胞病毒的致病机理。方法４周龄Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠腹腔内接种小鼠巨细胞病毒（ＭＣＭＶ）。结果导致小鼠急性感染期体重下降，生长迟缓，唾液腺肿胀以至于死亡。唾液腺中检出高滴度感染性病毒（２．０×１０５ＰＦＵ／ｍｌ）。在小鼠３Ｔ３／Ｓｗｉｓａｌｂｉｎｏ细胞单层上形成的空斑清晰，易判断计数、镜检组织切片可见脑神经原细胞胞浆内包涵体。结论小鼠巨细胞病毒模型的建立为抗－ＣＭＶ有效药物的筛选以及对ＣＭＶ感染的预防、治疗提供了资料。     

人巨细胞病毒耐药相关蛋白PUL97局部结构模拟和突变分析

目的 初步探索人巨细胞病毒耐药相关蛋白PUL97局部序列（329-572aa）的三维模拟结构并进行突变的耐药分析.方法 采用巢式PCR方法扩增UL97基因776 bp片段并测序,以此发现非同义突变;然后利用SWISS-MODEL结构模拟综合服务器和其他相关软件比对模式对野生型PUL97蛋白片段进行同源模建并优化,通过各种指标或服务器来评估模拟结构的优劣并作筛选.将筛选所得的最佳模拟结构用于非同义新突变型的初步耐药分析.结果 最终筛选出的模拟结构是以1 YDTE为模板,以L1.FASTA为比对文件所得的Model A.整个分子的能量最低,ProQ的预测分数最高.分子对接分析也发现了潜在的ATP和GCV结合口袋.利用已知的阴阳性耐药点突变验证了该结构的合理性.同时根据突变前后结构信息的改变,提示C518Y单点突变以及联合突变（E517G和C518Y）呈现高度可疑的耐药特性.结论 PUL97野生型蛋白计算机结构模拟和突变分析法是初步评估新突变型耐药特性的又一方便快捷的方法,可用于实验验证前的筛选;但模拟结构本身的准确性是成功运用该方法的前提.     

MHC-Ⅰpep四聚体技术检测人类巨细胞病毒特异性细胞免疫功能的新进展

人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）属疱疹病毒β亚科,人群的感染率为80%～90%.大量研究表明,机体感染HCMV的后果主要决定于机体的免疫功能,尤其是特异性T细胞的功能对HCMV感染的控制和恢复起主要作用.